八大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定

1、實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八 大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定 2 掌握掌握PH梯度梯度 法的原理及操法的原理及操 作技術(shù)作技術(shù) 1 熟練進(jìn)行薄荷中熟練進(jìn)行薄荷中 的揮發(fā)油和青蒿的揮發(fā)油和青蒿 中的青蒿素的提中的青蒿素的提 取分離操作；取分離操作； 能進(jìn)行當(dāng)歸、丁能進(jìn)行當(dāng)歸、丁 香中揮發(fā)油的提香中揮發(fā)油的提 取分離操作。取分離操作。 3 通過磷酸氫鈣通過磷酸氫鈣 柱色譜分離大柱色譜分離大 黃酚及大黃素黃酚及大黃素 甲醚的試驗(yàn)，甲醚的試驗(yàn)， 進(jìn)一步熟悉柱進(jìn)一步熟悉柱 色譜操作技術(shù)色譜操作技術(shù) 。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?能夠運(yùn)用回流 提取法對(duì)大黃 中總蒽醌類化 合物進(jìn)行提取，

2、并能根據(jù)色譜 結(jié)果，設(shè)計(jì)液液 萃取法分離混合 物的實(shí)驗(yàn)方案。 4學(xué)習(xí)蒽醌類化合物鑒定方法 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 三、實(shí)驗(yàn)步驟三、實(shí)驗(yàn)步驟 1乙醇總提取物的制備 游離蒽醌的提取 取大黃粗粉50g，置于500ml圓底燒瓶中， 加95%乙醇以約高出生藥面為度，置水浴加熱回流23小 時(shí)，趁熱抽濾。濾渣再以95%乙醇熱提二次，趁熱抽濾后 合并三次乙醇提取液。濃縮乙醇提取液，得到乙醇總提取物。 2總游離蒽醌的提取，親脂性成分與親水性成分分離 將乙醇總提取物浸膏加水適量混懸，加乙醚150ml于500ml分 液漏斗中萃取，充分振蕩后放置，傾出醚層，再加50ml乙醚振 搖，放置，傾出醚層，同法操作6次，直至

3、乙醚液呈色較淺時(shí)為 止，合并乙醚液，乙醚溶液含總游離蒽醌。 3蒽醌的分離 大黃酸的分離 將含有游離蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中，加5% NaHCO3水溶液20ml，振搖。放置分層，放出下層NaHCO3溶 液，置于另一三角瓶中，上層乙醚溶液留存于分液漏斗中，再加 5%NaHCO3溶液15ml萃取一次，每次振搖提取后，放置分層時(shí) 間應(yīng)稍久，以免乙醚溶液混在下層水液中，影響分離效果。提取 過程中，如乙醚揮發(fā)，可酌量補(bǔ)加。合并NaHCO3提取液，注意 其呈色，在攪拌下小心滴加鹽酸調(diào)pH23，觀察酸化過程中的呈 色變化，析出物抽濾收集，干燥后稱重。 大黃素的分離 留存在分液漏斗中的乙醚液，用

4、5%Na2CO3水溶液每次 1520ml如上法相同萃取數(shù)次，直至提取液呈色較淺時(shí)為止， 約需67次，合并Na2CO3提取液，小心滴加鹽酸酸化至pH23， 放置待沉淀析出，抽濾收集析出物經(jīng)水洗滌，抽干移至表面皿上， 干燥后稱重。 大黃酚和大黃素-6-甲醚的分離 留存的乙醚液，置圓底燒瓶中，回收乙醚，放置。抽濾收 集沉淀，經(jīng)水洗，抽干移至表面皿上，干燥后稱重。 4鑒定 （1）堿液試驗(yàn)：分別取蒽醌化合物結(jié)晶少許，置試管中，加 1ml乙醇溶解，加數(shù)滴5%氫氧化鉀試劑振搖，溶液呈紅色 （2）醋酸鎂試驗(yàn)：分別取各蒽醌化合物結(jié)晶少許，置試管中， 加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴0.5%醋酸鎂試劑，產(chǎn)生橙、紅、紫等顏

5、色 （3）薄層檢識(shí) 吸附劑：硅膠CMC-Na薄層板。 樣品：各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液 對(duì)照品：1%大黃酸三氯甲烷溶液；1%大黃素三氯甲烷溶液； 1%蘆薈大黃素三氯甲烷溶液 展開劑：苯-醋酸乙酯（8 2）；苯-甲醇（8 1） 顯色：氨熏后觀察或噴5%氫氧化鉀溶液后觀察 （4）紙色譜檢識(shí) 支持劑：新華色譜濾紙（中速、20cm7cm） 樣品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液 對(duì)照品：1%大黃酸三氯甲烷溶液；1%大黃素三氯甲烷溶液； 1%蘆薈大黃素三氯甲烷溶液 展開劑：甲苯 顯色劑：0.5%醋酸鎂甲醇溶液 四、思考題四、思考題 1在實(shí)驗(yàn)過程中采用pH梯度萃取法分離游離蒽醌，萃取過程中 若出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，應(yīng)

6、如何處理？ 2大黃酚和大黃素甲醚結(jié)構(gòu)相似，怎樣分離？ 蘆薈大黃素的分離 留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液 每次15ml萃取34次。乙醚溶液再以蒸餾水萃取 23次，以洗去堿液。合并NaOH和水的提取液， 加鹽酸調(diào)pH23，放置。抽濾析出沉淀，收集沉淀， 經(jīng)水洗，抽干移至表面皿上，干燥后稱重。 （三）（三） 蒽醌類化合物的提取與分離蒽醌類化合物的提取與分離 蒽蒽 醌醌 的的 提提 取取 與與 分分 離離 提取方法提取方法 分離方法分離方法 堿溶酸沉法 蒽醌苷和游離蒽醌苷和游離 蒽醌的分離蒽醌的分離 利用利用PH梯度萃取梯度萃取 法分離法分離 有機(jī)溶劑提取法 利用色譜法分離利用色譜

7、法分離 游離蒽醌游離蒽醌 的分離的分離 蒽醌苷蒽醌苷 的分離的分離 蒽醌苷蒽醌苷 的分離的分離 游離蒽醌游離蒽醌 的分離的分離 提取方法 分離方法分離方法 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 提取法提取法 常用甲醇或常用甲醇或 乙醇提取，乙醇提取， 可將不同極可將不同極 性或類型的性或類型的 醌類成分都醌類成分都 提取出提取出 來，得到總來，得到總 醌類再進(jìn)行醌類再進(jìn)行 分離。分離。 堿溶酸沉法堿溶酸沉法 適用于具有適用于具有 酚羥基的醌酚羥基的醌 類化合物，類化合物， 由于其可溶由于其可溶 于堿液，加于堿液，加 酸后又沉酸后又沉 淀出。淀出。 游離蒽醌與蒽醌游離蒽醌與蒽醌 苷的分離苷的分離 利用苷與苷利用苷與苷 元極性不同元極性不同 ，溶解度不，溶解度不 同的特點(diǎn)進(jìn)同的特點(diǎn)進(jìn) 行分離。行分離。 pH梯度梯度 萃取法萃取法 此法是分此法是分 離游離蒽離游離蒽 醌最常用醌最常用 的方法。的方法。 是利用其是利用其 酸性的差酸性的差 異進(jìn)行分異進(jìn)行分 離的。離的。 （三）（三） 蒽醌類化合物的提取與分離蒽醌類化合物的提取與分離 色譜法色譜法 常用的吸附常用的吸附 劑有硅膠和劑有硅膠和 聚酰胺，慎聚酰胺，慎 用氧化鋁，用氧化鋁， 因羥基蒽醌因羥基蒽醌 能與氧化鋁能與氧化鋁 形成牢固的形