高效液相色譜儀器的使用

1、 濾膜的選擇濾膜的選擇 準(zhǔn)備流動(dòng)相準(zhǔn)備流動(dòng)相 選擇合適的濾膜 聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑， 醋酸纖維濾膜：適用于水基溶劑，不適用于有機(jī)溶劑。 尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，不適用 于DMF二甲基甲酰胺。 注意：1，每張濾膜只能用一次。 2，水相和有機(jī)相不要搞混。 流動(dòng)相使用時(shí)的注意事項(xiàng)？流動(dòng)相使用時(shí)的注意事項(xiàng)？ 樣品的準(zhǔn)備：樣品的準(zhǔn)備： 1、 ； 溶劑截止波長(zhǎng)溶劑截止波長(zhǎng) 溶溶 劑劑UV截止波長(zhǎng)截止波長(zhǎng) （nm） 乙乙 睛睛190 水水190 環(huán)環(huán) 己己 烷烷195 己己 烷烷200 甲甲 醇醇210 乙乙 醇醇210 乙乙 醚醚220 二氯甲烷二氯甲烷220 氯氯 仿仿2

2、40 四氯化碳四氯化碳265 四氫呋喃四氫呋喃280（220） 甲甲 苯苯285 1、打開(kāi)、打開(kāi)Seal Wash清洗液開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)流速清洗液開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)流速 為為2-3滴滴/min。 2、打開(kāi)計(jì)算機(jī)，進(jìn)入、打開(kāi)計(jì)算機(jī)，進(jìn)入Window操作系統(tǒng)，操作系統(tǒng)， 并運(yùn)行并運(yùn)行CAGBootp srever程序。程序。 3、打開(kāi)、打開(kāi)1100LC各模塊的電源，等待儀器各模塊的電源，等待儀器 自檢完畢，自檢完畢，1-2min。 4、雙擊桌面上、雙擊桌面上“Instrument 1 Online”圖圖 標(biāo)，進(jìn)入標(biāo)，進(jìn)入1100化學(xué)工作站化學(xué)工作站。 開(kāi)機(jī)操作： 進(jìn)入Windows系 統(tǒng)后Bootp Serve

3、r 自動(dòng)運(yùn)行，電擊 將Bootp Server窗 口最大化，開(kāi)啟 儀器電源后上面 會(huì)出現(xiàn)七行通訊 信息記錄，表明 工作站通訊成功 ，可以進(jìn)入 Agilent化學(xué)工作 站。 注意：不能關(guān)閉Bootp Server 窗口，只能最小化，否則將影 響工作站通訊。 狀態(tài)工具條 快捷工具條 自動(dòng)進(jìn)樣控制在線信號(hào)顯示儀器參數(shù)顯示區(qū) 儀器控制區(qū) 通過(guò)View切換不同的任務(wù)界面 1，方法與運(yùn)行控制方法與運(yùn)行控制-信號(hào)采集；信號(hào)采集；2， 數(shù)據(jù)處理；數(shù)據(jù)處理； 3， 報(bào)告設(shè)計(jì)；報(bào)告設(shè)計(jì)； 4， OQ/PV認(rèn)證；認(rèn)證； 5， 診斷功能；診斷功能； 對(duì)著瓶子擊左鍵，然后左鍵單擊Solvent bottles Fill

4、ing，顯示右面對(duì)話框 在Total Volume下輸入溶劑瓶容量，一 般為1.00Liter，Actual Volume下輸入溶 劑實(shí)際加入的量，比如0.5Liter 選中下面兩個(gè)選項(xiàng)后，在溶劑低于 0.1Liter時(shí)停止樣品分析，溶劑用完后泵 自動(dòng)關(guān)閉。 在工作站上開(kāi)啟儀器 每個(gè)模塊右下方都有開(kāi)關(guān)鍵，點(diǎn)擊 后出現(xiàn)開(kāi)泵、開(kāi)燈等提示，選擇 “Yes”即將泵、燈等打開(kāi)。 點(diǎn)擊“on”將打開(kāi)所有模塊，點(diǎn) 擊“off”將關(guān)閉所有模塊。 改變儀器運(yùn)行參數(shù) 對(duì)著儀器模塊點(diǎn)擊左鍵然后對(duì)著儀器模塊點(diǎn)擊左鍵然后 點(diǎn)擊點(diǎn)擊Set up Pump,顯示右顯示右 面的對(duì)話框面的對(duì)話框,在此對(duì)話框中可在此對(duì)話框中可

5、以設(shè)置泵的參數(shù)。以設(shè)置泵的參數(shù)。 柱箱、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器等柱箱、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器等 參數(shù)改變操作與此相同參數(shù)改變操作與此相同 調(diào)用/儲(chǔ)存方法 方法信息 編輯完整方法 調(diào)方法 存方法/覆蓋保存 另存方法 右圖為方法存/取對(duì)話框，方 法文件后綴名為.m 其它功能菜單 文件處理運(yùn)行控制 儀器控制序列放棄任務(wù)在線幫助 工作站任務(wù)切 換快捷鍵 方法存取快捷鍵方法存取快捷鍵序列存取快捷鍵 運(yùn)行方法運(yùn)行序列 關(guān)機(jī)操作： Agilent 1100LC泵如何維護(hù)？泵如何維護(hù)？ Agilent 1100LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無(wú)脈動(dòng)、流量準(zhǔn) 確的流動(dòng)相，及時(shí)合理的維護(hù)非常重要。 A：流動(dòng)相使用前請(qǐng)必須過(guò)濾脫氣

6、、。 B：使用緩沖鹽時(shí)，要加在線Seal-wash選項(xiàng)。 C：關(guān)機(jī)前，用 90%的水沖洗系統(tǒng)30分鐘，然后用有機(jī) 溶劑沖洗系統(tǒng)30分鐘（如甲醇），然后關(guān)泵，（適于反 相色譜柱）。正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗 D：及時(shí)更換Purge Valve內(nèi)的過(guò)濾芯。（當(dāng)打開(kāi)Purge Valve時(shí)，壓力高于10bar，表明過(guò)濾芯已堵）。 E：使用合適的密封圈。 使用梯度比例閥時(shí)要注意那些事項(xiàng)？使用梯度比例閥時(shí)要注意那些事項(xiàng)？ 當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)，鹽溶液能當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)，鹽溶液能 與有機(jī)溶劑溶液完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。與有機(jī)溶劑溶液完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。 但是在比例閥的混合點(diǎn)，重

7、力作用使鹽顆粒沉但是在比例閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒沉 淀下來(lái)，通常，閥淀下來(lái)，通常，閥A接水相接水相/鹽溶液，鹽溶液，D接有機(jī)溶接有機(jī)溶 劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并 被溶解。若顛倒過(guò)來(lái)，鹽可能落在有機(jī)溶劑中，被溶解。若顛倒過(guò)來(lái)，鹽可能落在有機(jī)溶劑中， 出現(xiàn)問(wèn)題。出現(xiàn)問(wèn)題。 強(qiáng)烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，強(qiáng)烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)， 推薦將緩沖鹽通道接在推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機(jī)溶劑通道通道上，有機(jī)溶劑通道 直接接在直接接在A通道的上方通道的上方D通道上；定期用水沖洗通道上；定期用水沖洗 所有的通道，以除去閥

8、口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。 1.更換色譜柱時(shí)要注意什么事項(xiàng)更換色譜柱時(shí)要注意什么事項(xiàng)? 在使用在使用HPLC時(shí)時(shí),應(yīng)特別注意應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影對(duì)分析結(jié)果的影 響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小45個(gè)個(gè) 數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品 進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接 管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散

9、和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬， 而使柱效降低而使柱效降低 。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果， 儀器的流動(dòng)相管路連接非常重要儀器的流動(dòng)相管路連接非常重要,一般一般Agilent 1100LC 在第一次安在第一次安 裝時(shí)裝時(shí),均有受過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的安裝工程師負(fù)責(zé)安裝均有受過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的安裝工程師負(fù)責(zé)安裝,各種接頭會(huì)處理的各種接頭會(huì)處理的 非常完美。我們只需在更換色譜柱時(shí)注意接頭處理就可以了，一般非常完美。我們只需在更換色譜柱時(shí)注意接頭處理就可以了，一般 柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口

10、為不銹鋼卡套接頭或柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口為不銹鋼卡套接頭或 PEEK管線手?jǐn)Q接頭，當(dāng)完成第一次安裝后，不銹鋼卡套已固定死，管線手?jǐn)Q接頭，當(dāng)完成第一次安裝后，不銹鋼卡套已固定死， 當(dāng)接不同的柱子時(shí)，要注意柱子接頭處的形狀和長(zhǎng)度，否則會(huì)產(chǎn)生當(dāng)接不同的柱子時(shí)，要注意柱子接頭處的形狀和長(zhǎng)度，否則會(huì)產(chǎn)生 一個(gè)非常大的死體積。一個(gè)非常大的死體積。 手動(dòng)進(jìn)樣閥需做那些維護(hù)，使用時(shí)要注意什么？手動(dòng)進(jìn)樣閥需做那些維護(hù)，使用時(shí)要注意什么？ 對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液后，或者進(jìn)濃度差異 比較大的樣品時(shí)要用專用工具而不是用帶針頭的注射器 沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： A：安裝時(shí)六通閥的5，6出口要與注射器在同一水平線 上，以防止虹吸現(xiàn)象的發(fā)生，導(dǎo)致進(jìn)樣量的重復(fù)性變異。 B：進(jìn)樣量的多少要根據(jù)定量管的體積決定。