血糖測定-鄰甲苯胺

1、血 液 中 葡 萄 糖 的 測 定血 液 中 葡 萄 糖 的 測 定 鄰甲苯胺法鄰甲苯胺法 一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?(1)(1)了解血糖的概念。了解血糖的概念。 (2) (2) 掌握血糖的測定方法掌握血糖的測定方法鄰甲苯胺法。鄰甲苯胺法。 二、二、 實驗原理實驗原理 p血糖及正常血糖水平血糖及正常血糖水平: 血糖：指血液中的葡萄糖血糖：指血液中的葡萄糖. 正常血糖濃度：正常血糖濃度： 空腹波動在空腹波動在3.893.896.7mmol/L6.7mmol/L（7070110mg/dl110mg/dl） 餐后餐后2h2h內(nèi)應(yīng)內(nèi)應(yīng)7.8mmol/L7.8mmol/L（140mg/dl140mg/d

2、l）。）。 糖的重要生理功能 血糖的來源、去路血糖的來源、去路 p 高血糖癥與糖尿病高血糖癥與糖尿病 、高血糖癥高血糖癥: :空腹血漿血糖（空腹血漿血糖（FPGFPG）6.76.7 mmol/Lmmol/L（130mg/dl130mg/dl） 生理性：包括生理性：包括飲食性飲食性（高糖（高糖 飲食）或飲食）或情感性情感性（情緒緊張，（情緒緊張， 腎上腺分泌增加）腎上腺分泌增加） 病理性：見于病理性：見于糖尿??；內(nèi)分泌腺糖尿??；內(nèi)分泌腺（甲（甲 狀腺、腎上腺皮質(zhì)或髓質(zhì)、胰島細胞狀腺、腎上腺皮質(zhì)或髓質(zhì)、胰島細胞 功能亢進）；功能亢進）；顱內(nèi)壓顱內(nèi)壓升高刺激血糖中升高刺激血糖中 樞；嘔吐、腹瀉、高熱

3、等引起的樞；嘔吐、腹瀉、高熱等引起的脫水。脫水。 尿糖：尿糖：若血糖濃度高于腎糖閾值若血糖濃度高于腎糖閾值9.0mmol/L9.0mmol/L，出現(xiàn)尿糖。，出現(xiàn)尿糖。 糖尿?。ㄌ悄虿。╠iabetes mellitus,DMdiabetes mellitus,DM） 定義：定義：是一種慢性、復(fù)雜的代謝紊亂性疾病，系胰島素相對或絕對不是一種慢性、復(fù)雜的代謝紊亂性疾病，系胰島素相對或絕對不 足，或利用缺陷引起。足，或利用缺陷引起。 臨床特征：臨床特征：血糖持續(xù)升高，甚至出現(xiàn)糖尿。長期患有糖尿病常有脂類、血糖持續(xù)升高，甚至出現(xiàn)糖尿。長期患有糖尿病常有脂類、 蛋白質(zhì)代謝紊亂以及眼、腎的微血管病變及神經(jīng)

4、病變等蛋白質(zhì)代謝紊亂以及眼、腎的微血管病變及神經(jīng)病變等并發(fā)癥并發(fā)癥。嚴重者。嚴重者 還可出現(xiàn)水、電解質(zhì)紊亂及酸堿平衡紊亂，表現(xiàn)為高脂血癥，酮癥酸中還可出現(xiàn)水、電解質(zhì)紊亂及酸堿平衡紊亂，表現(xiàn)為高脂血癥，酮癥酸中 毒等，重者可致死亡。毒等，重者可致死亡。 糖尿病的分類 IDDM：也稱型糖尿病，好發(fā)于青春期，對胰島 素敏感。 NIDDM： 型，常見于中年肥胖病人，病變在于 靶細胞膜上的胰島素受體的數(shù)目減少或者缺陷， 因而對胰對胰島素不敏感。 繼發(fā)性糖尿?。喝缡茹t細胞瘤、庫欣病等，或其 它因素。 兩類原發(fā)性糖尿病的特征兩類原發(fā)性糖尿病的特征 特特 征征 1型型 2型型 基本病因基本病因 遺傳遺傳+環(huán)境

5、環(huán)境 發(fā)病機制發(fā)病機制 自身免疫性疾病自身免疫性疾病 生物活性降低生物活性降低 占占DM% 15% 85%（可發(fā)展為（可發(fā)展為1型）型） 發(fā)病年齡發(fā)病年齡 通常通常20歲歲 40歲歲 身體肥胖身體肥胖 罕見罕見 多見多見 血胰島素血胰島素 （絕對不足）（絕對不足）或或（相對不足）（相對不足） 病情及酮癥病情及酮癥 較重、常見較重、常見 較輕、少見較輕、少見 治療治療 胰島素敏感胰島素敏感 控制飲食、減肥控制飲食、減肥 無機化學(xué)法無機化學(xué)法 有機化學(xué)法有機化學(xué)法 酶法酶法 血糖的測定 （一）（一）無機化學(xué)法（氧化還原法）無機化學(xué)法（氧化還原法） 方法 類型 原 理 用途及備注 班氏法班氏法 半定

6、量半定量 G+Cu+Cu2O 尿糖測定尿糖測定 （Benedict） 磷鉬酸法磷鉬酸法 定量定量 G+Cu+Cu2O 歷史意義歷史意義 （Folin-Wu）分光）分光 Cu+ 磷（砷）鉬酸鹽磷（砷）鉬酸鹽 操作復(fù)雜、操作復(fù)雜、 需制濾液、需制濾液、 砷鉬酸法砷鉬酸法 同上同上 藍色絡(luò)合物藍色絡(luò)合物 特異性差特異性差、 新銅試劑法新銅試劑法 （660nm） 受還原物質(zhì)影響受還原物質(zhì)影響 結(jié)果偏高結(jié)果偏高10% 堿性高鐵堿性高鐵 同上同上 G+Fe(CN)6-3 Fe(CN)6-4 歷史意義歷史意義 氰化物法氰化物法 黃色黃色 無色無色 Technicon曾用曾用 （二）（二）有機化學(xué)法（縮合法）

7、有機化學(xué)法（縮合法） n方法方法 類型類型 原原 理理 用途及備注用途及備注 n鄰甲苯胺鄰甲苯胺 定量定量 G+鄰甲苯胺鄰甲苯胺G基胺基胺 操作簡便、操作簡便、 法法（630nm） 無需濾液、無需濾液、 特異性較高，特異性較高， 中小醫(yī)院使中小醫(yī)院使 用普遍，很用普遍，很 少用于自動少用于自動 鄰甲苯胺法鄰甲苯胺法 （三）（三）酶酶 法法 n方法 類型 原 理 用途及備注 n己糖激酶己糖激酶 定量定量 G+ATPG-6-P+ADP 血清尿液腦脊液、血清尿液腦脊液、 （HK）法）法 分光分光 G-6-P + NADP+ 公認參考方法公認參考方法 動態(tài)動態(tài) GA-6-P + NADPH 操作簡便，

8、特異操作簡便，特異 終點終點 （340nm） 性和靈敏性均高性和靈敏性均高 手工、自動化分析手工、自動化分析 n葡萄糖氧葡萄糖氧 同上同上 G+O2 GA+H2O2 推薦常規(guī)方法推薦常規(guī)方法 化酶（化酶（POD） H2O2 + 染料染料有色染料有色染料 偶聯(lián)法偶聯(lián)法 （還原型）（還原型） （氧化型）（氧化型） 可制試紙片定量可制試紙片定量 （Trinder） （4-氨基安替比林氨基安替比林+酚酚 半定量篩選試驗半定量篩選試驗 紅色琨類化合物紅色琨類化合物505nm） n方法方法 類型類型 原原 理理 用途及備注用途及備注 n葡萄糖氧葡萄糖氧 定量定量 G+O2 GA+H2O2 與與HK法有最佳

9、法有最佳 化酶氧消化酶氧消 電化學(xué)電化學(xué) 用用O2電極作極譜測定，電極作極譜測定， 相關(guān)性相關(guān)性 耗法耗法 動態(tài)動態(tài) 求求O2的消耗量的消耗量 （CX3生化儀）生化儀） 終點終點 n葡萄糖脫葡萄糖脫 定量定量 G + NAD+GA + NADH 偶有使用偶有使用 氫酶（氫酶（GDH）分光）分光 （340nm）可自動化分析）可自動化分析 法法 動態(tài)動態(tài) 刺血針刺血針 20 : 01 9.10 M 4.5 mmol 血糖儀血糖儀 二、實驗原理二、實驗原理 葡萄糖在熱的醋酸溶液中，與鄰甲苯胺縮 合成雪夫氏堿(Schiff base)。 雪夫氏堿呈蘭 綠色，其最高吸收峰為630nm波長，顏色深 淺與葡

10、萄糖含量成正比。反應(yīng)式如下: CH NH H (CHOH) CH OH 2 4 2 3 +=CO CH NH H (CHOH) CHOH 4 2 3 C OH CH N 3 H (CHOH) CH 4 2 C = OH H O 2 鄰甲苯胺 葡萄糖葡萄糖鄰甲苯胺 雪夫氏堿 （綠色） 三、實驗器材三、實驗器材 分光光度計（630nm），比色皿 計算紙（9 cm9 cm） 3. 水浴鍋 4. 10ml容量瓶 四、實驗試劑四、實驗試劑 1. 鄰甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入鄰甲苯胺150ml及2.4%硼酸 100ml，用冰醋酸定容至1升 2. 葡萄糖標準母液 （10mg/ml，用飽和苯甲酸

11、溶液配制） 3. 血清 （100ml） n血液經(jīng)抗凝處理后的全部血液為全血全血；離心除去血細胞后所得到 的淡黃色液體為血漿血漿。 n 如血液不經(jīng)抗凝處理，讓他自行凝固，則在抽血后的一段時間 內(nèi)，血液會自動在一系列凝血因子的作用下發(fā)生凝集，血液首先 凝固成一個整體，再經(jīng)過一段時間或用離心機離心，血液中凝固 的部分會與一些清澈淡黃色的液體分離開，這些液體稱為血清血清。 血清與血漿從表面上看似乎沒有什么不同，但其內(nèi)在的主要區(qū)別 是血清中不含纖維蛋白原，是未經(jīng)抗凝處理過的血液凝固后得到 的。 n血清多用于血液生化、免疫等方面的測定；血漿多用于凝血等方 面的測定；全血則多用在血細胞、血常規(guī)、血沉等方面的

12、測定。 五、實驗步驟五、實驗步驟 取5支10ml容量瓶，標號，依次加入葡萄糖母液0.25， 0.5，1.0，2.0，3.0ml，用飽和苯甲酸稀釋至10ml，混勻 （則上述溶液100ml葡萄糖含量為25，50，100，200， 300mg ）； 混勻后，置沸水中 15分鐘，立即移入冷水浴中冷卻； 以0號管調(diào)零，在630nm 處比色（見下表），以各管的 吸光度為縱坐標，相應(yīng)管中葡萄糖含量（mg）為橫坐標， 繪制標準曲線，并根據(jù)測定管吸光度查找含量。 標準曲線標準曲線（standard curve）是指通過測定一系列已 知組分的標準物質(zhì)的某理化性質(zhì)，而得到的性質(zhì)的數(shù)值曲 線。 標準曲線是標準物質(zhì)的物

13、理/化學(xué)屬性跟儀器響應(yīng)之 間的函數(shù)關(guān)系。建立標準曲線的目的是推導(dǎo)待測物質(zhì)的理 化屬性。 常用標準曲線法進行定量分析，通常情況下的標準工 作曲線是一條直線。 六、注意事項六、注意事項 1. 本法不需要除去蛋白質(zhì)，鄰甲苯胺試劑只與醛糖顯色，血液中其他還原 性物質(zhì)基本上無影響。 2. 鄰甲苯胺試劑與葡萄糖顯色的深淺及其穩(wěn)定性與試劑中鄰甲苯胺濃度、 冰醋酸濃度、加熱時間有關(guān)。此法顯色穩(wěn)定，24小時內(nèi)無變化。如將加熱時 間縮短，生成顏色容易消褪。 3. 輕度溶血的血清對結(jié)果無明顯影響。根據(jù)推導(dǎo)，血清中含血紅蛋白 450 毫克/100毫升時，可使測定結(jié)果降低約10%。 4.高脂血的標本最后顯色有時會出現(xiàn)渾

14、濁，影響測定結(jié)果?？上戎苽溲獮V液 后再行測定。 n9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。21.5.721.5.7Friday, May 07, 2021 n10、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/7/2021 9:42:28 PM n11、人總是珍惜為得到。21.5.7*May-217-May-21 n12、人亂于心，不寬余請。*Friday, May 07, 2021 n13、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。21.5.721.5.7*May 7, 2021 n14、抱最大的希望，作最大的努力。2021年5月7日星期五*21.5.7 n15、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2021年5

15、月*21.5.7*May 7, 2021 n16、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。*5/7/2021 n17、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。*21.5.7 謝謝大家謝謝大家 n9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。21.5.721.5.7Friday, May 07, 2021 n10、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/7/2021 9:42:28 PM n11、人總是珍惜為得到。21.5.7*May-217-May-21 n12、人亂于心，不寬余請。*Friday, May 07, 2021 n13、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。21.5.721.5.7*May 7, 2021 n

16、14、抱最大的希望，作最大的努力。2021年5月7日星期五*21.5.7 n15、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2021年5月*21.5.7*May 7, 2021 n16、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。*5/7/2021 n17、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。*21.5.7 謝謝大家謝謝大家 2021/4/2631 n9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2021-5-72021-5-7Friday, May 07, 2021 n10、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2021-5-72021-5-72021-5-75/7/2021 9:42:28 PM n11、人總是珍惜為得到。2021-5-72021-5-72021-5-7May-217-May-21 n12、人亂于心，不寬余請。2021-5-72021-5-72021-5-7Friday, May 07, 2021 n13、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2021-5-72