蒽酮比色法快速測定葡萄糖

1、蒽酮比色法快速測定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量蒽酮試劑與碳水化合物生成一種藍綠色物質(zhì),是糖類特有的反應。不經(jīng)分離而進行系統(tǒng)測定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三點:第一在室溫下葡萄糖與蒽酮試劑不顯色,此溫度下果糖顯色5min的吸收值與果糖在100顯色5min吸收值幾乎相等。第二稀堿與糖溶液共熱時,可破壞葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破壞。第三淀粉經(jīng)酸水解后與蒽酮試劑顯色。(二)試劑(1)蒽酮試劑:稱0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(約84份體積97%濃硫酸與16份體積水混合,密封在磨口瓶中)。溶解后置水中冷卻備用。此液當天配制。(2)2mol/L氫氧化鉀溶液。(3)3mol/L鹽酸溶液(5

2、)標準糖貯備液:精確稱取250mg干燥的分析純的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml容量瓶中,配成1mg/ml濃度溶液。溶劑用蒸餾水和75%乙醇均可。(6)標準糖工作液:用移液管吸取10ml標準糖貯備液于100ml容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度、搖勻。此液含糖為100g/ml。(三)測定步驟1.工作曲線繪制用2ml吸量管按表取標準糖工作液(葡萄糖不多于160g,果糖不多于80g,蔗糖不多于100g)于干潔的試管(16180mm)中,用蒸餾水分別調(diào)整其體積為2.0ml。從滴定管中加入蒽酮試劑6.0ml。搖勻并立即置于沸水浴中加熱5min,取出立即在冷水中迅速冷卻(不斷搖動)。用2.0ml蒸

3、餾水重復上述操作,作為空白溶液。在分光光度計中,以640nm波長測定它們的消光度。以消光度為縱坐標,糖含量為橫坐標,繪制標準工作曲線葡萄糖(G)體積/ml0.00.20.40.60.81.01.21.41.6蒸餾水體積/ml2.01.81.61.41.21.00.80.60.4葡萄糖(G)含量/ml020406080100120140160果糖(F)體積/ml0.00.10.20.30.40.50.60.70.8蒸餾水體積/ml2.01.91.81.71.61.51.41.31.2果糖(F)含量/ml01020304050607080蔗糖(S)體積/ml0.00.10.20.30.40.50.

4、60.70.80.91.0蒸餾水體積/ml2.01.91.81.71.61.51.41.31.21.11.0蔗糖(S)含量/ml0102030405060708090100S102030405060708090G或F5.310.515.821.126.331.636.942.147.4S1.02.03.04.05.06.07.08.09.0G或F0.51.11.62.12.63.23.74.24.7S0.10.20.30.40.50.60.70.80.9G或F0.050.110.160.210.260.320.370.420.472.樣品中糖的提取谷物或植株體烘干、粉碎。精確稱取烘干樣品(谷物

5、0.2g、植株體0.1g左右)放入研缽中,加加5ml蒸餾水磨至均勻,以5ml蒸餾水將均勻物全部移入離心管中,離心(3000r/min)5min。離心液倒入干凈試管中。再向盛有沉淀的離心管加5ml蒸餾水并攪拌沉淀物,離心(重復二次),合并離心液于50ml容量瓶中,加蒸餾水稀釋至刻度。此液用干葡萄糖、果糖及蔗糖的測定(A液)。以10ml3mol/L鹽酸將離心管中沉淀物全部轉(zhuǎn)移到容量瓶中,蓋上玻塞,放在沸水浴中煮沸4045min,取出冷卻至室溫,加3mol/L氫氧化鈉溶液10ml中和其酸性,以蒸餾水定容至50ml,從中取2ml溶液,加蒸餾水至50ml,混勻。此液用用淀粉的測定(B液)。3.蔗糖的測定

6、精確吸取樣品液(A)10ml,加入2mol/L氫氧化鉀溶液2ml,置沸水浴中煮沸10min。取出迅速冷至室溫,加蒸餾水稀釋至50ml,搖勻。精確吸取稀釋液2ml至一干凈試管中,按標準曲線繪制步驟加蒽酮試劑顯色測定,得光密度值E蔗。4.蔗糖的結(jié)果計算從蔗糖工作曲線求得蔗糖量為S(g),按下式計算樣品中蔗糖百分含量。式中: S待測樣品液中蔗糖量(g)W樣品稱重(g)V1用于測定的樣品稀釋液的體積(ml)V2用于分析的樣品稀釋液總體積(ml)V3樣品液總體積(ml)V4用于氫氧化鉀水解的樣品液體積(ml)5.葡萄糖、果糖的測定取樣品液(A)10ml加蒸餾水至50ml,往兩支干凈試管中分別加入2ml樣品稀釋液其中一支加蒽酮試劑6ml,搖勻,在沸水浴中煮沸5分鐘,取出立即浸入自來水冷卻至室溫,在640nm下測定光密度E100。另一支試管,加蒽酮試劑6ml,搖勻,在常溫下顯色5min,同上述操作測定光密度E常溫。由E常溫查果糖工作曲線求得樣品液果糖量為F(g),按下式計算樣品中果糖、葡萄糖含量。6.果糖、葡萄糖的結(jié)果計算由E100-E常溫查葡萄糖工作曲線求得樣品液中葡萄糖量為G(g),按下式算葡萄糖百分含量。7.淀粉測定取樣品液(B液)2ml,再加6ml蒽酮試劑,搖勻,放在沸水浴中煮沸5min,取出,立入在冷水中冷卻至室溫,在640nm下測定光密度E淀粉,以E淀粉查葡萄糖式計算