臨床微生物學檢驗理論課：18支原體

1、The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 支原體支原體 （MycoplasmaMycoplasma） The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 教學內容與要求教學內容與要求 l支原體的支原體的生物學概念生物學概念與生物學特性與生物學特性 l支原體的分類支原體的分類 l支原體支原體對人致病的主要疾病對人致病的主要疾病 l支原體感染患者的標本采集及支原體感染患者的標本采集及微生物微生物 檢驗檢驗 l支原體和支原體和L L型細菌的區(qū)別型細菌的區(qū)別 The 3rd Affiliate

2、d Hospital Of Southern Med. Univ. 支原體支原體 l定義：是一類缺乏細胞壁、呈高度多形定義：是一類缺乏細胞壁、呈高度多形 性、介于細菌與病毒之間、能通過除菌性、介于細菌與病毒之間、能通過除菌 濾器、在無生命培養(yǎng)基中能濾器、在無生命培養(yǎng)基中能生長繁殖的生長繁殖的 最小原核細胞型微生物。最小原核細胞型微生物。 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 生物學特點生物學特點 l能在人工培養(yǎng)基中生長能在人工培養(yǎng)基中生長 l能獨立生活能獨立生活 l最小的原核細胞型微生物最小的原核細胞型微生物 l無細胞壁無細胞壁

3、l二分裂繁殖二分裂繁殖 l多形態(tài)性，多形態(tài)性，“油煎蛋樣油煎蛋樣”菌落菌落 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 分分 類類 原核生物界（原核生物界（ProcaryotaeProcaryotae） 硬壁菌門硬壁菌門 (Firmicutes)(Firmicutes) 柔膜體綱柔膜體綱 (Mollicutes)(Mollicutes) 支原體目支原體目 (Mycoplsmatales) 支原體科支原體科 （Mycoplasmataceae)Mycoplasmataceae) 支原體屬支原體屬( (MycoplasmaMycoplasm

4、a) ) 脲原體屬脲原體屬( (UreaplasmaUreaplasma) ) 所致疾病：所致疾?。涸l(fā)性非典型肺炎原發(fā)性非典型肺炎 非淋球菌性尿道炎非淋球菌性尿道炎 等等 血蟲體屬血蟲體屬( (EperythrozoonEperythrozoon) ) 血巴爾通氏體屬血巴爾通氏體屬( (HaemobartonellaHaemobartonella) ) The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 人類支原體的常見棲居場所和致病性人類支原體的常見棲居場所和致病性 種類 棲居場所 致病性 口咽部 泌尿生殖道 唾液支原體+-_ 口腔支原體+

5、-_ 頰支原體+-_ 咽支原體+- _ 嗜脂支原體+-_ 肺炎支原體+-+ 人型支原體+ 生殖道支原體+ 發(fā)酵支原體+ 靈長支原體_+_ 嗜精子支原體-+_ 滲透支原體 -+ 解脲脲原體+ 萊氏無膽甾原體+-_ 目無膽甾原體?-_ The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 支原體與細菌支原體與細菌L L型比較型比較 性狀性狀支原體支原體細菌細菌L L型型 濾過性濾過性有有 細胞壁細胞壁無無 油煎蛋狀菌落油煎蛋狀菌落形成形成 對青霉素對青霉素抵抗抵抗 對膽固醇需要對膽固醇需要生長需要不一定需要 來源來源自然界、人與動物由細菌在環(huán)境條件下

6、誘導形成 回復變成細菌回復變成細菌不能能 遺傳性遺傳性與細菌無關與原細菌相同 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 人類支原體的生化反應人類支原體的生化反應 支原體支原體 需要需要 膽固醇膽固醇 分解分解 葡萄糖葡萄糖 水解水解 還原還原 四氮唑四氮唑 吸附吸附 血細胞血細胞精氨酸精氨酸尿素尿素 發(fā)酵支原體發(fā)酵支原體+ 肺炎支原體肺炎支原體+ 解脲脲原體解脲脲原體+ 人型支原體人型支原體+ 唾液支原體唾液支原體+ 穿通支原體穿通支原體+？+ 生殖支原體生殖支原體+ + The 3rd Affiliated Hospital Of

7、Southern Med. Univ. 一、肺炎支原體一、肺炎支原體 形態(tài)與結構形態(tài)與結構 大大 小小: :可通過濾器可通過濾器, ,光鏡下可觀察光鏡下可觀察 細胞壁細胞壁: :無無 形形 態(tài)態(tài): :球形、球桿形、分枝絲狀或念珠狀等球形、球桿形、分枝絲狀或念珠狀等 細胞膜細胞膜: :三層三層:1.:1.蛋白質蛋白質 2.2.脂質脂質( (膽固醇較多膽固醇較多) ) 3. 3.蛋白質蛋白質 染染 色色: :姬姆薩染色法姬姆薩染色法: :淡紫色或藍色淡紫色或藍色 核核 酸酸: :二種二種(DNA(DNA和和 RNA)RNA) The 3rd Affiliated Hospital Of South

8、ern Med. Univ. The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 生長繁殖生長繁殖 l繁殖方式繁殖方式: : 二分裂方式二分裂方式 球體延伸、分節(jié)斷裂、出芽、分枝球體延伸、分節(jié)斷裂、出芽、分枝 l繁殖周期繁殖周期:3:3小時小時 l營養(yǎng)要求營養(yǎng)要求: :較高較高, ,含動物血清、酵母浸液含動物血清、酵母浸液 l酸酸 堿堿 度度:

9、pH7.8:pH7.88 80 0 l氣體環(huán)境氣體環(huán)境:5:5COCO2 2 l溫度與時間溫度與時間:3:35 5,2 2d d3 3d d l菌落特征菌落特征: “: “油煎蛋油煎蛋”狀菌落狀菌落 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 抗原構造抗原構造 l主要抗原成分主要抗原成分: l1.1.蛋白質蛋白質 P1P1蛋白抗原蛋白抗原: :表面抗原表面抗原 致病致病: :粘附粘附 l2.2.脂質中的糖脂脂質中的糖脂 抗體抗體: :產生補體結合抗體產生補體結合抗體 生長抑制抗體生長抑制抗體 代謝抑制抗體代謝抑制抗體 The 3rd A

10、ffiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 抵抗力抵抗力 l理化因素理化因素: :比細菌敏感比細菌敏感( (因無細胞壁因無細胞壁) ) l熱熱: :弱弱, 50, 50經經30min30min死亡死亡 2020可長期保存可長期保存 l耐堿耐堿 l酸和有機溶劑酸和有機溶劑: :較敏感較敏感( (消毒劑、清潔劑消毒劑、清潔劑) ) l四環(huán)素族、紅霉素、卡那霉素、氯霉素四環(huán)素族、紅霉素、卡那霉素、氯霉素: : 敏感敏感 l青霉素、頭孢菌素青霉素、頭孢菌素: :不敏感不敏感 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med.

11、 Univ. 致病性致病性 l外源性感染外源性感染 l上呼吸道感染上呼吸道感染: :感冒、咽炎、氣管炎感冒、咽炎、氣管炎 l支原體性肺炎支原體性肺炎 l原發(fā)性非典型肺炎原發(fā)性非典型肺炎 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. l 世界各地世界各地, ,密集人群密集人群, ,兒童及青少年多見兒童及青少年多見 l 秋冬季發(fā)病率高秋冬季發(fā)病率高, ,每隔每隔3 35 5年出現一次流行年出現一次流行 l 飛沫傳播飛沫傳播 l 潛伏期潛伏期2W2W3W,3W,感染起病緩慢感染起病緩慢 l 臨床主要癥狀臨床主要癥狀: :發(fā)熱（約發(fā)熱（約3939

12、）、頭痛、持續(xù)性頑）、頭痛、持續(xù)性頑 固咳嗽、胸痛等。固咳嗽、胸痛等。 l 病人帶菌、排菌狀態(tài)可持續(xù)病人帶菌、排菌狀態(tài)可持續(xù)6W6W8W8W l 肺外合并癥（神經系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及心臟等）發(fā)肺外合并癥（神經系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及心臟等）發(fā) 病率高，嚴重者可致死病率高，嚴重者可致死 l 致病性致病性: :粘附是先決條件粘附是先決條件 l 也和超敏反應有關也和超敏反應有關( (共同抗原共同抗原) ) The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 免疫性免疫性 l抗體：多種抗體：多種(CF(CF抗體、生長抑制抗體、抗體、生長抑制抗體、 殺支原體抗體等殺

13、支原體抗體等) ) 呼吸道呼吸道sIgA:sIgA:有一定作用有一定作用 l非特異冷凝集素非特異冷凝集素: : 1. 1.和自身免疫有關和自身免疫有關 2.2.患者陽性率為患者陽性率為5050 常用于輔助診斷常用于輔助診斷 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. l病原菌分離病原菌分離 l特異核酸的檢測特異核酸的檢測 l血清學診斷血清學診斷 l抗原檢測抗原檢測 l冷凝集試驗冷凝集試驗 微生物檢測方法微生物檢測方法 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 病原菌分離病原菌分

14、離 l 標標 本：咽拭子或痰液本：咽拭子或痰液 l 培養(yǎng)基：雙相培養(yǎng)基（含馬血清、酵母浸液）培養(yǎng)基：雙相培養(yǎng)基（含馬血清、酵母浸液） SP-4SP-4培養(yǎng)基（提高分離率培養(yǎng)基（提高分離率30304040） l 氣體環(huán)境：氣體環(huán)境：5 51010CO2CO2 l 溫度與時間：溫度與時間：3 35 5，l l2W2W l 可疑菌落：可疑菌落： 1. 1. 糖發(fā)酵糖發(fā)酵 2. 2. 溶血性溶血性 3. 3. 血細胞吸附血細胞吸附 4. 4. 特異抗血清生長抑制試驗和代謝抑制試驗特異抗血清生長抑制試驗和代謝抑制試驗 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med

15、. Univ. 病原菌分離病原菌分離 l 標標 本：咽拭子或痰液本：咽拭子或痰液 l 培養(yǎng)基：液體顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)基：液體顯色培養(yǎng)基+ +藥敏一體化藥敏一體化 l 氣體環(huán)境：普通氣體環(huán)境：普通 l 溫度與時間：溫度與時間：3737，24-7224-72小時小時 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 特異性核酸的檢測特異性核酸的檢測 （1 1）聚合酶鏈反應）聚合酶鏈反應(PCR)(PCR)： 優(yōu)點：特異性好、敏感性高、快速、簡便。優(yōu)點：特異性好、敏感性高、快速、簡便。 （2 2）基因探針）基因探針 特異性強，敏感性不如特異性強，敏感性

16、不如PCRPCR技術。技術。 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 血清學診斷血清學診斷 （1 1）補體結合試驗（）補體結合試驗（CFTCFT）：）： （2 2）間接血凝試驗（）間接血凝試驗（IHAIHA）：）： 明膠顆粒凝集試驗（明膠顆粒凝集試驗（MPPAMPPA） （3 3）酶聯免疫吸附試驗）酶聯免疫吸附試驗(ELISA)(ELISA)： （4 4）間接免疫熒光試驗（間接免疫熒光試驗（IFAIFA）： The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 抗原檢測抗原檢測 方法方

17、法1: 1: 間接法或直接法間接法或直接法 方法方法2: 2: 雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗 方法方法3: 3: 酶聯免疫吸附試驗捕獲法酶聯免疫吸附試驗捕獲法 方法方法4 4：免疫層析法：免疫層析法 方法方法5 5：免疫熒光法：免疫熒光法 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 冷凝集試驗冷凝集試驗 l 輔助診斷非典型肺炎輔助診斷非典型肺炎 l 針對紅細胞膜針對紅細胞膜抗原抗原 l 冷凝集素屬冷凝集素屬IgM IgM l 5d5d10d10d出現，出現，2W2W3W3W高峰高峰 l 輔助診斷效價輔助診斷效價:

18、 64: 64128128倍以上倍以上 雙份效價升高雙份效價升高4 4倍以上倍以上 l 特異性和敏感性較低特異性和敏感性較低 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 防防 冶冶 l 藥物藥物: : 四環(huán)素類四環(huán)素類( (近年來耐藥性增加近年來耐藥性增加) ) 大環(huán)內酯類大環(huán)內酯類: :首選首選 ( (紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素) ) 喹諾酮類喹諾酮類 l 疫苗疫苗: : 減毒活疫苗減毒活疫苗 基因工程疫苗基因工程疫苗 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med.

19、Univ. 二、泌尿生殖道支原體二、泌尿生殖道支原體 l種類：種類： 人型支原體、生殖道支原體、解脲脲原體人型支原體、生殖道支原體、解脲脲原體 l傳播途徑：傳播途徑： 性傳播性傳播 垂直傳播垂直傳播 l所致疾病：所致疾?。?非淋病性尿道炎非淋病性尿道炎 早產、流產早產、流產 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 解脲脲原體生物學性狀解脲脲原體生物學性狀 形態(tài)形態(tài): :球形、球桿狀、桿型及長絲形球形、球桿狀、桿型及長絲形 染色染色: :革蘭染色陰性，姬姆薩染色呈紫藍色革蘭染色陰性，姬姆薩染色呈紫藍色 溫度、酸堿度和時間溫度、酸堿度和

20、時間: 3: 35 5, pH 6., pH 6.3 3，2d2d3d3d 菌落菌落: :細小細小(1(10 0mm4 40m),0m),油煎蛋樣菌落油煎蛋樣菌落 （顯微鏡低倍鏡觀察）（顯微鏡低倍鏡觀察） 抗生素敏感性抗生素敏感性: : 敏感敏感: : 四環(huán)素類、大環(huán)內脂類、林可霉素四環(huán)素類、大環(huán)內脂類、林可霉素 類及喹諾酮類類及喹諾酮類 不敏感不敏感: :青霉素青霉素 生化特性生化特性: :水解尿素產氨水解尿素產氨 The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 致病性致病性 l 存存 在在: : 人和動物的口腔、呼吸道、泌尿生殖道人和動

21、物的口腔、呼吸道、泌尿生殖道 l 血清型血清型: : 解脲脲原體解脲脲原體(Uu)(Uu)有有1 16 6個血清型個血清型 l 傳播途徑傳播途徑: : 性接觸傳播、母嬰傳播性接觸傳播、母嬰傳播 l 所致疾病所致疾病 ( (STD)STD) l 泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染: NGU : NGU 、盆腔感染、宮頸炎、陰、盆腔感染、宮頸炎、陰 道炎、輸卵管炎、慢性前列腺炎、附睪炎、男女道炎、輸卵管炎、慢性前列腺炎、附睪炎、男女 不孕癥、反復流產、不孕癥、反復流產、 早產、死胎早產、死胎 l 新生兒疾病新生兒疾病: :呼吸道病變、肺炎、腦膜炎呼吸道病變、肺炎、腦膜炎 The 3rd Affiliat

22、ed Hospital Of Southern Med. Univ. 解脲支原體、人型支原體解脲支原體、人型支原體 l標本的采集：分泌物、精液、中段尿等。標本的采集：分泌物、精液、中段尿等。 l分離培養(yǎng)：分離培養(yǎng)： l 培養(yǎng)基：基本同肺炎支原體，培養(yǎng)基含培養(yǎng)基：基本同肺炎支原體，培養(yǎng)基含 0.05%0.05%尿素（精氨酸）、酚紅等。尿素（精氨酸）、酚紅等。 l pHpH：6 6. .3 3 l 培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件：3 35 5，有氧條件下生長良好。，有氧條件下生長良好。 l 培養(yǎng)時間：培養(yǎng)時間：242448h48h The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 檢驗程序：液體檢驗程序：液體固體二步培養(yǎng)法固體二步培養(yǎng)法 l 標本標本 液體培養(yǎng)基（黃色，液體培養(yǎng)基（黃色，37，Uu824小時小時,Mh13d） 液體澄清透亮變紅液體澄清透亮變紅 0.1ml轉種于固體培養(yǎng)基（轉種于固體培養(yǎng)基（37，5% CO2 Uu1-3天天,Mh37天）天） 肉眼觀察無菌落肉眼觀察無菌落(人型支原體菌落人型支原體菌落 較大），培養(yǎng)基變紅較大），培養(yǎng)基變紅