安腦平?jīng)_湯對腦出血大鼠胃泌素-生長抑素表達影響

1、安腦平?jīng)_湯對腦出血大鼠胃泌素生長抑素表達影響 安腦平?jīng)_湯對腦出血大鼠胃泌素、生長抑素表達的影響 周德生【sup】1【/sup】，朱婷【sup】1【/sup】，張熙【sup】2【/sup】，胡華【sup】1【/sup】，高曉峰【sup】1【/sup】，陳暉【sup】1【/sup】 （1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室，湖南 長沙 410007） 摘 要：目的：通過觀察安腦平?jīng)_湯對大鼠腦出血后血清中胃泌素（gastrin）和生長抑素（Somatostatin）表達的影響，探討安腦平?jīng)_湯對腦出血后引發(fā)急性胃粘膜病變的防治作用。方法：將120

2、只SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、安腦平?jīng)_湯組、雷尼替丁組。模型組、安腦平?jīng)_湯組、雷尼替丁組組內(nèi)又分為24h、48h、3天、5天、7天共5個時間點，在腦立體定位儀下采用型膠原酶制備大鼠腦出血模型，觀察大鼠腦出血后胃粘膜的病理變化，Elisa法檢測血清中GAS、SS的表達。結(jié)果：與模型組比較，安腦平?jīng)_湯組和雷尼替丁組胃粘膜損傷程度降低（P0.05）；安腦平?jīng)_湯組、雷尼替丁組胃泌素水平較模型組均有明顯下降（P0.05）；安腦平?jīng)_湯組生長抑素水平較模型組和雷尼替丁組均有明顯升高（P0.05）。結(jié)論：安腦平?jīng)_湯可能通過抑制胃泌素的表達，促進生長抑素的表達而發(fā)揮減輕腦出血后急性胃粘膜損傷的作用。 關(guān)鍵

3、詞：腦出血；安腦平?jīng)_湯；急性胃粘膜病變；GASSS 中圖分類號：R285 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-7717（2011）04-0795-04 Abstract:Objective:To study the effect of Annaopingchong Decoction on the expression of serum gastrin and somatostatin in intracerebral hemorrhage rat, To discussion preventive and therapeutic effects on Annaopingchong Decoc

4、tion treatment acute gastric mucosal lesion in intracerebral hemorrhage rat.Method: 120 SD rats were randomly divided into 4 group:Sham-operated group，Model group, Treatment group with Annaopingchong Decoction, Ranitidine group. They were prepared at 24h, 48h, 3d, 5d and 7d, respectively after opera

5、tion, The models were established by injecting collagenase type stereotaxicall. the pathological changes of gastric mucosal were observed on Intracerebral hemorrhage in rats, The expression of Serum GAS, SS were analyzed by Elisa.Results:Compared with model group,The degree of gastric mucosal injury

6、 was lower in Treatment group with Annaopingchong Decoction and Ranitidine group （P0.05） Compared with model group, The level of Gastrin was decreased in Annaopingchong Decoction group and Ranitidine group （P0.05）Compared with model group and Ranitidine group, The level of Somatostatin in Annaopingc

7、hong Decoction group was increased（P0.05）.Conclusion:Annaopingchong Decoction can affect the expression of gastrin and somatostatin, Reduce the acute gastric mucosal injury after cerebral hemorrhage. Key words:Cerebral Hemorrhage Annaopingchong Decoction Acute gastric mucosal lesion Gastrin Somatost

8、atin 急性胃黏膜病變是急性腦卒中的一個嚴重并發(fā)癥，常與腦卒中的嚴重程度有關(guān)，腦卒中病情越危重，急性胃黏膜損傷出血發(fā)病率就越高，程度也越重，在臨床處理上有一定困難，合并有消化道出血的患者預(yù)后亦差，病死率可達半數(shù)以上。胃黏膜攻擊因子和保護因子失衡是急性胃黏膜病變發(fā)病的重要機制，許多臨床研究表明在急性腦出血時生長抑素和胃泌素的表達與急性胃黏膜損傷有關(guān)。因此探討腦出血后急性胃黏膜損傷的防治措施在臨床上有重要意義。 1 材料與方法 1.1 動物 清潔級健康Sprague Dawley（SD）雄性大鼠，體重（20020g），共120只。湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。每籠6只，大鼠飼養(yǎng)環(huán)境保持通風(fēng)、恒

9、溫、安靜，定期更換墊料，消毒籠具。 1.2 藥物與試劑 安腦平?jīng)_湯（生龍骨30g，生牡蠣30g，懷牛膝15g，黑梔子12g，生大黃9g，黃芩12g，鉤藤12g，青木香12g，澤瀉12g，蟬蛻6g，柴胡6g，甘草6g），均購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬一醫(yī)院藥劑科。水煎煮后濃縮成1.1g/mL，貯于冰箱備用。鹽酸雷尼替丁膠囊：規(guī)格0.15 g粒，由福建古田藥業(yè)有限公司提供（批號：081202）。以生理鹽水配制成混懸液（0.5 mgmL）。型膠原酶（北京中杉金橋生物技術(shù)公司），大鼠血清胃泌素、生長抑素ELISA試劑盒（美國R&Dsystems Estradiol Elisa測定試劑盒）無水乙醇（安徽安特生

10、物化學(xué)有限公司），蘇木精伊紅染色液（上?；瘜W(xué)試劑站）。 1.3 儀器 腦立體定位儀（淮北正華生物公司）,微量進樣器（上海安亭微量進樣器廠）,多管架自動平衡離心機（上海天創(chuàng)儀器制造公司）,LEICA DM LB【sub】2【/sub】型雙目顯微鏡（德國LEICA公司產(chǎn)）,石蠟切片機（英國Shandon公司產(chǎn)）,Motic B【sub】5 【/sub】顯微攝像系統(tǒng)（麥克奧迪實業(yè)集團公司）,Thermo Multiskan Spectrum spectrophotometer酶標(biāo)儀。 1.4 方法 1.4.1 動物造模 按Rosenberg【sup】1【/sup】報道的方法造大鼠腦出血模型:大鼠腹腔

11、注射10%水合氯醛（0.35mL/100g）麻醉后，俯臥位固定于立體定位儀上，局部剪毛，絡(luò)合碘皮膚消毒，頭皮正中切口，暴露顱骨，按包新民圖譜定位【sup】2【/sup】取前囟為原點，前囟前0.2mm，中線右旁開3mm，深5.5mm為注射點（右側(cè)尾狀核），手術(shù)刀鉆孔，用固定于立體定位儀上的微量進樣器緩慢抽取含0.4U 型膠原酶的滅菌生理鹽水（0.2U/L）2L，校準后垂直進針，緩慢注射，留針5min后拔出針頭，縫合皮膚，傷口局部以絡(luò)合碘消毒、青霉素粉抗感染后，放回籠中飼養(yǎng)。假手術(shù)組以此方法注入等量滅菌生理鹽水。 1.4.2 分組與處理 將120只SD大鼠按完全隨機方法分為4組，組內(nèi)再隨機分成24

12、h、48h、3天、5天、7天，每個時間點6只大鼠，術(shù)前禁食，安腦平?jīng)_湯組（安腦平?jīng)_湯以1.5mL/100g體重灌胃），假手術(shù)組與模型組（等體積的生理鹽水灌胃），雷尼替丁組（雷尼替丁溶于等體積生理鹽水灌胃），以上各組均以造模后給藥直至處死為止，各組每天灌胃兩次。 1.4.3 評分方法 神經(jīng)功能缺損評分方法：根據(jù)Berderson【sup】3【/sup】等的評定方法分為四級。0級（0分）：未有神經(jīng)缺失癥狀；1級（1分）：將大鼠尾巴提起，癱瘓側(cè)前肢回收屈曲于腹下，正常側(cè)前肢向地面伸展；2級（2分）：除1級體征外，向癱瘓側(cè)推大鼠時阻力較對側(cè)明顯降低；3級（3分）：除以上體征外，大鼠向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn)的行為。

13、手術(shù)后2h對大鼠神經(jīng)癥狀進行評定，神經(jīng)癥狀達1、2、3級判斷為模型成功。 胃組織損傷評分方法：對每張切片隨機選取5個視野，每個視野按病變嚴重程度分級：0正常，1上皮細胞損傷和腺體破壞，2黏膜的出血性損傷和不超過黏膜下層的壞死，3超過黏膜下層的壞死和潰瘍。5個視野得分累計為其組織學(xué)損傷積分【sup】4【/sup】。 1.4.4 大體標(biāo)本觀察 將各組實驗大鼠分別于相應(yīng)時間點內(nèi)取出胃組織后處死，迅速開顱取出腦組織，觀察胃黏膜情況及大鼠顱內(nèi)血腫情況。 1.4.5 組織形態(tài)學(xué)觀察 將各組實驗大鼠分別于相應(yīng)時間點內(nèi)取出胃組織，觀察胃黏膜情況，將胃組織置于10%中性甲醛液中固定，常規(guī)酒精梯度脫水，石蠟包埋，

14、行6m切片，HE染色后行胃組織損傷評分。 1.4.6 ELISA方法測定大鼠血清中GAS、SS的表達 各組實驗大鼠分別于相應(yīng)時間點內(nèi)取動脈血5mL，離心分離血清，取大鼠血清100uL，使用大鼠血清ELISA試劑盒進行測定，測定過程嚴格按照試劑盒的說明進行操作。 1.4.7 統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料以“平均值標(biāo)準差”（s）表示。滿足正態(tài)性和方差齊性，多組間比較采用單因素方差分析；方差不齊，采用非參數(shù)檢驗。各指標(biāo)檢測結(jié)果采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析。 2 結(jié) 果 2.1 神經(jīng)功能缺損評分 造模后假手術(shù)組未見神經(jīng)功能缺損癥狀，模型組、安腦平?jīng)_湯組、雷尼替丁組大鼠均見不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀，

15、各組間神經(jīng)功能缺損評分比較無顯著性差異（P0.05）見表1。 表1 腦出血大鼠造模后神經(jīng)功能缺損評分表 注：與模型組相比，#P0.05；與安腦平?jīng)_湯組相比，P0.05。 2.2 大體標(biāo)本觀察 2.2.1 腦出血大鼠顱內(nèi)血腫情況 假手術(shù)組無出血，模型組、安腦平?jīng)_湯組和雷尼替丁組大鼠手術(shù)側(cè)均出現(xiàn)血腫，在不同時間點的血腫大小有所不同，在3天、5天、7天時間點血腫可見不同程度的吸收。 2.2.2 腦出血大鼠胃組織大體標(biāo)本觀察 假手術(shù)組大鼠胃黏膜表面光滑，未見充血、出血及糜爛、潰瘍。模型組胃黏膜明顯充血、水腫，呈黯紅色，部分可見多處糜爛和小潰瘍；安腦平?jīng)_湯組胃黏膜充血、水腫較模型組明顯減輕，色澤紅潤；雷

16、尼替丁組胃黏膜顏色稍紅潤，色澤介于模型組與安腦平?jīng)_湯組之間。 2.3 腦出血大鼠胃組織病理組織學(xué)觀察 HE染色顯示假手術(shù)組未見胃組織損傷表現(xiàn)見圖1；模型組黏膜上皮壞死脫落，腺體破壞，潰瘍形成見圖2；安腦平?jīng)_湯組部分腺上皮細胞輕度水腫，腺體排列欠整齊見圖3；雷尼替丁組胃黏膜上皮細胞灶性壞死伴腺上皮細胞水腫見圖4。 2.4 腦出血大鼠胃組織損傷評分情況 在24h時間點，模型組、安腦平?jīng)_湯組、雷尼替丁組均可見組織損傷，但損傷評分無顯著性差異（P0.05）；在其余各個時間點，安腦平?jīng)_湯組與模型組相比，雷尼替丁組與模型組相比，損傷評分有所下降，差異有顯著性意義（P0.05）見表2。 2.5 腦出血大鼠血

17、清中GAS的表達 假手術(shù)組胃泌素?zé)o明顯變化，模型組胃泌素含量明顯升高，以72h為高峰，有顯著性差異（P0.05），24h時間點，雷尼替丁組、安腦平?jīng)_湯組GAS水平與模型組相比均有所下降，雷尼替丁組與模型組差異有顯著性意義（P0.05），安腦平?jīng)_湯與模型組差異無顯著性意義（P0.05）；其余各時間點安腦平?jīng)_湯組、雷尼替丁組與模型組相比，胃泌素含量下降顯著，差異有顯著性意義（P0.05）見表3。 2.6 腦出血大鼠血清中SS的表達 在48h、72h、5天、7天各個時間點安腦平?jīng)_湯與模型組、雷尼替丁組相比，生長抑素水平均有所升高，差異有顯著性意義（P0.05）；雷尼替丁組與模型組相比，差異無顯著性意

18、義（P0.05）；雷尼替丁組與安腦平?jīng)_湯相比，差異有顯著性意義（P0.05）見表4。 3 討 論 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為SS對胃腸道消化吸收及其他內(nèi)分泌細胞起普遍性抑制作用。具有抑制胃酸、胃蛋白酶和胃泌素的分泌，刺激黏膜分泌，黏膜細胞蛋白質(zhì)合成，抑制肥大細胞脫顆粒，保護胃黏膜屏障的作用【sup】5【/sup】，并有助于胃腸道黏膜微循環(huán)改善及黏膜修復(fù)【sup】6【/sup】；GAS有刺激胃酸分泌，促進胃腸黏膜增生，促使胃蛋白促胰液素、胰液、膽汁中水和鹽等分泌的作用【sup】7【/sup】。腦出血后下丘腦或垂體的直接或間接損壞，導(dǎo)致機體交感神經(jīng)興奮，兒茶酚胺水平增高，消化道血管平滑肌收縮，胃壁血流量減少，刺

19、激胃壁G細胞分泌胃泌素，胃酸分泌增高，H【sup】+【/sup】反彌散，最后導(dǎo)致胃黏膜的糜爛【sup】8【/sup】；加之機體處于應(yīng)激狀態(tài)，內(nèi)分泌改變，生長抑素對胃泌素調(diào)節(jié)發(fā)生紊亂【sup】【/sup】9-10。因此腦出血并發(fā)急性胃黏膜病變較常見。 表2 胃組織損傷評分 注:與模型組相比,P0.05，#P0.05與安腦平?jīng)_湯組相比,P0.05。 表3 腦出血大鼠胃泌素含量（ng/L） 注:與假手術(shù)組相比, *P0.05與模型組相比,P0.05，#P0.05與安腦平?jīng)_湯組相比,P0.05。 表4 腦出血大鼠生長抑素含量（g/L） 注:與假手術(shù)組相比, *P0.05與模型組相比,P0.05，#P0

20、.05與安腦平?jīng)_湯組相比,P0.05，P0.05。 腦出血中醫(yī)為出血中風(fēng)，臟腑功能失調(diào)，氣血逆亂,是中風(fēng)病基本病機，尤其與肝、脾、沖脈密切相關(guān)。腦出血后急性胃黏膜病變?yōu)橹酗L(fēng)后變癥，在中醫(yī)屬“胃脘痛”、“吐血”、“嘔血”等范疇。葉天士臨證指南醫(yī)案云：“肝為起病之源，胃為傳病之所”，指出肝失疏泄，肝氣橫逆犯脾，肝胃不和，氣機紊亂則發(fā)病。故腦出血者并發(fā)急性胃黏膜病變的病因多為肝陽上亢，肝火橫逆，乘犯陽明燥金之地，絡(luò)破肉腐為瘍而發(fā)病。血證論云:“以沖脈麗于陽明。沖氣逆，則陽明之氣，隨逆故也?！睕_氣上沖，胃腑之氣亦失其息息下行之常，或亦轉(zhuǎn)而上逆，而出現(xiàn)胃脘痛、嘔血等氣逆諸癥【sup】11【/sup】。安

21、腦平?jīng)_湯功能鎮(zhèn)肝熄風(fēng)、平?jīng)_降逆、寧血安腦。方中懷牛膝、生龍骨、生牡蠣潛降沖脈為君藥，生大黃通降陽明，黑梔子、澤瀉清利三焦，血海寧靜，神府得安，更佐以黃芩、蟬蛻、青木香清肅肺氣，鉤藤、柴胡清疏肝氣，甘草調(diào)和陰陽，師氣機升降得復(fù)。另外，生龍骨、生牡蠣制酸護膜，生大黃、黑梔子、黃芩、青木香清胃涼血止血，懷牛膝、生大黃、蟬蛻并能活血化瘀止血，早期灌胃對消化道黏膜屏障功能起積極保護作用。故能達到降逆制酸、止血、促進潰瘍愈合目的。本實驗結(jié)果顯示，安腦平?jīng)_湯組大鼠胃組織損傷評分較模型組減低，血清GAS和SS的表達在48h、72h、5天、7天時間點與模型組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，表明安腦平?jīng)_湯可以降低腦出血大鼠GAS的水平，促進SS的表達，對胃黏膜的損傷有一定的抑制作用，這一作用可能是通過下調(diào)GAS的表達和促進SS的表達兩個方面來實現(xiàn)的。本研究為安腦平?jīng)_湯臨床治療腦出血并發(fā)急性胃黏膜病變提供了理論依據(jù)。 參考文獻 1 Rosenberg GB.Collgenose-induced intracerebral hemorrhage in ratJ.Stroke,1990,21:801. 2 包新民,斯舒云.大鼠