(10-11-2)實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌革蘭氏染色.ppt

1、實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌革蘭氏染色,目的：1、了解細(xì)菌革蘭氏染色的原理 2、學(xué)習(xí)及掌握革蘭氏染色方法內(nèi)容： 1、涂片 2、革蘭氏染色,細(xì)菌染色的目的意義：,細(xì)菌菌體微小、而且折光率低，在顯微鏡下特別是在油浸物鏡下幾乎與背景無反差，很難看清楚，如將其染色，使折光率增大，便容易觀察。由于菌體的性質(zhì)及各部分對某些染料的著色性不同，因此可以利用不同的染色方法來區(qū)別不同的細(xì)菌及其結(jié)構(gòu)。,染色劑（染料）：,是苯環(huán)上含有發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)的化合物。發(fā)色基團(tuán)使化合物本身具有染色之能力，助色基團(tuán)有電離特性，可以于被染物結(jié)合，使被染物著色。,涂片染色程序：涂片 自然干燥 固定 染色 干燥 鏡檢,大腸桿菌、枯草桿菌,水,1、草

2、酸銨結(jié)晶紫染1-2 min（染料著染）水洗； 2、革蘭氏碘液染1-3 min（媒染劑媒染）水 洗； 3、酒精脫色30s-1 min（脫色劑）水洗 4、稀釋的石炭酸復(fù)紅10-30s（復(fù)染）水洗。 干燥鏡檢。,革蘭氏染色步驟為：紫、碘、酒、紅四步,革蘭氏染色可將所有的細(xì)菌分為兩大類，藍(lán)紫色的革蘭氏陽性菌和紅色的革蘭氏陰性菌。是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。,革蘭氏染色原理： 細(xì)菌細(xì)胞壁的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)不同 。,G+ 菌細(xì)胞壁,G-菌細(xì)胞壁,革蘭氏陽性菌：細(xì)胞壁肽聚糖層厚，交聯(lián)而成的肽聚糖網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)致密，經(jīng)乙醇處理發(fā)生脫水作用，使孔徑縮小，通透性降低，結(jié)晶紫與碘形成的大分子復(fù)合物保留在細(xì)胞內(nèi)而不被

3、脫色，結(jié)果使細(xì)胞呈現(xiàn)紫色。革蘭氏陰性菌：細(xì)胞壁肽聚糖層薄，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)交聯(lián)少，類脂含量較高， 經(jīng)乙醇處理后，類脂被溶解，細(xì)胞壁孔徑變大，通透性增加，結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物被溶出細(xì)胞壁，因而細(xì)菌細(xì)胞被脫色，再經(jīng)石炭酸復(fù)紅復(fù)染后細(xì)胞呈紅色。,圖示革蘭氏染色步驟,涂片,草酸銨結(jié)晶紫,碘 液,95%酒精,稀釋的 石 炭酸復(fù)紅,自然干燥,媒染 2-3min,脫色2030s,固定,初染1min,復(fù)染1030s,干燥鏡檢,接種環(huán),蒸餾水,革蘭染色結(jié)果,大腸桿菌,革蘭氏染色時注意事項(xiàng)：1、要用幼齡培養(yǎng)物作革蘭氏染色；2、涂片不宜太厚，以免脫色不完全造成假陽性,思考題：1、革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟是什么？2、當(dāng)你對未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時，怎樣保證操作正確，結(jié)果可靠？3、進(jìn)行革蘭氏染色時注意那些事項(xiàng)？ 作業(yè)：原理、方法、結(jié)果、分析討論及繪圖 繪圖：繪出用革蘭氏染色法染出的細(xì)菌形