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DB34DB34/T2814—2017玉蜀黍赤霉檢疫鑒定方法DetectionandidentificationofGibberellazeae(Schwein.)Petch2017-03-30發(fā)布2017-04-30實(shí)施安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)學(xué)名:Gibberellazeae(Schwei分類(lèi)地位:真菌界(Fungi),子囊菌門(mén)(Ascomycota),糞殼菌綱(Sordariomycetes)根據(jù)玉蜀黍赤霉在寄主上的為害癥狀(參見(jiàn)附錄A),培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落、菌絲、分生孢子等形5.2.1除另有規(guī)定外,所有試劑均為分析純或生20mmol/LEDTA-Na2蛋白酶K(20mg/mL苯酚:氯仿:異戊醇(25:2425.2.4PCR試劑:10×PCRbuff),5.2.6馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA馬s,無(wú)菌水洗滌3次,滅菌濾紙吸干水分后置于3隔的分生孢子28μm~40μm×4μm~5μm、5隔的分生孢子30μm~55μm9)隔的分生孢子45μm~60μm×4.5μm~6μm。子囊殼卵圓形或圓錐形,深藍(lán)至紫黑色,頂端有瘤狀μm~11μm,內(nèi)含8個(gè)子囊孢子。子囊孢子無(wú)色,紡錘形,兩端鈍圓,多為三個(gè)隔膜,大小18μm~3從檢測(cè)樣品中分離并鑒定為玉蜀黍赤霉的菌株,應(yīng)妥善保存。將菌株接種PDA培養(yǎng)基斜面上,25℃~28℃培養(yǎng)5d,然后4℃冰箱保存,或?qū)⒕z塊轉(zhuǎn)入20%滅菌甘油并混勻,-80℃長(zhǎng)期保存。4(資料性附錄)56B.1.1.3加入等體積的苯酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)溶液,顛倒混勻,12000rpm離CCCACTCAGGTTGATTTTCPCRbuffer(含25mmol/LM7PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè),陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)一條192
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