醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料

1、蛋白質(zhì)、糖蛋白與蛋白聚糖、脂蛋白、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)名詞解釋：1、構(gòu)型：指一個(gè)有機(jī)分子中各個(gè)原子特有的固定的空間排列。這種排列不經(jīng)過共價(jià)鍵的斷裂和重新形成是不會(huì)改變的。不同構(gòu)型之間相互轉(zhuǎn)化會(huì)涉及化學(xué)鍵的斷裂，構(gòu)型的改變往往使分子的光學(xué)活性發(fā)生變化。2、構(gòu)象：構(gòu)成分子的原子和基團(tuán)因?yàn)榛瘜W(xué)鍵的旋轉(zhuǎn)而形成在三維空間的不同的排布、走向。不同的構(gòu)象之間可以相互轉(zhuǎn)化而不涉及化學(xué)鍵的破裂。構(gòu)象改變不會(huì)改變分子的光學(xué)活性。3、肽平面：肽鍵具有部分雙鍵性質(zhì)而不能自由旋轉(zhuǎn)，這樣C、N原子同它們連接的O、H和兩個(gè)C共六個(gè)原子就被約束在一個(gè)剛性平面上，這個(gè)平面被稱為肽平面。4、基序或模體：相鄰的幾個(gè)二級(jí)結(jié)構(gòu)相互作用形成有規(guī)

2、則的組合體稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu)，是特殊的序列或結(jié)構(gòu)的基本組成單元，又稱為基序或模體。5、結(jié)構(gòu)域：蛋白質(zhì)的超二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)一步組合折疊成半獨(dú)立緊密的球狀結(jié)構(gòu)域。6、糖蛋白：在分子組成中以蛋白質(zhì)為主，其一定部位以共價(jià)鍵與若干糖鏈（約4%）相連所構(gòu)成的分子。7、蛋白聚糖：蛋白聚糖是一類由蛋白質(zhì)和糖胺聚糖通過共價(jià)鍵相連而成的化合物，其分子中的含糖量通常為50%90%。8、血脂：血漿所含的脂類統(tǒng)稱為血脂，它包括甘油三酯、磷脂、膽固醇及游離脂酸。9、血漿脂蛋白：在血漿中血脂與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成血漿脂蛋白。10、載脂蛋白：血漿脂蛋白中蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白。11、脂蛋白受體：脂蛋白受體是一類位于細(xì)胞膜上的糖蛋白，它們能

3、以高親和性的方式與其相應(yīng)的脂蛋白配體相互作用，介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)脂蛋白的攝取和代謝，從而進(jìn)一步調(diào)節(jié)血漿脂蛋白和血脂的水平。12、細(xì)胞通訊（cell communication）：指一個(gè)細(xì)胞發(fā)出的信息通過介質(zhì)傳遞到另一個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)反應(yīng)的過程。13、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（signal transduction）：指外界信號(hào)（如光、電、化學(xué)分子）與細(xì)胞細(xì)胞表面受體作用，通過影響細(xì)胞內(nèi)信使的水平變化，進(jìn)而引起細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)的一系列過程。14、第二信使：在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息的小分子化學(xué)物質(zhì)稱為第二信使(secondary messenger) 。15、第三信使：負(fù)責(zé)細(xì)胞核內(nèi)、外信息傳遞的物質(zhì)稱為第三信使(third messe

4、nger) ，又稱為DNA結(jié)合蛋白。16、受體(receptor)：是指存在于靶細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能特異識(shí)別與結(jié)合生物活性分子（配體），進(jìn)而引起靶細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的分子。17、配體(ligand)：能與受體呈特異性結(jié)合的生物活性分子,包括細(xì)胞間信息物質(zhì)、藥物、維生素、毒物等。18、鈣調(diào)蛋白（CaM）：是一種分子量為17kD，耐熱、耐酸的蛋白質(zhì)，由148個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成。一分子的鈣調(diào)蛋白可結(jié)合四分子的Ca2+。當(dāng)其與Ca2+結(jié)合后，可發(fā)生變構(gòu)，從而激活依賴鈣調(diào)蛋白的蛋白激酶。19、IP3：為三磷酸肌醇，胞外信息分子與相應(yīng)質(zhì)膜G蛋白偶聯(lián)性受體結(jié)合，使G蛋白q、11、15、或16活化，從而使磷脂酶C（P

5、I-PLC）活化，后者作用于膜內(nèi)側(cè)4,5-二磷酰磷脂酰肌醇（PIP2）使之水解生成IP3及DG。20、PKC：存在于胞液中，可催化底物蛋白質(zhì)絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化，有12種同工酶。經(jīng)典的蛋白激酶C需在Ca2+，DAG和磷脂酰絲氨酸（PS）的存在下才能被激活。21、孤兒受體：是指存在細(xì)胞膜中的一類甾類或者腎甲狀腺類激素受體，但是還沒有找到相應(yīng)的配體，故稱之為孤兒受體。簡(jiǎn)答題1、糖蛋白中聚糖與多肽鏈的連接方式 N-糖苷鍵型：寡糖鏈（GlcNAC的-羥基）與Asn的酰胺基、N-未端的a-氨基、Lys或Arg的W-氨基相連 O-糖苷鍵型：寡糖鏈（GalNAC的-羥基）與Ser、Thr和羥基賴氨酸、

6、羥脯氨酸的羥基相連。 S-糖苷鍵型：以半胱氨酸為連接點(diǎn)的糖肽鍵。 酯糖苷鍵型：以天冬氨酸、谷氨酸的游離羧基為連接點(diǎn)。2、簡(jiǎn)述糖蛋白的生物學(xué)功能（1）糖蛋白攜帶某些蛋白質(zhì)代謝去向的信息。糖蛋白寡糖鏈末端的唾液酸殘基，決定著某種蛋白質(zhì)是否在血流中存在或被肝臟除去的信息。（2）寡糖鏈在細(xì)胞識(shí)別、信號(hào)傳遞中起關(guān)鍵作用。淋巴細(xì)胞正常情況應(yīng)歸巢到脾臟，而切去唾液酸后，結(jié)果競(jìng)歸巢到了肝臟。在原核中表達(dá)的真核基因，無法糖基化。（3）有些糖蛋白的糖對(duì)于糖蛋白自身成機(jī)體起著保護(hù)作用或潤滑作用。（4）細(xì)胞表面的糖蛋白形成細(xì)胞的糖衣、參與細(xì)胞的粘連，這在胚和組織的生長(zhǎng)、發(fā)育以及分化中起著關(guān)鍵性作用。3、糖蛋白分子中聚

7、糖的功能（一）聚糖可影響糖蛋白生物活性 保護(hù)糖蛋白不受蛋白酶的水解，延長(zhǎng)其半衰期； 蛋白質(zhì)的聚糖也可起屏障作用，影響糖蛋白的作用； 聚糖還可以避免蛋白質(zhì)中抗原決定簇被免疫系統(tǒng)識(shí)別而產(chǎn)生抗體。 （二）糖蛋白聚糖加工可參與新生肽鏈折疊 糖蛋白的糖基化與肽鏈的折疊及分揀密切相關(guān) 。 參與新生肽鏈的折疊并維持蛋白質(zhì)的正確的空間構(gòu)象； （三）糖蛋白聚糖可參與維系亞基聚合具有功能的糖蛋白的二聚體，往往依靠糖-蛋白或糖-糖相互作用維系亞基的聚合和構(gòu)象。 （四）聚糖對(duì)蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的分揀、投送和分泌中的作用有些蛋白質(zhì)的投送信號(hào)存在于肽鏈內(nèi)，但有些是與其糖鏈有關(guān)。 4、簡(jiǎn)述糖蛋白、蛋白聚糖在結(jié)構(gòu)、功能上的異同

8、在結(jié)構(gòu)上：糖蛋白與蛋白聚糖都是蛋白質(zhì)與糖類以共價(jià)鍵結(jié)合形成復(fù)合物，其中糖蛋白分子中的含糖量為2% 50%，蛋白聚糖的含糖量為50% 90%。糖蛋白分子由聚糖和核心蛋白組成，蛋白聚糖分子通常由糖胺聚糖和核心蛋白兩部分組成。糖蛋白分子中糖的數(shù)目常為一至數(shù)百個(gè)，蛋白聚糖分子中糖的數(shù)目巨大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過糖蛋白中糖的含量。糖蛋白中糖的結(jié)構(gòu)形式為由若干單糖連接而成的糖鏈與氨基酸側(cè)鏈相連，蛋白聚糖的結(jié)構(gòu)形式通常由若干二糖重復(fù)單位構(gòu)成的糖鏈與氨基酸側(cè)鏈相連。在功能上:糖蛋白攜帶某些蛋白質(zhì)去向的信息；寡糖鏈細(xì)胞識(shí)別、信號(hào)傳遞過程中起關(guān)鍵作用；有些糖蛋白的糖對(duì)于糖蛋白自身起著保護(hù)作用或潤滑作用；細(xì)胞表面的糖蛋白還形成

9、細(xì)胞的糖衣、參與細(xì)胞的粘連，這在胚胎和組織的生長(zhǎng)、發(fā)育以及分化中起著關(guān)鍵性的作用。蛋白聚糖最主要的功能是構(gòu)成細(xì)胞間的基質(zhì)分布于任何組織中；某些蛋白聚糖還有特殊作用，如肝素是重要的抗凝劑，透明質(zhì)酸可以吸附大量水分子，使組織疏松，細(xì)胞易于移動(dòng)，等等。5、簡(jiǎn)述血漿脂蛋白的代謝及功能血漿脂蛋白包括乳糜微粒（CM）、極低密度脂蛋白（VLDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）。人體內(nèi)血漿脂蛋白的代謝途徑主要有三條：（1）外源性代謝途徑：指小腸利用飲食攝入的膽固醇和甘油三酯等合成CM及其代謝過程；（2）內(nèi)源性代謝途徑：指由肝臟合成VLDL，后者轉(zhuǎn)變?yōu)镮DL和LDL，LDL被肝臟或其他器官代謝

10、的過程；（3）膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)途徑:指HDL代謝過程，即將膽固醇帶到肝臟并代謝的過程。功能：CM參與轉(zhuǎn)運(yùn)外源性甘油三酯及膽固醇酯；VLDL參與轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源性甘油三酯；LDL將肝合成的內(nèi)源性膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至肝外組織；而HDL與LDL相反，它主要是將組織的內(nèi)源性膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟代謝。6、簡(jiǎn)述載脂蛋白的基因結(jié)構(gòu)人apoaA、apoA、apoA、apoC、apoC及apoE基因的結(jié)構(gòu)頗為相似：（1）除apoA基因缺少第一個(gè)內(nèi)含子外，其余載脂蛋白基因均含有四個(gè)外顯子和三個(gè)內(nèi)含子，內(nèi)含子插入到基因組的5非翻譯區(qū)；內(nèi)含子插入到緊鄰信號(hào)肽基因酶切位點(diǎn)的密碼區(qū)；內(nèi)含子則插入到成熟肽基因酶切位點(diǎn)的密碼區(qū)。（2）它們的前3個(gè)

11、外顯子核苷酸長(zhǎng)度非常接近，總mRNA長(zhǎng)度差異主要是由于第四個(gè)外顯子不同而造成的。7、簡(jiǎn)述Lp（a）的結(jié)構(gòu)與功能Lp（a）的脂質(zhì)成分類似于LDL，但其所含的載脂蛋白部分除一分子apoB100外，還含有一分子apo（a），Lp（a）的內(nèi)核為疏水性脂質(zhì)，外周包裹著蛋白質(zhì)和磷脂復(fù)合物。功能：有研究表明，Lp(a)是動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一，Lp(a)在血液中的含量分布差別極大(0100mg/dL)；當(dāng)Lp(a) 30 mg/dL 時(shí)，表明As危險(xiǎn)性增高。所以血液中Lp（a）的水平的高低可以作為As危險(xiǎn)因素的檢測(cè)指標(biāo)之一。8、簡(jiǎn)述LDL受體的基因缺陷及與疾病的關(guān)系 LDL受體缺陷是常染色體顯性遺傳

12、病，為L(zhǎng)DL受體基因突變所致，患者如為純合子則細(xì)胞膜LDL受體完全缺失；如為雜合子則細(xì)胞膜LDL受體數(shù)目減少一半，LDL受體缺陷有三種不同的情況：無受體結(jié)合活性，稱R0；受體結(jié)合活性降低（為正常的1% 10%），稱Rb-；受體活性正常，但不能內(nèi)吞，即LDL不能進(jìn)入細(xì)胞。LDL受體缺陷將導(dǎo)致血漿LDL分解減少，而IDL轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)DL的量增加，使血漿LDL顯著增加，是引起家族性高膽固醇血癥的重要原因。9、受體作用的特點(diǎn)高度特異性、高度親和力、可逆性、可飽和性、可被調(diào)節(jié)性、協(xié)同性與放大效應(yīng)。10、簡(jiǎn)述受體測(cè)定的基本原理用放射性核素標(biāo)記的配體，使之選擇性結(jié)合于受體的結(jié)合部位，然后用離心、過濾等方法快速分

13、離與受體結(jié)合及游離的配體，進(jìn)行放射量測(cè)定，即可獲得受體的最大結(jié)合量、親和力大小，有無協(xié)同效應(yīng)等。配體與受體的結(jié)合是可逆的，可飽和的，其反應(yīng)式為： （1）L為游離配體濃度 R為游離受體濃度 LR為配體-受體復(fù)合物濃度k1為正向反應(yīng)速率常數(shù)， k2為反向反應(yīng)速率常數(shù)當(dāng)反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，正反應(yīng)速率等于反向反應(yīng)速率，即k1LR= k2LR （2）令Kd=k2k1， 則Kd=LRLR （3） 當(dāng)受體的一半與配體結(jié)合時(shí)，即LR=R，則Kd=L，所以Kd是配體與受體反應(yīng)達(dá)到半飽和時(shí)配體的濃度。由（3）式可得，Kd越小，則LR解離越少，即受體與配體的親和力越大，反之，Kd越大，表明LR解離大，表明配體與受體的親

14、和力越小。因此，Kd又稱為受體的親和力常數(shù)。 由（3）式可得： LRL=-LR Kd + BmaxKd作圖：從上圖的Scatchard作圖可測(cè)得：受體的最大結(jié)合容量Bmax，代表受體的數(shù)量；受體的親和力常數(shù)Kd值；受體與配體的結(jié)合有無協(xié)同效應(yīng)。11、簡(jiǎn)述G蛋白的概念、分類及及在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的作用G蛋白又稱鳥苷酸結(jié)合蛋白，是一類能與鳥苷酸可逆結(jié)合的膜蛋白，是由、和三個(gè)亞基組成的異三聚體，和亞基總是緊密結(jié)合在一起作為一個(gè)功能單位G 。G蛋白偶聯(lián)受體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：這些受體均為具有7次跨膜的螺旋結(jié)構(gòu)的7螺旋跨膜蛋白，肽鏈形成7個(gè)由疏水氨基酸組成的-螺旋，反復(fù)7次穿過細(xì)胞的脂質(zhì)雙層膜。這類受體在結(jié)構(gòu)上均

15、為單體蛋白，氨基末端位于細(xì)胞外表面，羧基末端在胞膜內(nèi)側(cè)。完整的肽鏈要反復(fù)跨膜七次，稱為七次跨膜受體。G蛋白在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的作用有：（1）調(diào)節(jié)腺苷酸環(huán)化酶的活性；（2）調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜cGMP磷酸二酯酶的活性；（3）調(diào)節(jié)磷脂酶C的活性；（4）調(diào)節(jié)離子通道的功能。12、簡(jiǎn)述cAMP-PKA、IP3-DG-PKC及受體酪氨酸蛋白激酶信號(hào)傳遞途徑cAMP-PKA信號(hào)傳遞途徑：IP3-DG-PKC信號(hào)傳遞途徑：激素+受體G蛋白PI-PLCIP3+DGIP3誘導(dǎo)釋放Ca2+，Ca2+促進(jìn)DG激活PKC底物蛋白磷酸化影響細(xì)胞代謝或基因表達(dá)受體酪氨酸蛋白激酶信號(hào)傳遞途徑：生長(zhǎng)因子酪氨酸蛋白激酶受體Grb2（含SH

16、2/SH3）Sos（GEF活性） RasGDP（無活性） RasGTP（有活性） MAP蛋白激酶 MEK（MAPKK） Raf（絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶） （絲/蘇氨酸蛋白激酶 （酪/蘇氨酸蛋白激酶） 醫(yī)學(xué)常用技術(shù)名詞解釋1、電泳：是指帶電粒子在電場(chǎng)中向與自身所帶電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。2、電泳技術(shù) : 利用電泳現(xiàn)象對(duì)混合物進(jìn)行分離分析的技術(shù)。3、電滲現(xiàn)象：液體在電場(chǎng)中對(duì)于一個(gè)固體支持物的相對(duì)移動(dòng)，稱為電滲現(xiàn)象。4、不連續(xù)凝膠電泳：指在電泳系統(tǒng)中采用了兩種或兩種以上的緩沖液、pH值和孔徑，不連續(xù)電泳能使稀的樣品在電泳過程中濃縮成層，從而提高分辨能力。5、核酸分子雜交 ： 是在DNA變性和復(fù)性的

17、基礎(chǔ)上建立起來的一種分子生物學(xué)技術(shù)。 其原理是具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下根據(jù)堿基互補(bǔ)的原則可以形成雙鏈(堿基對(duì)之間非共價(jià)健形成穩(wěn)定的雙鏈)。6、核酸探針：是指用放射性核素、生物素或其他活性物質(zhì)標(biāo)記而便于檢測(cè)的，能與特定的核酸序列發(fā)生特異性互補(bǔ)的已知DNA或RNA片段。7、cDNA 探針：cDNA探針是指互補(bǔ)于mRNA的DNA分子，是由逆轉(zhuǎn)錄酶催化而產(chǎn)生的。該酶以RNA為模板，根據(jù)堿基配對(duì)原則，按照RNA的核苷酸順序合成DNA（其中U與A配對(duì)）， 無內(nèi)含子和非編碼序列。 8、原位雜交：不須提取DNA或RNA。直接用培養(yǎng)/采集的細(xì)胞（涂載玻片上）、組織切片（固定載玻片上）和細(xì)菌菌落（

18、復(fù)印至濾膜上）與標(biāo)記核酸探針雜交。 可測(cè)知特定基因的存在或表達(dá)狀況。還可觀察被測(cè)基因在細(xì)胞內(nèi)或染色體上的定位。9、Southern 印跡雜交：是一種將待測(cè)DNA酶切、電泳、轉(zhuǎn)移（?。┎⒐潭ㄔ诠滔嘀С治锷希靡阎狣NA探針進(jìn)行檢測(cè)的方法。10、Northern印跡雜交：這是一種將待測(cè)RNA從瓊脂糖凝膠中轉(zhuǎn)印并固定到膜上、然后再與已知的DNA或RNA探針雜交的方法。11、PCR：PCR技術(shù)實(shí)際上是在模板DNA，引物和4種脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）存在的條件下依賴DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。12、平臺(tái)期(Plateau)：PCR反應(yīng)初期，靶序列DNA片段的增加呈指數(shù)形式，隨著PCR產(chǎn)物的逐漸積累

19、，被擴(kuò)增的DNA 片段而進(jìn)入線性增長(zhǎng)期或靜止期， 即出現(xiàn)“停滯效應(yīng)” ，這種效應(yīng)稱平臺(tái)期(Plateau)。13、Ct值：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。14、DNA芯片：DNA芯片是指通過微加工技術(shù)將大量的DNA以預(yù)先設(shè)計(jì)的排列方式有序地固定在載體表面，形成儲(chǔ)存有大量信息的DNA陣列。該陣列與用熒光標(biāo)記的核酸雜交后，通過檢測(cè)每個(gè)探針分子雜交信號(hào)的強(qiáng)度，從而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。 15、基因敲除：指利用DNA體外重組技術(shù)構(gòu)建基因敲除的打靶載體，然后根據(jù)同源重組的原理將打靶載體導(dǎo)入受體細(xì)胞中，使特定基因活性喪失。16、RNA干涉（RNAi）：由短雙鏈RNA（21-2

20、3nt）誘導(dǎo)的同源RNA降解的過程。簡(jiǎn)答題1、簡(jiǎn)述凝膠電泳的基本原理不同的大分子物質(zhì)在不同的PH條件下帶電荷不同，將一定PH的電泳緩沖液制成凝膠置于電場(chǎng)中，那么帶有電荷的大分子物質(zhì)會(huì)向所帶電荷性質(zhì)相反的方向移動(dòng)（即帶正電荷的大分子向負(fù)極移動(dòng)，帶負(fù)電荷的大分子向正極移動(dòng)），根據(jù)U=/E=Q/6 ，不同大小和構(gòu)象的大分子由于所受到的來自電場(chǎng)的驅(qū)動(dòng)力和來自凝膠分子篩網(wǎng)孔的阻力差異，具有不同的遷移率，以此達(dá)到分離的目的。2、影響電泳速度的外界因素電場(chǎng)強(qiáng)度：電場(chǎng)強(qiáng)度越高，帶電顆粒移動(dòng)速度越快；溶液的PH值：溶液的pH值決定了帶電顆粒解離的程度，也決定了物質(zhì)所帶凈電荷性質(zhì)和多少；溶液的離子強(qiáng)度：電泳液中的

21、離子增加會(huì)使電泳遷移率降低；電滲現(xiàn)象：液體在電場(chǎng)中對(duì)于一個(gè)固體支持物的相對(duì)移動(dòng)，稱為電滲現(xiàn)象，當(dāng)液體的電滲方向與帶電粒子的遷移方向一致時(shí)，會(huì)增加粒子的遷移速度，反之，則會(huì)降低粒子的遷移速度。溫度的影響：電泳過程中由于通電產(chǎn)生焦耳熱，熱對(duì)電泳有很大的影響， 溫度每升高1，遷移率約增加2.4%。；支持物的影響：支持物要求均勻和吸附力小。3、簡(jiǎn)述核酸分子雜交的基本原理核酸分子雜交是在核酸變性及復(fù)性原理基礎(chǔ)上建立的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，是指具有一定同源序列的兩條核酸單鏈在一定條件下按堿基互補(bǔ)原則退火形成異質(zhì)雙鏈的過程。雜交的雙方為待測(cè)核酸序列和探針，待測(cè)核酸序列為克隆的DNA片段 、未克隆化的基因組DNA或細(xì)胞總

22、RNA, mRNA。4、簡(jiǎn)述PCR的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，PCR由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成： 1): 模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94左右后，雙鏈DNA變性解離為單鏈DNA ； 2): 模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：溫度降至55左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合； 3): 引物的延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。重復(fù)循環(huán)變性-退火-延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完

23、成一個(gè)循環(huán)需24分鐘， 23小時(shí)就能將目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。 5、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的分析 1）：凝膠電泳分析：PCR產(chǎn)物電泳，EB溴乙錠染色紫外儀下觀察，初步判斷產(chǎn)物的特異性。PCR產(chǎn)物片段的大小應(yīng)與預(yù)計(jì)的一致。 2）： 酶切分析：根據(jù)PCR產(chǎn)物中限制性內(nèi)切酶的位點(diǎn)，用相應(yīng)的酶切、獲得符合理論的片段，此法既能進(jìn)行產(chǎn)物的鑒定，還能進(jìn)行變異性研究。 3）： 分子雜交：分子雜交是檢測(cè)PCR產(chǎn)物特異性的有力證據(jù)，也是檢測(cè)PCR 產(chǎn)物堿基突變的有效方法。 4）：核酸序列分析：是檢測(cè)PCR產(chǎn)物特異性的最可靠方法。 6、載體及其條件 有復(fù)制子（replicon），能自主穩(wěn)定復(fù)制 多克隆位點(diǎn)（multipl

24、e cloning site,MCS） 有篩選標(biāo)志 表達(dá)型載體還應(yīng)具備完整的轉(zhuǎn)錄單位 插入容量大 分子量小，拷貝多 安全7、基因克隆的基本過程 限制性內(nèi)切酶分別消化目的基因和載體 DNA連接酶連接目的基因和載體 將連接好的環(huán)狀DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞 篩選并擴(kuò)增后獲得重組克隆基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)名詞解釋1、基因組：泛指一個(gè)有生命體、病毒或細(xì)胞器的全部遺傳物質(zhì)，包括基因和基因間區(qū)域。包括原核生物基因組、真核生物基因組和病毒基因組。2、基因組學(xué)：就是發(fā)展和應(yīng)用DNA制圖、測(cè)序新技術(shù)以及計(jì)算機(jī)程序，分析生命體全部基因組結(jié)構(gòu)和功能。3、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)：是以全基因組為研究對(duì)象，進(jìn)行基因作圖、序列分析、基因鑒定。

25、4、蛋白質(zhì)組：是指一個(gè)基因組、一種生物、一種細(xì)胞或組織所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)。5、蛋白質(zhì)組學(xué)：蛋白質(zhì)組學(xué)是在整體水平上研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組成及其活動(dòng)規(guī)律的科學(xué).簡(jiǎn)答題1、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)的4種圖譜（1）遺傳圖譜：是利用人類基因組中的一些特殊位點(diǎn)作為遺傳標(biāo)志而進(jìn)行的基因組分區(qū)。即通過計(jì)算遺傳標(biāo)記的重組率，以重組率的大小反映遺傳標(biāo)志間的相對(duì)距離繪制遺傳圖譜。（2）物理圖譜：是利用已知序列的DNA片段為基因組分區(qū)，位點(diǎn)距離用bp表示。常見的作圖標(biāo)志有限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)、基因、序列標(biāo)簽位點(diǎn)。（3）轉(zhuǎn)錄圖譜：是指轉(zhuǎn)錄體(RNAs)或其反轉(zhuǎn)錄而成的cDNA在基因組中的位置，又稱基因圖譜或表達(dá)圖譜(express

26、ion map)；是根據(jù)組織細(xì)胞中可表達(dá)片段標(biāo)簽(expressed sequence tags, EST)繪制的圖譜； 是將mRNA逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA或EST的部分cDNA片段作為“探針”與基因組DNA進(jìn)行分子雜交， 標(biāo)記轉(zhuǎn)錄基因，繪制出可表達(dá)基因的轉(zhuǎn)錄圖。（4）序列圖譜：序列圖譜（sequence map）是人類基因組的全部核苷酸的排列順序。將人類基因組DNA分段克隆，然后逐段進(jìn)行序列分析，在按標(biāo)志將各重疊片段拼接，構(gòu)成完整的基因組DNA序列圖。2、HGP在醫(yī)學(xué)上的意義基因結(jié)構(gòu)和功能的研究；基因組信息與疾病易感性的研究；基因組與癌癥研究；疾病的遺傳背景；藥物基因組學(xué)的研究。3、白質(zhì)組學(xué)三

27、大基本支撐技術(shù)二維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)計(jì)算機(jī)圖象分析和大規(guī)模數(shù)據(jù)處理技術(shù)生物質(zhì)譜技術(shù)4、質(zhì)組學(xué)研究的主要技術(shù)路線（1）樣品選擇和處理（2）蛋白質(zhì)分離（3）蛋白質(zhì)的識(shí)別和鑒定其流程圖為：蛋白質(zhì)樣品的制備 2-DE 圖像分析若有不明斑點(diǎn)，則繼續(xù)切割該不明斑點(diǎn) 生物質(zhì)譜 肽指紋圖譜 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫搜索若為新的蛋白質(zhì)串聯(lián)質(zhì)譜蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫搜索仍沒有該蛋白質(zhì)的信息蛋白質(zhì)測(cè)序基因突變與生物信息學(xué)名詞解釋1、基因突變：指基因組DNA分子中發(fā)生堿基的增添、缺失或改變而引起的基因結(jié)構(gòu)的改變，進(jìn)而引起遺傳表型的改變。2、生物信息學(xué)：生物信息學(xué)是一門交叉科學(xué)，它包含了生物信息的獲取、處理、存儲(chǔ)、分發(fā)、分析和解釋等在內(nèi)

28、的所有方面，它綜合運(yùn)用數(shù)學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)和生物學(xué)的各種工具，來闡明和理解大量數(shù)據(jù)所包含的生物學(xué)意義。簡(jiǎn)答題1、述基因突變的分類和特性（1）根據(jù)基因突變的DNA堿基改變分類：點(diǎn)突變：DNA被化學(xué)修飾或復(fù)制時(shí)發(fā)生錯(cuò)配 ，使一個(gè)堿基變成另一個(gè)堿基。插入突變：DNA鏈中插入1個(gè)或多個(gè)堿基（轉(zhuǎn)座子Tn），突變后可引起DNA序列閱讀框架改變。堿基缺失：DNA鏈中1個(gè)或多個(gè)堿基發(fā)生丟失，突變后可引起DNA序列閱讀框架改變。（2）根據(jù)基因突變的密碼效應(yīng)分類：同義突變：堿基被替代后沒有密碼子改變，其產(chǎn)物AA序列也無變化。錯(cuò)義突變：堿基序列的改變引起AA序列改變。無義突變：某個(gè)堿基改變使某個(gè)AA的密碼子成為蛋白質(zhì)合

29、成的終止密碼子，從而使蛋白質(zhì)合成中斷?；蛲蛔兊奶匦裕海?） 突變的平行性、重演性和可逆性平行性：是指親緣關(guān)系相近的物種因遺傳基礎(chǔ)較近似而發(fā)生相似基因突變的現(xiàn)象。重演性：相同的基因突變可以在同種生物的不同個(gè)體間重復(fù)發(fā)生，稱為重演性?？赡嫘裕夯蛲蛔兊陌l(fā)生方向是可逆的。（2） 突變的多方向性與復(fù)等位基因多方向性：指基因突變可以多方向發(fā)生，即基因內(nèi)部多個(gè)突變部位分別改變后會(huì)產(chǎn)生多種等位基因形式。復(fù)等位基因：位于同一基因位點(diǎn)上的多種等位基因。（3） 隨機(jī)性生物個(gè)體發(fā)育的任何時(shí)期 體細(xì)胞突變 不遺傳給后代 生殖細(xì)胞突變遺傳給后代（4） 廣泛性和有害性（多數(shù)）2、簡(jiǎn)述生物信息學(xué)研究的主要內(nèi)容生物學(xué)數(shù)據(jù)的

30、收集、存儲(chǔ)、管理與提供基因組序列信息的提取和分析功能基因組相關(guān)信息分析生物大分子結(jié)構(gòu)模擬和藥物設(shè)計(jì)生物信息分析的技術(shù)與方法研究應(yīng)用與發(fā)展研究染色體與基因表達(dá)調(diào)控名詞解釋1、核小體：染色質(zhì)在電子顯微鏡下呈串珠狀纖維，附著的顆粒稱為核小體，核小體是真核染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位。2、轉(zhuǎn)錄單位：轉(zhuǎn)錄時(shí)，RNA聚合酶從啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)開始直至轉(zhuǎn)錄終止子合成原始轉(zhuǎn)錄體所需的DNA節(jié)段，稱為轉(zhuǎn)錄單位。3、多順反子：在原核生物體中，一條原始轉(zhuǎn)錄體能翻譯成幾條不同的多肽鏈，這條原始轉(zhuǎn)錄體就稱為多順反子。4、順式作用元件：凡能激活或阻遏基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列稱為順式作用元件。5、反式作用因子：凡直接或間接與順式元件相互

31、作用并影響基因表達(dá)的調(diào)節(jié)蛋白，統(tǒng)稱為反式作用因子。6、轉(zhuǎn)錄因子：與核心啟動(dòng)子特異結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)蛋白稱為轉(zhuǎn)錄因子。7、啟動(dòng)子：位于基因區(qū)編碼上游并為RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合和啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA序列，稱為啟動(dòng)子。8、增強(qiáng)子：能加強(qiáng)其上游或下游基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列稱為增強(qiáng)子。9、終止子：基因編碼區(qū)下游能促使RNA聚合酶識(shí)別并終止RNA合成的DNA序列稱為轉(zhuǎn)錄終止子。10、沉默子：與增強(qiáng)子作用相反，能抑制上游或下游基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列稱為沉默子。11、轉(zhuǎn)座子：在基因組中能移動(dòng)或易位的DNA片段，稱為轉(zhuǎn)座子。12、反轉(zhuǎn)座子：經(jīng)RNA中間體的反轉(zhuǎn)錄復(fù)制和易位的散在重復(fù)DNA序列，稱為反轉(zhuǎn)座子。13、基序

32、（模體）：一般指具有功能意義的亞結(jié)構(gòu)域或小結(jié)構(gòu)域，為蛋白質(zhì)的超二級(jí)結(jié)構(gòu)。簡(jiǎn)答題1、簡(jiǎn)述常染色質(zhì)與異染色質(zhì)的異同在分裂間期，細(xì)胞核形成兩類結(jié)構(gòu)與功能明顯不同的染色質(zhì)：常染色質(zhì)與異染色質(zhì)。常染色質(zhì)堿性染料著色淺而均一，DNA復(fù)制較早，對(duì)核酸酶敏感，富含基因、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白和乙酰組蛋白，核小體陣列不規(guī)則，壓縮程度低。而異染色質(zhì)堿性染料著色深而不均一，DNA復(fù)制晚而慢，對(duì)核酸酶不敏感，所含基因和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白甚少，富含高度重復(fù)序列、低乙酰組蛋白和異染色質(zhì)相關(guān)蛋白，核小體陣列規(guī)則，高度壓縮。2、簡(jiǎn)述真核基因組DNA的特征（1）單順反子：一般真核基因?yàn)閱雾樂醋樱匆粋€(gè)基因編碼一條多肽鏈或RNA鏈，每個(gè)基因轉(zhuǎn)錄

33、有各自的調(diào)節(jié)原件。（2）斷裂基因：真核基因有外顯子和內(nèi)含子，外顯子是編碼序列，內(nèi)含子雖然也轉(zhuǎn)錄，可是在后續(xù)的mRNA的修飾過程中會(huì)被剪接掉，所以為非編碼序列。這樣的基因被稱為斷裂基因。（3）重復(fù)序列：真核基因組另一顯著特征是含重復(fù)序列。該序列是指多拷貝的相同或近似DNA片段。根據(jù)變性DNA濃度和復(fù)性時(shí)間，將重復(fù)DNA分為高度重復(fù)和中度重復(fù)。3、簡(jiǎn)述真核基因組DNA的類型（1）單拷貝：即真核基因組中的非重復(fù)序列。（2）中度重復(fù)：超過103次重復(fù)為中度重復(fù)。（3）高度重復(fù)：超過106次重復(fù)為高度重復(fù)。4、簡(jiǎn)述DNA與蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)構(gòu)特征 （1）螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋（HTH）基序：蛋白質(zhì)通過HTH結(jié)

34、構(gòu)與DNA結(jié)合，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用。 （2）堿性亮氨酸拉鏈（bLZ）基序：這種基序含卷曲螺旋或纖維狀蛋白，以二聚體的形式卷曲螺旋像八字形的筷子與DNA結(jié)合。 （3）鋅指基序：這類序列為金屬蛋白，有鋅指重復(fù)序列?；蛟\斷、基因治療與腫瘤相關(guān)基因名詞解釋1、基因診斷：應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù),從DNA/RNA水平檢測(cè)分析致病基因的存在,變異和表達(dá)狀態(tài)從而對(duì)疾病作出診斷的技術(shù)2、基因治療：指應(yīng)用DNA重組技術(shù)，將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療的目的。3、RFLP：是限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，是由于突變使DNA長(zhǎng)度改變或使酶切位點(diǎn)發(fā)生改變時(shí)，電泳圖譜發(fā)生變化的一種

35、性質(zhì)。4、基因敲除技術(shù)：指通過基因同源重組的過程定向的在活細(xì)胞中從基因組移出特定基因的過程，從而建立基因剔除細(xì)胞和基因剔除生物。5、反義RNA:是指與mRNA互補(bǔ)的RNA分子,通常由15-20個(gè)核苷酸組成 。這種反義RNA能與mRNA分子特異性地互補(bǔ)結(jié)合形成二聚體,從而阻止靶核酸的表達(dá)。6、RNA干涉（RNAi）：是一種由雙鏈RNA誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象。在此過程中，與雙鏈RNA有同源序列的信使RNA（mRNA）被降解，從而抑制該基因的表達(dá)。7、癌基因(oncogene，onc)：是指細(xì)胞內(nèi)或病毒內(nèi)存在的，能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂的基因,它的結(jié)構(gòu)異?；虮磉_(dá)異常,可引起細(xì)胞癌變。 8、病毒癌基因 （v-

36、onc）：存在于病毒基因組的癌基因稱為病毒癌基因。它不編碼病毒的結(jié)構(gòu)成分，對(duì)病毒的復(fù)制也沒有作用，但其異常表達(dá)可以使宿主細(xì)胞持續(xù)增殖, 產(chǎn)生腫瘤或使培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化成癌細(xì)胞。 9、細(xì)胞癌基因（c-onc）：存在于正常細(xì)胞基因組的癌基因稱為細(xì)胞癌基因。在正常細(xì)胞內(nèi)可以表達(dá)，其表達(dá)產(chǎn)物具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化的功能。只有在一定的條件下發(fā)生改變而有過度表達(dá)時(shí)，才可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān),正常狀態(tài)下為非活化形式即原癌基因。 10、抑癌基因：一類抑制細(xì)胞過度生長(zhǎng)、增殖，從而遏制腫瘤形成，當(dāng)缺失或變異抑癌功能喪失導(dǎo)致腫瘤生成的基因。問答題：1、簡(jiǎn)述定點(diǎn)突變技術(shù)的原理：本技術(shù)是利用化學(xué)合成的含有突變堿基的寡核苷酸短片段作為引物，啟動(dòng)單鏈DNA分子進(jìn)行復(fù)制，隨后這段寡核苷酸引物便成為新合成DNA子鏈的一個(gè)組成部分，新生成的鏈便已具有突變的堿基序列。為了使靶基因的特定位點(diǎn)發(fā)生突變，所設(shè)計(jì)的寡核苷酸引物的序列除了所需的突變堿基外，其余的序列則與靶基因編碼鏈的特定區(qū)域完全互補(bǔ)。2、 簡(jiǎn)述基因診斷的5個(gè)特點(diǎn)（1）針對(duì)性強(qiáng)： 以探測(cè)疾病基因?yàn)槟繕?biāo)，屬于“病因診斷” 。 （2）特異性高： 以分子雜交技術(shù)為基本原理 （3）靈敏度高： 基因探針帶有十分敏感的檢測(cè)標(biāo)記，可從人 類長(zhǎng)達(dá)3106kb的基因組中檢測(cè)出某一基因的單堿基改變。而且待測(cè)標(biāo)本微量。（4