瘧原蟲(chóng)常識(shí)與鏡檢.ppt

1、瘧原蟲(chóng)常識(shí)與鏡檢 技術(shù)的臨床應(yīng)用 儋州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 范學(xué)成 2010.12.13,主要內(nèi)容： 一. 瘧原蟲(chóng)的種類與分布 二. 瘧原蟲(chóng)生活史與病癥概述 三. 瘧原蟲(chóng)的形態(tài)與鏡檢技術(shù) 四. 培訓(xùn)實(shí)時(shí)測(cè)驗(yàn),瘧”字釋疑： 根據(jù)新華字典 “瘧” 屬 多音字 1. 瘧（讀Yo） 指瘧疾，俗稱。 2. 瘧（讀N） 指瘧疾，一種急性傳染病，病原體 是瘧原蟲(chóng)，傳染源是蚊子，為周期性 發(fā)冷發(fā)熱的癥狀,歷史回顧,3千多年前， “瘧”的象形文字出現(xiàn)在隋代諸病源候論，及以后國(guó)內(nèi)外某些醫(yī)學(xué)家均認(rèn)為瘧疾是 “瘴氣”所引起的,1880年法國(guó)人Alphonse Laveran在瘧疾病人紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)瘧原蟲(chóng)。 1897年英

2、國(guó)人Ronald Ross發(fā)現(xiàn)蚊蟲(chóng)與傳播瘧疾的關(guān)系。 1948 -1960年 Shortt及Garnham證實(shí)了人類瘧原蟲(chóng)的肝細(xì)胞外期。 1977-1980年 Lysenko 和Krotoski等 提出“休眠子”學(xué)說(shuō)。 經(jīng)過(guò)一個(gè)世紀(jì)的研究，瘧原蟲(chóng)生活史得以基本闡明,瘧原蟲(chóng)的分布與種類 分 布 瘧原蟲(chóng)主要分布在地球熱帶、亞熱帶各國(guó)，即非洲、東 南亞、南美等地區(qū)，約有20億人口在疫區(qū)。每年死于瘧疾的 兒童約100萬(wàn)。我國(guó)在華南、華中的某些地區(qū)，特別是云南和 海南省，因此，瘧疾仍是我國(guó)重點(diǎn)防治的寄生蟲(chóng)病之一。 種 類 至今全球發(fā)現(xiàn)瘧原蟲(chóng)有130多種，宿主：人類、哺乳動(dòng) 物、鳥(niǎo)類及爬行類。 寄生于人體

3、的瘧原蟲(chóng)共有如下四種,目前，我省只有間日瘧和惡性瘧。 衛(wèi)生部要求： 我省應(yīng)在2012年消除瘧疾,寄生于人體的四種瘧原蟲(chóng),通過(guò)按蚊叮咬進(jìn)入人體,二.瘧原蟲(chóng)生活史概述,子孢子,雌蚊吸血，經(jīng)皮膚侵入人體,移入肝細(xì)胞,速發(fā)型子孢子 遲發(fā)型子孢子 （約6-12個(gè)月休眠,無(wú)性裂體生殖,裂殖體,脹破肝C釋放,裂殖子,某些因素刺激,侵入血流,進(jìn)入RBC,環(huán)狀體,裂體增殖,大滋養(yǎng)體,早期裂殖體,成熟裂殖體,裂殖子,脹破RBC,釋放,經(jīng)過(guò)幾次,裂體增殖,雌配子體 雄配子體,雌蚊吸血,進(jìn)入蚊胃,雌配子 雄配子,合子,配子結(jié)合,動(dòng)合子,穿過(guò)胃壁,在胃壁下,卵囊,孢子增殖,侵入新的RBC,遺傳基因多態(tài)性分型,自然氣溫1

4、6-30蚊體內(nèi) P.V 8-9天 P.f 10天,RBC外期P.V 8天 P.f 5天,RBC內(nèi)期P.V 48h P.f 36-48h,內(nèi)潛伏期,外潛伏期,人瘧原蟲(chóng)完成其生活史需要人和按蚊兩個(gè)宿主。 1. 在按蚊體內(nèi)進(jìn)行有性繁殖，按蚊是瘧原蟲(chóng)的終末宿主。 2. 在人體內(nèi)進(jìn)行無(wú)性增殖，人是瘧原蟲(chóng)的中間宿主,電鏡下MP感染的RBC和裂殖子的釋出（人衛(wèi)版本科教材,瘧疾病癥 典型癥狀： 周期性寒戰(zhàn)、高熱（T：39-40 ）、出汗, 每次發(fā)作時(shí)間 610h。 熱 型： 即周期性與紅內(nèi)期裂體增殖周期一致。 P.v、P.o 48h P.f3648h，漸不規(guī)則 P.m72h 貧 血： A. 與RBC大量直接破

5、壞有關(guān)。 B. 脾亢，脾腫大 、單核巨噬細(xì)胞增生所致，26 倍大，巨噬細(xì)胞增多，吞噬增強(qiáng) 。 C. 骨髓中RBC生成障礙。D. 自身免疫破壞RBC,發(fā)燒,發(fā)燒,裂體增殖,48h,隔日,PV熱型與原蟲(chóng)發(fā)育的關(guān)系,海南省瓊中縣兒童因瘧疾引起的脾臟腫大（人衛(wèi)版本科教材,瘧原蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)代謝 胞飲、吞噬攝取營(yíng)養(yǎng) 蛋白質(zhì)：氨基酸來(lái)自血紅蛋白、血漿 RBC珠蛋白+血紅素瘧色素（R除外各期 消化分解Hb后的最終產(chǎn)物 ） 能量： 葡萄糖來(lái)自血漿，但要利用RBC 中的G6PD 缺乏G6PD的病人對(duì)瘧原蟲(chóng)有選擇抗性,瘧原蟲(chóng)的壽命,瘧原蟲(chóng)在人體內(nèi)有一定的壽命，惡性瘧原蟲(chóng)約1年，其中大部分只活到68個(gè)月；間日瘧原蟲(chóng)為1年半

6、至3 年，不超過(guò)4年。 人體免疫力對(duì)瘧原蟲(chóng)的生存是有影響的，所以，這里說(shuō)的瘧原蟲(chóng)的壽命與指瘧原蟲(chóng)在一定條件下的壽命；或者說(shuō)是感染后的瘧疾病程,瘧原蟲(chóng)的形態(tài)與鏡檢技術(shù) 1. 形 態(tài) 人體 瘧原蟲(chóng)的基本構(gòu)造：胞核、胞質(zhì)和包膜 瘧原蟲(chóng)形態(tài)檢查三要素：胞核、胞質(zhì)和虐色素 胞 核 即細(xì)胞核或染色質(zhì)粒。在正常情況下核呈鮮紅色，呈圓形或不規(guī)則的顆粒狀。核的結(jié)構(gòu)致密，只有在個(gè)別發(fā)育階段較為疏松。例如間日瘧原蟲(chóng)雄配子體的核，有時(shí)因胞漿厚密或染色深藍(lán)，使核呈暗紅或紫紅色。 胞 質(zhì) 被染成蔚藍(lán)色或深藍(lán)色，隨著蟲(chóng)體發(fā)育長(zhǎng)大，細(xì)胞漿逐漸增多。間日瘧原蟲(chóng)發(fā)育到大滋養(yǎng)體階段，胞漿呈阿米巴樣活動(dòng)，胞漿內(nèi)有空泡。 瘧色素 不著

7、色，顏色和顆粒的形狀，因瘧原蟲(chóng)種類而異。間日瘧原蟲(chóng)的色素顆粒呈細(xì)小桿狀，黃褐色；惡性瘧原蟲(chóng)色素呈塊狀，黑褐色；三日瘧原蟲(chóng)的色素呈砂粒狀，深褐色；卵形瘧原蟲(chóng)的色素與間日瘧原蟲(chóng)相似。瘧色素在蟲(chóng)體內(nèi)散在分布或聚集成團(tuán)塊,各期瘧原蟲(chóng)形態(tài)比較 英文縮寫(xiě)代號(hào)： MP瘧原蟲(chóng) P. v間日瘧原蟲(chóng) P.f 惡性瘧原蟲(chóng) P.m 三日瘧原蟲(chóng) P.o 卵形瘧原蟲(chóng) R 環(huán)狀體（小滋養(yǎng)體） T 大滋養(yǎng)體 S 裂殖體 G 配子體 P.f的T、S主要在皮下、脂肪和內(nèi)臟微血管中發(fā)育， G成熟后，約在無(wú)性體出現(xiàn)后710天才見(jiàn)于外周血液中。 因此，通常外周血檢查只見(jiàn)到R和G這兩期的P.f，這是鑒別P.v、P.f的要點(diǎn)之一,被瘧原蟲(chóng)

8、寄生的RBC變化 蟲(chóng)種 RBC大小 RBC顏色 間日瘧 脹大 變淡 惡性瘧 正常或縮小 正常,薄血膜中 P.v 的形態(tài) 環(huán)狀體(P.v.R,P.v.R,約占寄生紅細(xì)胞的1/3，很少見(jiàn)到一個(gè)紅細(xì)胞寄生2個(gè)環(huán)狀體和一個(gè)環(huán)狀體有2個(gè)核,P.v.R,大滋養(yǎng)體(P.v.T,經(jīng)810小時(shí)，蟲(chóng)體增大，胞質(zhì)增多，伸出偽足。 出現(xiàn)黃褐色的瘧色素。 紅細(xì)胞脹大，變形，顏色變淡，并出現(xiàn)數(shù)量較多，淡紅色的小點(diǎn)，稱薛氏小點(diǎn),成熟裂殖體（P.v.S,紅細(xì)胞： 脹大，褪色，可見(jiàn)薛氏小點(diǎn)。 大 ?。?個(gè)體較大。 胞漿和核：裂殖子1224個(gè)平均16個(gè)，排 列不規(guī)則，核紅色，胞漿淺蘭色。 色 素： 黃褐色常集于瘧原蟲(chóng)的一邊,P.

9、v.S,實(shí)體標(biāo)本鏡檢形態(tài)（吉氏染色,間日瘧原蟲(chóng)雄配子體(P.v.G,間日瘧原蟲(chóng)雌配子體(P.v.G,蟲(chóng)體較小，占滿脹大的紅細(xì)胞 胞質(zhì)淺藍(lán) 核大疏松，淡紅色，多位于蟲(chóng)體的中央。 瘧色素分散,蟲(chóng)體較大，占滿脹大的紅細(xì)胞 胞質(zhì)致密，色深藍(lán) 核小致密，深紅色，多位于蟲(chóng)體一側(cè) 瘧色素分散,P.V雄配子體,P.V雌配子體,實(shí)體標(biāo)本鏡檢形態(tài)（吉氏染色,P.V.G的雌雄實(shí)體,間日瘧大滋養(yǎng)體(T)與配子體(G)的區(qū)別,T G 蟲(chóng)體： 較小 較大 胞漿： 邊緣不規(guī)則可見(jiàn)空泡 邊緣規(guī)則無(wú)空泡 核： 較小、不規(guī)則 較大有不染色帶 色素： 較少、分布不勻， 色素分布均勻,T,G,薄血膜中 P.f 的形態(tài),蟲(chóng)體：約占RB

10、C的1/5-1/6,環(huán)狀。常見(jiàn)幾個(gè)蟲(chóng)同時(shí)寄生在同一細(xì)胞 核： 小致密規(guī)則、常見(jiàn)2個(gè)核 胞漿：纖細(xì)完整,P.f.R,P.f.G,P.f.G,瘧原蟲(chóng)厚、薄血膜鏡檢的主要形態(tài)變異,薄血膜：原蟲(chóng)寄生在紅細(xì)胞里,形態(tài)典型,易鑒別,但一般只用于教學(xué)和蟲(chóng)種鑒別. 厚血膜：經(jīng)染色血紅蛋白溶解，輪廓消失，但有時(shí)尚留下殘骸的“影子”或點(diǎn)彩。 厚血膜由于細(xì)胞重迭，干燥緩慢，蟲(chóng)體形態(tài)發(fā)生較大變化,特別是小滋養(yǎng)體和大滋養(yǎng)體變化就更大，常呈分號(hào)“；”和感嘆號(hào)“！”狀；飛鳥(niǎo)“.”、“V”狀。而大滋養(yǎng)體空泡消失，胞漿斷裂成塊是它的特點(diǎn)。裂殖體和配子體的形態(tài)則無(wú)明顯變化。雖然大、小滋養(yǎng)體形態(tài)千變?nèi)f化，但只要掌握瘧原蟲(chóng)的核、胞漿

11、、色素三個(gè)要點(diǎn)是不難鑒別的,厚血膜 一般門(mén)診須檢查2001000個(gè)油鏡視野（相當(dāng)于0.52.5l血量），才能確保鏡檢的敏感性和可重復(fù)性。通常的敏感性可達(dá)約1020個(gè)原蟲(chóng)/l血。 由于厚血膜比薄血膜用血量大，涂布面積小，陽(yáng)性檢出率較高。查出瘧原蟲(chóng)數(shù)是薄血膜的1525倍。因此，瘧疾診斷性鏡檢應(yīng)以檢查厚血膜為主。均應(yīng)查完整個(gè)厚血膜，未查見(jiàn)瘧原蟲(chóng)則判為陰性,間日瘧原蟲(chóng),惡性瘧原蟲(chóng),厚血膜集中視野,各種不同時(shí)期瘧原蟲(chóng)形態(tài)的比較,薄血膜,P.v.R P.f.R 大小：約占RBC的1/3 約占RBC的1/5 部位：RBC里少見(jiàn)多個(gè)蟲(chóng)同時(shí)寄生 RBC的邊緣 、常見(jiàn)多個(gè)蟲(chóng)同時(shí)寄生 核： 大、較松、兩核少見(jiàn) 小、

12、致密、兩核多見(jiàn) 胞漿：較粗、不規(guī)則 纖細(xì)、規(guī)則,P.v.R 對(duì) 比 P.f.R,厚血膜,厚血膜,P.v.G 對(duì) 比 P.f.G,血片中的PC、雜質(zhì),注意雜質(zhì)與瘧原蟲(chóng)的區(qū)分,P C,雜質(zhì),鏡 檢 技 術(shù),1. 采血時(shí)間： P.v 發(fā)作后10小時(shí)內(nèi)采血，各期（R、T、S、G）瘧原蟲(chóng)均可查見(jiàn)。 P.f 發(fā)作時(shí)采血可查到 R；發(fā)作后10天左右采血可查見(jiàn) G。 2. 厚薄片的制作： 厚血膜取約4ul血液置于玻片合適位置上，用推片一角由里向外旋 轉(zhuǎn)2-4圈，涂成直徑0.8-1厘米大小的圓形均勻血膜。 薄血膜取約1ul血液置于玻片合適位置上，推成寬2厘米、長(zhǎng)2.5厘米 的血膜。 同片可制作兩個(gè)厚血膜，一個(gè)薄

13、血膜（見(jiàn)下圖）。玻片頭可粘 貼患者信 息，亦可在薄片頭以鉛筆寫(xiě)上患者姓名、編碼等,3. 染色 （1）首先晾干血片，以甲醇或無(wú)水酒精固定薄血膜。應(yīng)用 吉氏染色法，每張玻片約需染液1ml。 （2）配制染色工作液：1ml清潔水（Ph7.0-7.2）+1-2滴吉 氏原液/血片，混勻。須現(xiàn)配現(xiàn)用。 （3）將配好的吉氏染液滴入血片，并均勻分布染色10-20分鐘。然后用 清水輕輕將染液沖洗干凈，晾干待檢。 4. 鏡檢 （1）一般只查厚片，薄片僅作為瘧原蟲(chóng)分類參考和編號(hào)用。 （2）可先以油鏡頭配合5X低倍目鏡鏡檢，有疑問(wèn)時(shí)可調(diào)換10X目鏡進(jìn)行 觀察。 （3）檢查時(shí)應(yīng)從厚血膜的上緣開(kāi)始，按下圖示意的順序方向，視

14、野稍疊 視野地查完整個(gè)血膜,厚血膜鏡檢示意圖,5. 結(jié)果報(bào)告,陰性：報(bào)告“未查到MP” 陽(yáng)性：報(bào)告“查到XXXMP” 厚血膜瘧原蟲(chóng)鏡檢“記號(hào)”報(bào)告法： 全血膜同種同期瘧原蟲(chóng)10個(gè)以內(nèi)均記實(shí)際數(shù)，10個(gè)以上但還不到平均1個(gè)/視野則記為“少”。報(bào)告格式如P.v.T . S . G , P.f. R . G 。 平均每個(gè)視野同種同期瘧原蟲(chóng)： 1-5個(gè) “+” 如P.f.R 6-10個(gè)“+” 如P.f.R 10-100 個(gè)“+” 如P.v.R. G 100個(gè)以上“+” 如P.f.R 注 意： A.抗凝血制作的血片其粘附力差，染色沖洗易于脫落，可 先用生理鹽水洗滌2-3次后，再制作厚、薄片。 B.油鏡與玻片的清洗： 加清洗液