潔凈區(qū)環(huán)境檢驗檢測作業(yè)指導(dǎo)書

潔凈區(qū)環(huán)境檢驗檢測作業(yè)指導(dǎo)書1目的規(guī)定潔凈區(qū)的控制指標和檢測方法，有效的控制潔凈車間和實驗室潔凈區(qū)環(huán)境的潔凈度，滿足生產(chǎn)和檢測環(huán)境的要求。2范圍本規(guī)程適用本公司潔凈區(qū)環(huán)境的潔凈度檢驗。3職責化驗員負責潔凈環(huán)境檢測各項技術(shù)要求的檢驗。4.工作程序4.1檢驗項目溫度、濕度、壓差、風速（換氣次數(shù)）、塵埃粒子數(shù)、菌落數(shù)。4.2溫度、濕度4.2.1要求潔凈區(qū)溫度（18-28）℃，相對濕度（45-65）%4.2.2儀器與設(shè)備溫濕度計溫濕度計必須在檢定合格周期內(nèi)4.2.3操作方法目測溫濕度計4.2.4測定頻次1次/班4.3壓差4.3.1要求潔凈室與室外壓差≥10Pa，潔凈室與非潔凈室≥5Pa，不同級別潔凈室之間≥5Pa。4.3.2儀器與設(shè)備微壓計微壓差計或手持式數(shù)顯壓差計須在檢定合格周期內(nèi)。4.3.3操作方法用微壓計或數(shù)顯壓差計測試各室的靜壓力，由兩室靜壓力之差，為靜壓差。4.3.4測定頻次1次/月4.4換氣次數(shù)/風速4.4.1要求如表1所示：表1各級別潔凈區(qū)風速的技術(shù)指標級別100級10000級100000級300000級風速m/s水平層流≥0.4——————垂直層流≥0.3換氣次數(shù)次/h——≥25≥15≥124.4.2儀器與設(shè)備風速計風速計必須在檢定合格周期內(nèi)。4.4.3操作方法444.4.4測定頻次：1次/月4.5塵埃粒子數(shù)4.5.1要求如表2所示：表2各級別潔凈區(qū)塵埃粒子數(shù)的技術(shù)指標級別100級10000級100000級300000級塵埃數(shù)粒/m3≥0.5μm≤3500≤350000≤3500000≤≥5.0μm0≤2000≤20000≤600004.5.2儀器與設(shè)備塵埃粒子計數(shù)器4.5.3內(nèi)容（1）用塵埃粒子計數(shù)儀在高度0.8米水平面上的位置采樣，總采樣次數(shù)不少于5次。（2）最少采樣點數(shù)目的確定如3表所示：表3：最少采樣點數(shù)目面積m2潔凈度級別100級10000級100000級300000級＜102～3222≥10～＜204222≥20～＜408222≥40～＜10016422≥100～＜200401033≥200～＜400802066≥400～＜1000160401313≥1000～＜20004001003232≥20008002006363注：對于100級的單向流潔凈室（區(qū)），包括100級潔凈工作臺，面積指的是送風口表面積；對于10000級以上的單向流潔凈室（區(qū)），面積知道是房間面積。（3）采樣點的位置采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。采樣點多余5點事，也可以在離地面0.8m至1.5m高度區(qū)域內(nèi)分層分布，但每層不少于5點。采樣點分布見附錄A（4）采樣次數(shù)的限定對任何小潔凈室（區(qū)）或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點的數(shù)目不得小于2個，總采樣次數(shù)不得少于5次。每個采樣點的采樣次數(shù)可以多余一次，且不同采樣點的采樣次數(shù)可以不同。（5）采樣量不同潔凈度級別每次最小采樣量見表4表4最小采樣量最小采樣量L/次潔凈度級別100級10000級100000級300000級≥0.5μm5.662.832.832.83≥5.0μm8.58.58.58.5（6）采樣注意事項對于單向流潔凈室（區(qū)），粒子計數(shù)器的采樣管口應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區(qū)），粒子計數(shù)器的采樣管口宜朝上。布置采樣點是應(yīng)盡量避開風口。采樣時，測試人員應(yīng)在采樣口的下風側(cè)，并盡量少活動。采樣完畢后，宜對粒子計數(shù)器進行自凈。應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染。4.5.4采樣結(jié)果的計算（1）采樣點的平均懸浮粒子濃度A采樣點的平均懸浮粒子濃度A的計算公式：式中：A—某一采樣點的平均粒子濃度，粒每立方米（粒/m3）Ci—某一采樣點的粒子濃度（i=1,2,3，…，n）,粒每立方米（粒/m3）n—某一采樣點的采樣次數(shù)，次（2）平均值的均值M平均值的均值M的計算公式：式中：M—平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒每平方米（粒/m3）Ai—某一采樣點的平均粒子濃度（i=1,2,3，…，n），粒每平方米（粒/m3）L—某一潔凈室（區(qū)）內(nèi)的總采樣點數(shù)，個（3）標準差SE標準差SE的計算公式：式中：SE—平均值均值的標準誤差，粒每平方米（粒/m3）（4）95％置信上限（UCL）95％置信上限（UCL）計算公式：UCL—平均值均值的95％置信上限，粒每平方米（粒/m3）t—95％置信上限的t分布系數(shù)，見表5采樣點數(shù)L23456789＞9t6.312.922.352.132.021.941.901.86——注：當采樣點數(shù)多于9時，不需要計算UCL4.5.5結(jié)果的判定判斷懸浮粒子的潔凈度級別應(yīng)同時滿足以下兩個條件每個采樣點的平均懸浮粒子濃度必須不大于規(guī)定的級別界限，即Ai≤級別極限；全部采樣點的懸浮粒子濃度平均值均值的95％置信上限必須不大于規(guī)定的級別極限，即UCL≤級別界限。4.5.6測定頻次1次/月4.6沉降菌4.6.1要求（1）判定標準如表6所示潔凈度級別100級10000級100000級沉降菌/皿，0.5h≤1≤3≤10（2）最少采樣點數(shù)目最少采樣點數(shù)目見表3（3）采樣點位置工作區(qū)采樣點位置離地面0.8m～1.5m（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。采樣點位置分布見附錄A（4）最少培養(yǎng)皿數(shù)在滿足最少采樣點數(shù)目的同時，還需滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表7潔凈度級別最少培養(yǎng)皿數(shù)（?90mm）1001410000210000023000002（5）采樣次數(shù)每個采樣點一般采樣一次4.6.2儀器與設(shè)備儀器設(shè)備包括：培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器培養(yǎng)皿：采用?90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基或沙氏培養(yǎng)基。配制方法見附錄B。恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行校驗。4.6.3測試步驟（1）測試前，培養(yǎng)皿表面需嚴格消毒。（2）將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣要求逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。（3）靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30min以上；動態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間不大于4h。（4）全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（5）采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5d。（6）每次采樣應(yīng)有對照試驗，避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程中造成影響，每次或每個區(qū)域取不低于1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌生長。（7）每批培養(yǎng)皿應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)皿在使用前已被污染。每批可選定不少于3個培養(yǎng)皿作為批對照培養(yǎng)。4.6.4采樣注意事項（1）對于單向流潔凈室（區(qū)）或送風口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區(qū)），采樣口向上。（2）布置采樣點時，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風口。（3）采樣時，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風側(cè)，并盡量少走動。（4）應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。4.6.5菌落計數(shù)（1）用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)。（2）若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。（3）當某個測試點有多個培養(yǎng)皿時，可計算單個培養(yǎng)皿的沉降菌平均菌落數(shù)，計算公式如下：式中：—平均菌落數(shù)Mn—n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)n—培養(yǎng)皿總數(shù)4.6.5結(jié)果的判定（1）每個測點的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定標準中的界限（2）在靜態(tài)測試時，若某個測點的沉降菌平均菌落數(shù)超過評定標準，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判定合格。1次/月4.7浮游菌（1）判定標準如表8所示潔凈度級別100級10000級100000級浮游菌/m3≤5≤100≤500（2）最少采樣點數(shù)目最少采樣點數(shù)目見表3（3）采樣點的位置工作區(qū)測點位置離地0.8m～1.5m左右送風口測點位置離開送風面30cm左右可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點采樣點布置的規(guī)則見附錄A。（4）最小采樣量浮游菌每次最小采樣量見表9所示表9最小采樣量潔凈度級別采樣量L/次100級100010000級500100000級100300000級100（5）采樣次數(shù)每個采樣點一般采樣一次儀器與設(shè)備包括：浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。培養(yǎng)皿：采用?90mm×15mm規(guī)格培養(yǎng)皿。培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基或沙氏培養(yǎng)基，其配制方法見附錄B。恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行校驗。4.7.3測試步驟（1）測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒（2）采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑消毒，用于100級潔凈室的采樣器宜預(yù)先放置在被測房間內(nèi)。（3）消毒劑擦拭培養(yǎng)皿的外表面。（4）采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外表面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴灑罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。（5）采樣口和采集管，使用前必須高溫滅菌，如用消毒劑對對采集管內(nèi)外壁進行消毒時，應(yīng)將管中殘留液倒掉并晾干。（6）采樣者應(yīng)穿戴被測潔凈區(qū)相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手消毒劑消毒或戴無菌手套操作。（7）采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘留消毒劑蒸發(fā)，時間不宜少于5min，并檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時間。（8）關(guān)閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。（9）置采樣口于采樣點后，開啟浮游菌采樣器進行采樣。（10）全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5d。（11）每次采樣應(yīng)有對照試驗，避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程中造成影響，每次或每個區(qū)域取不低于1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌生長。（12）每批培養(yǎng)皿應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)皿在使用前已被污染。每批可選定不少于3個培養(yǎng)皿作為批對照培養(yǎng)。4.7.4采樣注意事項（1）所使用儀器必須在檢定有效期內(nèi)（2）采樣管嚴禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。（3）使用前應(yīng)仔細檢查每一個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。（4）對培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件及其他參數(shù)詳細記錄。（3）采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測點的高度定，盡量減少彎曲。4.7.5菌落計數(shù)（1）用肉眼對培養(yǎng)皿上所有菌落直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。（2）若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。（3）每個測點的浮游菌平均濃度的計算公式如下：（4）由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落和培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。4.7.6結(jié)果判定（1）每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。（2）在靜態(tài)測試時，若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判定為符合。4.7.7測定頻次1次/月4.8日常監(jiān)控（1）對于壓差及溫濕度的日常監(jiān)控，在工作階段，每天早晚各一次記錄工作場所的微壓差計及溫濕度計的度數(shù)。（2）塵埃粒子、浮游菌及沉降菌除定期檢測外不做日常監(jiān)控，但在出現(xiàn)以下情況時，需對潔凈區(qū)相關(guān)項目做重新檢測：停工時間比預(yù)計時間延長關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在在生產(chǎn)期間，空氣凈化系統(tǒng)進行任何重大維修日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)消毒規(guī)程的改變引起生物污染的事故等當生產(chǎn)設(shè)備有重大維修或增加設(shè)備時當潔凈區(qū)（室）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動時附錄A潔凈室（區(qū)）采樣點布置潔凈室（區(qū)）采樣點布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區(qū)域過于稀疏。下列多采樣點布置圖示可做參考:100級單向流區(qū)域，潔凈工作臺或局部空氣凈化設(shè)施的采樣點宜布置在正對氣流方向的工作面上，氣流形式可參考下圖：水平單向流的氣流形式：→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→垂直單向流的氣流形式：↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓附錄B培養(yǎng)基的滅菌及準備1、大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）培養(yǎng)基的滅菌及準備培養(yǎng)基采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，可以按照以下處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)的符合要求的脫水培養(yǎng)基。配制后按培養(yǎng)基規(guī)定的經(jīng)驗證合格的滅菌程序滅菌。大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基配方酪蛋白胰酶消化物………15g大豆粉木瓜蛋白酶消化物………………5g氯化鈉……………………5g瓊脂………………………15g純化水………………1000ml取上述成分除瓊脂，混合，微熱溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱融化后，分裝、滅菌，冷卻至約60℃，在無菌操作要求下傾注約20ml至無菌平皿（?90mm）中。加蓋后再室溫放至凝固。3、沙氏培養(yǎng)基（SDA）培養(yǎng)基的滅菌及準備葡萄糖……………