精選微生物檢驗方法驗證

1、微生物檢驗方法驗證 珠海國信達(dá) 重點議題 ?一、法規(guī)要求 ?二、驗證目的 ?三、檢驗概述 ?四、總菌落數(shù)檢查方法驗證 ?五、控制菌檢查方法驗證 ?六、無菌檢查方法驗證 一、法規(guī)要求 第二百二十六條 試劑、試液、培養(yǎng)基和檢定菌的管理應(yīng)當(dāng)至少符合以下 要求： ?（一） 試劑和培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)從可靠的供應(yīng)商處采購，必要時應(yīng)當(dāng)對供應(yīng) 商進(jìn)行評估； ?（二） 應(yīng)當(dāng)有接收試劑、試液、培養(yǎng)基的記錄，必要時，應(yīng)當(dāng)在試劑、 試液、 培養(yǎng)基的容器上標(biāo)注接收日期； ?（三）應(yīng)當(dāng)按照相關(guān)規(guī)定或使用說明配制、貯存和使用試劑、試液和 培養(yǎng)基。 特殊情況下，在接收或使用前，還應(yīng)當(dāng)對試劑進(jìn)行鑒別或其 他檢驗； ?（四）試液和已配制

2、的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)標(biāo)注配制批號、配制日期和配制人 員姓名，并有配制（包括滅菌）記錄。不穩(wěn)定的試劑、試液和培養(yǎng)基 應(yīng)當(dāng)標(biāo)注有效期及特殊貯存條件。標(biāo)準(zhǔn)液、滴定液還應(yīng)當(dāng)標(biāo)注最后一 次標(biāo)化的日期和校正因子，并有標(biāo)化記錄； 一、法規(guī)要求 第二百二十六條 （續(xù)） ?（五）配制的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)進(jìn)行 適用性檢查，并有相關(guān)記錄。 應(yīng)當(dāng)有培養(yǎng)基使用記錄； ?（六）應(yīng)當(dāng)有檢驗所需的各種檢定菌，并建立 檢定菌保存、 傳代、使用、銷毀的操作規(guī)程和相應(yīng)記錄； ?（七） 檢定菌應(yīng)當(dāng)有適當(dāng)?shù)臉?biāo)識，內(nèi)容至少包括菌種名稱、 編號、代次、傳代 日期、傳代操作人； ?（八）檢定菌應(yīng)當(dāng)按照規(guī)定的條件貯存，貯存的方式和時 間不應(yīng)當(dāng)對檢定菌的 生長

3、特性有不利影響。 二、驗證目的 ?為了使微生物學(xué)檢驗方法的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，需要 對每個品種的具體檢驗方法進(jìn)行驗證。 三、驗證概述 ?微生物學(xué)檢驗方法包括： ?1.微生物限度檢查 ?2.無菌檢查 ?3.防腐劑抑菌效力測定 總菌落數(shù)檢查（回收率） 控制菌檢查（專屬性） 三、驗證概述 ?微生物學(xué)檢驗的影響因素： ?1.藥品本身的抑菌性 ?2.藥品中防腐劑的抑菌性 ?3.培養(yǎng)基的促菌生長能力 ?4.培養(yǎng)條件（溫度、濕度及需氧或厭氧） ?5.過濾系統(tǒng)的材質(zhì) 三、驗證概述 ?消除抑菌性的方法: ?一、化學(xué)中和法 用化學(xué)中和劑中和抑菌劑，消除抑菌作用。 ?二、稀釋法 降低抑菌劑的濃度以消除抑菌性。 ?三、薄膜

4、過濾法 抑菌性產(chǎn)品通過濾膜時，微生物被截留在膜上，檢品被過濾掉。 微生物檢查法準(zhǔn)確與否的核心是對抑菌性的有效消除 四、總菌落數(shù)檢查方法驗證 ?環(huán)境條件：C級下的局部A級的單向流空氣區(qū)域 ?培養(yǎng)基種類： ?細(xì)菌計數(shù) 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 ?霉菌和酵母菌計數(shù) 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 ?酵母菌計數(shù) 酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 四、總菌落數(shù)檢查方法驗證 ?培養(yǎng)基適用性檢查 被檢培養(yǎng)基 培養(yǎng)結(jié)果 試驗菌 試驗菌 被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不得小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70% 菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致 50100cfu 50100cfu 適 宜 培 養(yǎng) 條 件 . . . . . . . . .

5、. . . . . . . . . . . 四、總菌落數(shù)檢查方法驗證 ?方法驗證對細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證： 進(jìn)行3次獨立的平行試驗，分別計算各組回收率。 （1）試驗組 平皿法計數(shù) 薄膜過濾法計數(shù) 最低稀釋級供試液1ml + 2個瓊脂培養(yǎng)基平皿 試驗菌50100cfu 取規(guī)定量的最低稀釋級供試液，過濾，沖洗，在最后一次沖洗液中 加試驗菌50100cfu，過濾。 四、總菌落數(shù)檢查方法驗證 （2）菌液組 直接接種試驗菌 （3）供試品對照組 取規(guī)定量供試液，按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。 （4）稀釋劑對照組 用相應(yīng)的稀釋劑代替供試品，加入試驗菌。 （若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心

6、或薄膜過濾等特殊處理時， 需增加稀釋劑對照組。） 四、總菌落數(shù)檢查方法驗證 ?合格標(biāo)準(zhǔn)： ?在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌數(shù)回收率（稀釋劑對照 組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應(yīng)均不低于70%。 ?試驗組的菌數(shù)回收率均不低于70% 菌液組平均菌落數(shù) 落數(shù)供試品對照組的平均菌試驗組平均菌落數(shù) 試驗組菌數(shù)回收率 - ? 五、控制菌檢查方法驗證 ?環(huán)境條件：C級下的局部A級的單向流空氣區(qū)域 ?培養(yǎng)基和培養(yǎng)基試驗： ?無菌性 ?促生長能力在最短時間內(nèi)觀察到明顯生長 ?抑制能力在培養(yǎng)的最長時間內(nèi)不能觀察到微生物的生長 ?指示能力在規(guī)定的時間內(nèi)必須和以前檢驗過并已接受的培養(yǎng)基在 外觀

7、和指示反應(yīng)都具備可比性。 五、控制菌檢查方法驗證 ?方法驗證： ?按照各品種項下規(guī)定檢查的控制菌選擇驗證菌株。 ?規(guī)定量供試液+10100cfu試驗菌+增菌培養(yǎng)基 ?合格標(biāo)準(zhǔn)：檢出試驗菌 六、無菌檢查方法驗證 ?環(huán)境條件：B級下的局部A級的單向流空氣區(qū)域 ?培養(yǎng)基： ?硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 ?改良馬丁培養(yǎng)基 六、無菌檢查方法驗證 ?培養(yǎng)基的適用性檢查： ?無菌性每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支，培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。 ?靈敏度（菌液的制備見藥典附錄） 指定培養(yǎng)基 指定培養(yǎng)基 各試驗菌 空白對照： 適宜條件培養(yǎng)后，空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管生長 良好，判該批培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。 六、無菌檢查方法驗證 ?方法驗證： ?菌種及菌液的制備見藥典附錄 ?測定方法：薄膜過濾法、直接接種法 （1）薄膜過濾法：取規(guī)定量的供試品按薄膜過濾法過濾、沖洗，在最后 一次的淋洗液中加小于100cfu的試驗菌，過濾。取出薄膜接種至適宜 培養(yǎng)基中，或?qū)⑴囵B(yǎng)基加至濾筒內(nèi)。另取以裝有同體積培養(yǎng)基的容器， 加入等量試驗菌，