三網(wǎng)織紅細胞計數(shù)

1、實驗三網(wǎng)織紅細胞計數(shù),一、實驗原理 網(wǎng)織紅細胞胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的RNA物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍或新亞甲藍活體染色后RNA中負電荷基團與帶正電荷的有色基團結(jié)合，凝聚成顆粒呈淺藍或藍黑色的點狀、絲狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可在顯微鏡下識別。計數(shù)1000個紅細胞中所有的網(wǎng)織紅細胞數(shù)直接報告其百分比，或紅細胞計數(shù)結(jié)果報告其絕對值,網(wǎng)織紅細胞（Ret,是晚幼紅細胞脫核后到成熟紅細胞間的過渡細胞，是尚未完全成熟的紅細胞，其胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的RNA物質(zhì)。嗜堿性物質(zhì)與染料凝聚成藍色顆粒，顆粒與顆粒連綴成線，線連接成網(wǎng)，故而得名。 分型：絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)型、點粒型。（、型,網(wǎng)織紅細胞,計數(shù)方法,1、普通光學顯微鏡法：活體染色

2、后推片鏡檢 2、網(wǎng)織細胞計數(shù)儀法：熒光染色后用流式細胞術計數(shù),二、試劑器材,1、試劑 10g/L煌焦油藍酒精（水）溶液 2、器材 毛細血管采血用具、小試管、載玻片、推片、顯微鏡、香柏油、二甲苯及擦鏡紙、Miller窺盤或直徑約20 mm（較目鏡內(nèi)徑稍?。┑膱A形硬紙片（正中央開一邊長為3mm的菱形或正方形小孔，置目鏡光闌處，用于縮視野法計數(shù),三、操作步驟,1. 染色：于載玻片的一端加煌焦油藍酒精溶液1滴，任其自然涼干后備用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混勻后，將兩玻片蓋合（玻片法）；試管法取染液2滴入試管，加血2滴混勻，封閉好，待15分鐘以上時間， 2. 推片：取混合液1小滴

3、于載玻片的一端，推制成薄而均勻的血膜， 3. 低倍鏡瀏覽，選取紅細胞分布均勻網(wǎng)織紅細胞染色較好的部分（體尾交界處），滴香柏油轉(zhuǎn)換至油鏡，在Miller窺盤下計數(shù)小方格中的RBC數(shù)和大方格中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)（或數(shù)出整個視野中的RBC總數(shù)和其中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)，換一視野同法計數(shù)至幾個視野RBC總數(shù)1000為止,Miller窺盤,A,3,1,B,將Miller窺盤放在顯微鏡目鏡中,通過窺盤中大小方格間的9比1比例關系計算RBC數(shù)和Ret數(shù),四、計算,1.Miller窺盤法：網(wǎng)織紅細胞（Retic）百分率(%)= （大方格內(nèi)Retic總數(shù)）/（小方格內(nèi)RBC總數(shù)9）100% 2.直接計數(shù)法：網(wǎng)織紅細胞（R

4、etic）百分率(%)= 多個視野內(nèi)Retic總數(shù)/多個視野內(nèi)RBC總數(shù)100,五、注意事項,1.用酒精染液時，應待玻璃片上的酒精揮發(fā)干燥后，才能加血液，染色時應用推片角不停攪動，使染料和血液混合，防止凝固。 2.染色時間一定要充足，混合后不能立即推片，室溫低時染色時間應適當延長，應覆以另一玻片防止蒸發(fā)。 3.染液與血液比例以1：1為宜，貧血適當加血量。 4.涂片厚薄均勻適宜，弓形移動，多個區(qū)域計數(shù) 5.試劑應定期重配，以免變質(zhì)沉淀。 6.與變性珠蛋白小體鑒別,六、參考值,成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） 新生兒：0.02-0.06（2%-6%） 兒童：0.005-0.075

5、（0.5%-7.5%） 成人絕對值（24-84） 109/L,七、臨床意義,1）評價骨髓增生能力，判斷貧血類型 再障時，明顯降低。絕對值低于5109/L可做為急性再障的輔助診斷指標。 失血、多數(shù)溶血性貧血患者網(wǎng)織紅細胞可明顯高于正常。 營養(yǎng)不良性貧血在治療前網(wǎng)織紅細胞可保持正常、輕度升高或降低,2）評價療效 網(wǎng)織紅細胞反應：IDA或巨幼細胞貧血分別給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療23d后，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值開始上升，710d達到最高(10%左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細胞、血紅蛋白開始升高。 骨髓移植、EPO治療后：若骨髓開始恢復造血功能，RMI升高，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值上升,3）放、化療監(jiān)測 機體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才檢測到網(wǎng)織紅細胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復后，又見上述指標依次上升?？芍笇R床醫(yī)師適時調(diào)整治療方案，避免造成嚴重的骨髓抑制,RPI=病人網(wǎng)織紅細胞（%）/2 * 病人HCT/正常人HCT（男0.45，女0.40） 臨床應用： 3提示溶血性貧血或急性失血性貧血,網(wǎng)織紅生成指數(shù)（Reticulocyte p