生化儀檢測(cè)原理及應(yīng)用

1、生化儀檢測(cè)原理及應(yīng)用銀聯(lián)立生化分析技術(shù)基本原理：生化分析技術(shù)基本原理：1：反射分析技術(shù)原理：反射分析技術(shù)原理：儀器內(nèi)部光源發(fā)出一束光透過透明支持層，在試劑層光被有色化合物部分吸收后，在擴(kuò)散層提供的反射面被反射，反射光經(jīng)濾光裝置后回到光度檢測(cè)器被讀數(shù)。光密度由此被轉(zhuǎn)化為電壓讀數(shù)，并計(jì)算成分析物濃度。2散射免疫比濁法技術(shù)原理：散射免疫比濁法技術(shù)原理：是指一定波長(zhǎng)的光沿水平軸照射，通過溶液使遇到抗原抗體復(fù)合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，光線偏轉(zhuǎn)的角度與發(fā)射光的波長(zhǎng)和抗原抗體復(fù)合物顆粒大小和多少密切相關(guān)。散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量成正比。3. 透射免疫比濁法的技術(shù)原理：透射免疫比濁法的技術(shù)原理

2、：是測(cè)定一定體積的溶液通過的光線量，當(dāng)光線通過時(shí)，由于溶液中存在的抗原抗體復(fù)合物粒子對(duì)光線的反射和吸收，引起透射光的減少，測(cè)定的光通量和抗原抗體復(fù)合物的量成反比。化學(xué)發(fā)光技術(shù)基本原理：化學(xué)發(fā)光技術(shù)基本原理： 1：電化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)（：電化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)（ECL）：）：是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。包括了兩個(gè)過程，發(fā)光底物二價(jià)的三聯(lián)吡啶釕及反應(yīng)參與物三丙胺在電極表面失去電子而被氧化。氧化的三丙胺失去一個(gè)H成為強(qiáng)還原劑，將氧化型的三價(jià)釕還原成激發(fā)態(tài)的二價(jià)釕，隨即釋放光子恢復(fù)為基態(tài)的發(fā)光底物。 （發(fā)光標(biāo)記物-三聯(lián)吡啶釕） 代表儀器品牌-德國(guó)羅氏德國(guó)羅氏Cobas E601 2：化

3、學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析：化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析： 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析又稱化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA ) , 是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)有吖啶酯類化合物acridin ium ester (A E) , 是有效的發(fā)光標(biāo)記底物 , 其通過起動(dòng)發(fā)光試劑(NaOH2H2O 2 ) 作用而發(fā)光, 強(qiáng)烈的直接發(fā)光在一秒鐘內(nèi)完成, 為快速的閃爍發(fā)光。吖啶酯作為標(biāo)記物用于免疫分析, 其化學(xué)反應(yīng)簡(jiǎn)單、快速、無須催化劑; 檢測(cè)小分子抗原采用競(jìng)爭(zhēng)法, 大分子抗原則采用夾心法 , 非特異性結(jié)合少, 本底低; 與大分子的結(jié)合不會(huì)減小所產(chǎn)生的光量, 從而增加靈敏度。 代表儀器品牌

4、-美國(guó)貝克曼美國(guó)貝克曼DXC800 DXC800照片3.干化學(xué)反射分析技術(shù)原理及優(yōu)點(diǎn)：干化學(xué)反射分析技術(shù)原理及優(yōu)點(diǎn)： 與普通生化儀比較，干化學(xué)被測(cè)物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)是在干燥的基質(zhì)中進(jìn)行，入射光通過基質(zhì)被吸收后，檢測(cè)反射光的減弱程度來反映被測(cè)物質(zhì)濃度的大小。 普通生化儀反應(yīng)載體是水溶液，入射光被有色反應(yīng)產(chǎn)物吸收后減弱，通過吸光度的大小來反映被測(cè)物質(zhì)濃度的大小。 干化學(xué)均用一次性消耗品，無交叉污染和攜帶污染。缺點(diǎn)是：成本比較高。4：生化儀恒溫裝置：生化儀恒溫裝置-自動(dòng)生化分析儀通過溫度控制系統(tǒng)保持溫度的恒定，以保證反應(yīng)的正常進(jìn)行，可以對(duì)25、30、和37三種溫度進(jìn)行恒溫。保持恒溫的方式有三種： 空氣干

5、式浴恒溫空氣干式浴恒溫：在比色杯與加熱器之間隔有空氣。 優(yōu)點(diǎn)：方便，速度快，不需要特殊的保護(hù)。 缺點(diǎn)：穩(wěn)定性和均勻性稍差。 -代表儀器貝克曼代表儀器貝克曼DXC800水浴式循環(huán)加熱式水浴式循環(huán)加熱式：在比色杯周圍充盈有水，加熱器控制水的溫度。優(yōu)點(diǎn)：溫度準(zhǔn)確，可達(dá)0.1。缺點(diǎn)：需要特殊的防腐劑才能保證水質(zhì)的潔凈。-代表儀器羅氏代表儀器羅氏Modul P800 恒溫液循環(huán)間接加熱恒溫液循環(huán)間接加熱：在比色杯周圍流動(dòng)著一種特殊的恒溫液（具有無味、無污染、不變質(zhì)、不蒸發(fā)等特點(diǎn)的能夠傳導(dǎo)熱量的一種介質(zhì)），在比色杯與恒溫液又有一個(gè)幾毫米的空氣夾縫，恒溫液通過加熱夾縫的空氣達(dá)到恒溫。 優(yōu)點(diǎn)：均勻性、穩(wěn)定性優(yōu)

6、于干式，又有升溫迅速，不需要特殊保養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)。5：反滲透純水系統(tǒng)：反滲透純水系統(tǒng)： 原水為自來水，首先經(jīng)過機(jī)械過濾器，去除混在水中的鐵銹、砂、紅蟲、膠體等大顆粒雜質(zhì)；首級(jí)過濾后的水進(jìn)入活性碳濾器，活性炭對(duì)水中的余氯、有機(jī)物及異味有極高的去除效果；然后經(jīng)過軟水處理器去除水中造成結(jié)垢的鈣、鎂等離子，變成軟水。經(jīng)過處理后出來的水，再經(jīng)過5m保安過濾器，防止預(yù)處理濾料微粒及5m以上的雜質(zhì)進(jìn)入反滲透系統(tǒng)，再經(jīng)高壓泵增壓1.0MPa或1.5MPa，在此壓力下，反滲透析出純水，然后送到純水箱。 1級(jí)別 分析實(shí)驗(yàn)室用水的原水應(yīng)為飲用水或適當(dāng)純度的水。 分析實(shí)驗(yàn)室用水共分三個(gè)級(jí)別：一級(jí)水、二級(jí)水和三級(jí)水。 2一級(jí)

7、水 一級(jí)水用于有嚴(yán)格要求的分析試驗(yàn)，包括對(duì)顆粒有要求的試驗(yàn)。如高效液相色譜分析用水 一級(jí)水可用二級(jí)水經(jīng)過石英設(shè)備蒸餾或離子交換混合床處理后，再經(jīng)o2pm微孔濾膜過濾來制取。 3二級(jí)水 二級(jí)水用于無機(jī)痕量分析等試驗(yàn)，如原子吸收光譜分析用水。 二級(jí)水可用多次蒸餾或離子交換等方法制取。 4三級(jí)水 三級(jí)水用于一般化學(xué)分析試驗(yàn)。 三級(jí)水可用蒸餾或離子交換等方法制取。 5貯存 各級(jí)用水在貯存期間，其沾污成分的主要來源是容器可溶成分的溶解、空氣中二氧化碳和其他雜質(zhì)。因此，一級(jí)水不可貯存，使用前準(zhǔn)備.二級(jí)水、三級(jí)水可適量準(zhǔn)備，分別貯存在預(yù)先經(jīng)同級(jí)水清洗過的容器中。 各級(jí)用水在運(yùn)輸過程中應(yīng)避免沾污。5.2水質(zhì)常

8、引起的問題：水質(zhì)常引起的問題： Frequent Calibrations 頻繁的校正頻繁的校正 High CV% 高高CV Fluctuation in quality results over the day/week/month 積累和波動(dòng)現(xiàn)象積累和波動(dòng)現(xiàn)象 Interfered assays 直接干擾分析直接干擾分析分析儀參數(shù)設(shè)定及相關(guān)資料：分析儀參數(shù)設(shè)定及相關(guān)資料：7600基本設(shè)置雙波長(zhǎng)：雙波長(zhǎng)：有兩個(gè)不同的波長(zhǎng)即測(cè)量波長(zhǎng)（主波長(zhǎng)）和參比波長(zhǎng)（次波長(zhǎng)）。由檢測(cè)器測(cè)出的吸收度是這兩個(gè)波長(zhǎng)下吸收度的差值A(chǔ)。A與被測(cè)定物質(zhì)的濃度成正比，這個(gè)方法稱雙波長(zhǎng)法。雙波長(zhǎng)差吸光度法具有可以克服樣本混

9、濁（溶血、脂血、黃疸）、共存組分吸收譜線疊加的干擾，以及減少比色杯的光學(xué)不均一等優(yōu)點(diǎn)。空白空白(blank)校正校正:在分光光度法中，常利用空白溶液來調(diào)節(jié)儀器的吸光度零點(diǎn)，或用來抵消某些測(cè)定的干擾因素。濕化學(xué)常見的比色分析反應(yīng)類型：濕化學(xué)常見的比色分析反應(yīng)類型：直接測(cè)量：具有特征性的吸收峰，不經(jīng)過任何反應(yīng)直接在指定波長(zhǎng)測(cè)量；單一反應(yīng)：待測(cè)反應(yīng)本身有特征性吸收峰的底物或產(chǎn)物量的變化；如ALB測(cè)定原理：白蛋白+BCG-白蛋白-溴甲酚綠復(fù)合物溴甲酚綠復(fù)合物在波長(zhǎng)為570nm處吸光度最強(qiáng)，固此法ALB主波長(zhǎng)應(yīng)設(shè)定在570nm；偶聯(lián)反應(yīng)：底物或產(chǎn)物無特征性吸收峰，需經(jīng)過其他反應(yīng)生成有特征性的吸收峰測(cè)量的

10、化合物，這種反應(yīng)稱為指示反應(yīng)。如ALT測(cè)定原理：L-丙氨酸+酸戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+ 乳酸+ NAD NADH在340nm處吸光度最強(qiáng)，其吸光度與NADH的濃度成正比，固ALT此法檢測(cè)主波長(zhǎng)應(yīng)設(shè)定在340nm處。一點(diǎn)終點(diǎn)法：當(dāng)待測(cè)物與試劑反應(yīng)到達(dá)平衡，測(cè)定其吸光度，計(jì)算待測(cè)物濃度，該法在標(biāo)本正常情況下較穩(wěn)定，若空白對(duì)照較大時(shí)（如有干擾吸光度物質(zhì)）影響檢測(cè)真實(shí)值。2、兩點(diǎn)終點(diǎn)法：在被測(cè)物反應(yīng)或指示反應(yīng)未開始時(shí)，選擇第一個(gè)吸光度點(diǎn)，在反應(yīng)到達(dá)平衡后選擇第二個(gè)吸光度點(diǎn)，兩點(diǎn)吸光度點(diǎn)之差用于計(jì)算結(jié)果。此法能有效減少標(biāo)本溶血、脂血、黃疸造成的干擾。 3、連續(xù)監(jiān)測(cè)法：在零級(jí)反應(yīng)期

11、連續(xù)測(cè)定酶促反應(yīng)過程中底物或產(chǎn)物量的變化，求出酶反應(yīng)初速度，間接計(jì)算出酶活力濃度。此法主要用于酶活性及其代謝物的測(cè)定，較終點(diǎn)法準(zhǔn)確。4、兩點(diǎn)固定時(shí)間法：指在時(shí)間-吸光度曲線上取尚在反應(yīng)中的兩點(diǎn)間的差值來計(jì)算結(jié)果，此兩點(diǎn)既不是起始點(diǎn)也不是反應(yīng)終點(diǎn)。此法應(yīng)選用酶反應(yīng)的線性期進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)還應(yīng)確定該法能測(cè)定酶活性的最高限度，對(duì)于超過此限的樣品，應(yīng)采用縮短反應(yīng)時(shí)間或減少樣品用量的辦進(jìn)行測(cè)定。常見幾種報(bào)警：常見幾種報(bào)警：臨床生化檢驗(yàn)的校準(zhǔn)與質(zhì)控臨床生化檢驗(yàn)的校準(zhǔn)與質(zhì)控常用的有Linear單點(diǎn)校準(zhǔn)：需要設(shè)置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品（濃度必須大于0），以原點(diǎn)和標(biāo)準(zhǔn)品的連線為校準(zhǔn)曲線（橫坐標(biāo)為濃度C，縱坐標(biāo)為吸光度A）。單

12、點(diǎn)校準(zhǔn)必須設(shè)置空白校準(zhǔn)0點(diǎn)。Logistic-Log 4P： 標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量至少為4個(gè)，其中第1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為0，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度必須從低到高的順序排列。適用于隨著濃度的增加需吸光度偏移的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)曲線。Spline：此校準(zhǔn)方式要求提供26個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，其中第1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度必須為0，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度必須從低到高的順序排列。計(jì)算方法：K因數(shù)法（1點(diǎn)線性法）-由空白液的標(biāo)準(zhǔn)（C1）通過公式計(jì)算得出的K因數(shù)制成的曲線。K因數(shù)法測(cè)定C1（空白試劑）的吸光度時(shí)，先輸入K值，再計(jì)算濃度值。 公式：CX=K(AX-B)+C1兩點(diǎn)線性法-由空白液和含有一定濃度標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)準(zhǔn)2 的兩點(diǎn)吸光度繪制的曲線(Y=aX+b,通

13、過水來計(jì)算得到b,通過標(biāo)準(zhǔn)品來得到a.)。此法適用于所有的分析方法：1點(diǎn)法、2點(diǎn)速率法和速率法。常用項(xiàng)目：TP、ALB、TC、TG等多點(diǎn)線性（非線性）-要提供至少4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，第一個(gè)為活性為0，然后用二次函數(shù)或指數(shù)來描繪校準(zhǔn)的曲線與公式。X=K/1+A(Cx+C1)+S1ABSX：樣本吸光度或吸光度的變化量；Cx：樣本濃度；C1：標(biāo)準(zhǔn)液1濃度；常用項(xiàng)目：APOB、APOA、PA等。二：質(zhì)控質(zhì)控質(zhì)控的基礎(chǔ)就是質(zhì)控的基礎(chǔ)就是 正態(tài)分布圖正態(tài)分布圖。幾個(gè)概念：幾個(gè)概念：準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度：一個(gè)檢測(cè)結(jié)果與可接受的參考值之間的一致程度。(ISO3534-1：1993)正確度正確度：很大一個(gè)系列檢測(cè)結(jié)果的均值與可

14、接受的參考值之間的一致程度。(ISO3534-1：1993)。與系統(tǒng)誤差有關(guān)，常用偏倚(bias)表示不正確度。精密度精密度：在規(guī)定條件下獨(dú)立檢測(cè)結(jié)果之間的一致程度（ISO3534-1：1993）。與隨機(jī)誤差有關(guān)，常用SD或CV表示不精密度。靶值與SD的設(shè)定:1 平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差 質(zhì)控品的均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對(duì)質(zhì)控品重復(fù)測(cè)定的基礎(chǔ)上。2 定值質(zhì)控品 若使用定值質(zhì)控品，使用說明書上的原有標(biāo)定值只能作參考。必須由實(shí)驗(yàn)室作重測(cè)定來確定實(shí)際的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。 3 新批號(hào)質(zhì)控品均值的建立 新批號(hào)質(zhì)控品的每個(gè)項(xiàng)目都應(yīng)和現(xiàn)用的質(zhì)控品作平行檢測(cè)，最好是在不同天內(nèi)至少作 20 瓶的檢測(cè)。若無法從

15、20 天內(nèi)得到 20 個(gè)數(shù)值，至少在 5 天內(nèi)，每天作不少于 4 次重復(fù)檢測(cè)來獲得。4 新批號(hào)質(zhì)控品標(biāo)準(zhǔn)差的建立 若在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)操作穩(wěn)定，有大量質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，則由此確定的標(biāo)準(zhǔn)差評(píng)估值應(yīng)可用于新批號(hào)。但對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差評(píng)估值應(yīng)定期重新評(píng)估。若無較好的資料，則應(yīng)重新作評(píng)估。最好是在 20 天得到至少 20 個(gè)數(shù)據(jù)。在以后能有較長(zhǎng)的穩(wěn)定操作的數(shù)據(jù)時(shí)，計(jì)算的評(píng)估值更好，用其替代前者。5 累積值 由每個(gè)月質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差的估計(jì)（對(duì)均值亦有一定影響）常因檢測(cè)數(shù)的固有困難，造成月與月之間的變異較大（例如：由20 個(gè)檢測(cè)數(shù)估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)差，它和標(biāo)準(zhǔn)差真值間的差異可達(dá)30%；由 100個(gè)檢測(cè)數(shù)估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)，估計(jì)值和真值的差異還要

16、大于10%）。較好的估計(jì)是將較短時(shí)間周期內(nèi)的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)累積起來，例如，累積 6 個(gè)月連續(xù)每月質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)成為 6 個(gè)月累積值。要注意的是作為每個(gè)月周期的均值沒有持續(xù)下降或上升的改變。 3質(zhì)控統(tǒng)計(jì)方法：a L-J質(zhì)控圖質(zhì)控圖(最常用最常用) -L-J質(zhì)控曲線，全稱Levey-Jennings。1924年，美國(guó)休哈特（W.A.Shewhart）首先提出質(zhì)控圖。20世紀(jì)50年代，Levey和Jennings把質(zhì)控圖引入到臨床檢驗(yàn)中。（質(zhì)控方法是建立在單個(gè)質(zhì)控品雙份測(cè)定值的均值和極差的基礎(chǔ)上） Henry和Segalove對(duì)L-J質(zhì)控圖（X-R）進(jìn)行了修改，以20份質(zhì)控品的試驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，定出質(zhì)

17、控限，每天或每批隨患者標(biāo)本測(cè)定質(zhì)控品一次，將所得的質(zhì)控結(jié)果標(biāo)在質(zhì)控圖上。這各質(zhì)控圖一般稱為單值質(zhì)控圖，也就目前大家所熟悉的L-J質(zhì)控圖。b Z-分?jǐn)?shù)圖分?jǐn)?shù)圖-z分?jǐn)?shù)（z-score）,也叫標(biāo)準(zhǔn)分?jǐn)?shù)（standard score）是一個(gè)分?jǐn)?shù)與平均數(shù)的差再除以標(biāo)準(zhǔn)差的過程. z分?jǐn)?shù)是一種可以看出某分?jǐn)?shù)在分布中相對(duì)位置的方法。Z分?jǐn)?shù)是以標(biāo)準(zhǔn)差為單位所表示的原始分?jǐn)?shù)（x）與平均數(shù)的偏離，也可以說是一個(gè)以標(biāo)準(zhǔn)差為單位來表示的偏離分?jǐn)?shù)。Z-分?jǐn)?shù)圖就是將不同濃度水平的繪在同一圖上。分?jǐn)?shù)圖就是將不同濃度水平的繪在同一圖上。 c Youden圖圖-制作雙值質(zhì)控圖，是以低值畫在水平軸，高值畫在垂直軸，形成正方形圖

18、，正方形的中心點(diǎn)，即為兩個(gè)平均值的交叉點(diǎn)。既能區(qū)分系統(tǒng)誤差及隨機(jī)誤差，也適用于室間質(zhì)量評(píng)價(jià)?？煞秩N形式：穩(wěn)定型質(zhì)控圖穩(wěn)定型質(zhì)控圖：兩種質(zhì)控品的測(cè)定值主要變動(dòng)于BC之對(duì)角線上，集中于、區(qū)，呈橢圓形分布。 隨機(jī)誤差質(zhì)控圖隨機(jī)誤差質(zhì)控圖：兩種質(zhì)控品的測(cè)定值主要變動(dòng)于AD之對(duì)角線上，集中于、區(qū)以及其外側(cè)。 系統(tǒng)誤差質(zhì)控圖系統(tǒng)誤差質(zhì)控圖：兩種質(zhì)控品的測(cè)定值主要變動(dòng)于BC之對(duì)角線上，集中于、區(qū)：以及其外側(cè)。 質(zhì)控規(guī)則的選擇 警告（隨機(jī)誤差） 失控（隨機(jī)誤差/新的系統(tǒng)誤差） Westgard多規(guī)則檢索程序： 3：生化室內(nèi)質(zhì)控失控后的處理Westgard多規(guī)則注意問題多規(guī)則注意問題：12S警告規(guī)則，不是失控

19、規(guī)則。若本批數(shù)據(jù)無超出2S限制線（即使數(shù)據(jù)剛好落在2S限制線上），表示本批結(jié)果沒問題。沒有出現(xiàn)12S的表現(xiàn)，但數(shù)據(jù)出現(xiàn)傾向性表現(xiàn)，如多個(gè)數(shù)據(jù)偏于一側(cè)，甚至偏于+1S或-1S以外，這種情況都不屬于失控，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量目標(biāo)要求做相應(yīng)處理。失控后不恰當(dāng)?shù)淖龇ㄊЭ睾蟛磺‘?dāng)?shù)淖龇ǎ海?）重做控制品（應(yīng)用12S規(guī)則時(shí)，1個(gè)控制品時(shí)的假失控報(bào)告可能性為5%，2個(gè)控制品為9%，3個(gè)控制品是時(shí)為14%，當(dāng)出現(xiàn)12S表現(xiàn)后重做控制品，得到的控制值常在“限值內(nèi)”，感覺“這次又正好過關(guān)了”）-延誤了解決誤差的時(shí)機(jī)，將問題留給了以后。（2）試用新的控制品-將問題簡(jiǎn)單地推給控制品。（3）重新校準(zhǔn)-掩蓋問題真相。 失控后比較恰當(dāng)?shù)奶幚聿襟E：a檢查控制圖或失控的規(guī)則,確定誤差類型13S和R4S規(guī)則通常提示隨機(jī)誤差。22S 、41S 和10X規(guī)則