保健食品有助于控制體內(nèi)脂肪檢驗方法

1、保健食品有助于控制體內(nèi)脂肪檢驗方法1 動物實驗1.1 原理 本方法是以高熱量食物誘發(fā)動物肥胖，再給予受試樣品（肥胖模型），或在給予高熱量食物同時給予受試樣品（預(yù)防肥胖模型），觀察動物體重、體內(nèi)脂肪含量的變化。1.2 儀器及試劑 動物天平，解剖器械等，戊巴比妥鈉。1.3 實驗方法1.3.1 實驗動物 選用雄性大鼠，適應(yīng)期結(jié)束時，體重200±20g，每組8-12只。1.3.2劑量分組及受試樣品給予時間實驗設(shè)三個劑量組和一個模型對照組，以人體推薦量的5倍為其中的一個劑量組，另設(shè)兩個劑量組，必要時設(shè)陽性對照組和空白對照組。受試樣品給予時間至少給予6周，不超過10周。1.3.3高熱量模型飼料在

2、維持飼料中添加15.0%蔗糖、15.0%豬油、適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。除了粗脂肪外，模型飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣：磷均要達(dá)到維持飼料的國家標(biāo)準(zhǔn)。1.3.4 實驗步驟1.3.4.1肥胖模型法1.3.4.1.1適應(yīng)期：于屏障系統(tǒng)下大鼠喂飼維持飼料觀察57天。1.3.4.1.2造模期：適應(yīng)期結(jié)束后按體重隨機分成2組，10只大鼠給予維持飼料作為空白對照組，60只大鼠給予高熱量模型飼料。每周記錄給食量、撒食量、剩食量，稱量體重1次。喂養(yǎng)2周后，給予高熱量飼料的60只大鼠按體重增重排序，淘汰體重增重較低的1/3肥胖抵抗大鼠。將篩選出的40只肥胖敏感大鼠再給予高熱量飼料

3、6周，空白對照組同時給予維持飼料。1.3.4.1.3受試樣品給予：造模期結(jié)束后，40只肥胖敏感大鼠按體重隨機分成4組，分別為模型對照組和三個劑量組。每周記錄給食量、撒食量、剩食量，稱量體重1次。模型對照組和三個劑量組給予高熱量模型飼料，空白對照組給予維持飼料。各劑量組灌胃給予不同劑量的受試樣品，模型對照組和空白對照組給予等量的相應(yīng)溶劑，受試樣品給予時間6周，不超過10周。試驗結(jié)束后，稱體重，1%戊巴比妥鈉（0.5mL/100g BW）麻醉，解剖取腎周圍脂肪、睪丸周圍脂肪，并稱重，計算脂/體比。1.3.4.2預(yù)防肥胖模型法1.3.4.2.1適應(yīng)期：于屏障系統(tǒng)下大鼠喂飼維持飼料觀察57天。1.3.

4、4.2.2造模篩選期：適應(yīng)期結(jié)束后按體重隨機分成2組，10只大鼠給予維持飼料作為空白對照組，60只給予高熱量飼料作為模型組。每周記錄給食量、撒食量、剩食量，稱量體重1次。喂養(yǎng)2周后，給予高熱量飼料的大鼠按體重增重排序，淘汰體重增重較低的1/3肥胖抵抗大鼠。1.3.4.1.3受試樣品給予：將篩選出的40只肥胖敏感大鼠按體重隨機分成4組，分別為模型組和三個劑量組。模型對照組和三個劑量組給予高熱量模型飼料，空白對照組給予維持飼料。各劑量組灌胃給予不同劑量的受試樣品，模型對照組和空白對照組給予等量的相應(yīng)溶劑，受試樣品給予時間6周，不超過10周。每周記錄給食量、撒食量、剩食量，稱量體重1次。試驗結(jié)束后，

5、稱體重，1%戊巴比妥鈉（0.5mL/100g BW）麻醉，解剖取腎周圍脂肪、睪丸周圍脂肪，并稱重，計算脂/體比。1.3.5 觀察指標(biāo)體重、體重增重、攝食量、攝入總熱量（攝食量×每公斤飼料熱量）、食物利用率、體內(nèi)脂肪含量（睪丸及腎周圍脂肪墊）、脂肪/體重。1.4 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值F0.05，P0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計；若變

6、量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計。采用方差分析加q檢驗進(jìn)行統(tǒng)計。實驗組的體重或體重增重低于模型對照組，體內(nèi)脂肪含量或脂/體比低于模型對照組，差異有顯著性，攝食量不顯著低于模型對照組，可判定該受試樣品有助于控制體內(nèi)脂肪動物實驗結(jié)果陽性。2 人體試食試驗2.1 原理單純性肥胖受試者食用受試樣品，觀察體重、體內(nèi)脂肪含量的變化及對機體健康有無損害。2.2 儀器 體成分測定設(shè)備、功率自行車、心率監(jiān)測器、B超、皮卡鉗、體重計。2.3 試驗方法2.3.1 受試者納入標(biāo)準(zhǔn) 受試對象為單純性肥胖人群，成人BMI30，或總脂肪百分率達(dá)到男>25%，女>30%的自愿受試者。2.3

7、.2 受試者排除標(biāo)準(zhǔn)2.3.2.1 合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病，精神病患者。2.3.2.2 短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對結(jié)果的判斷者。2.3.2.3未按規(guī)定食用受試樣品，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。2.3.3 試驗設(shè)計及分組要求2.3.3.1不替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪試驗采用自身對照及組間對照試驗設(shè)計。按受試者的體重、體內(nèi)脂肪含量隨機分為試食組和對照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別、飲食、運動狀況等，進(jìn)行均衡性檢驗，以保證組間的可比性。每組受試者不少于50例。2.3.3.2 替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪試驗替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪試驗

8、只設(shè)單一試食組，有效例數(shù)不少于50人，采用自身對照，不另設(shè)對照組。2.3.4 受試樣品的劑量和使用方法不替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪受試樣品：試食組按推薦服用方法、服用量服用受試產(chǎn)品，對照組可服用安慰劑或采用空白對照。按盲法進(jìn)行試食試驗。受試樣品給予時間至少60天。替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪受試樣品：建議取代每天12餐主食，并能保證消費者同時攝取充足的營養(yǎng)素，應(yīng)鼓勵增加果蔬攝入量。受試者按推薦方法和推薦劑量服用受試樣品，受試樣品給予時間至少35天。2.3.5 觀察指標(biāo)2.3.5.1 安全性指標(biāo)2.3.5.1.1 一般狀況（包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等）2.3.5.1.2 血、尿、便常

9、規(guī)檢查2.3.5.1.3 肝、腎功能檢查2.3.5.1.4 胸片、心電圖、腹部B超檢查（各項指標(biāo)于試驗前檢查一次）2.3.5.1.5 血尿酸、尿酮體2.3.5.1.6 運動耐力測試：運動耐力測試方法為功率自行車試驗。 試食前后受試者以相同的運動方案做功率自行車試驗，記錄心率，并應(yīng)用Astrand和Ryhming的列線圖法間接測定每個受試者的最大攝氧量（L/分）。2.3.5.1.7 其它不良反應(yīng)觀察：如厭食、腹瀉等2.3.5.2 膳食因素及運動情況觀察不替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪試驗需對受試者試驗開始前、結(jié)束前進(jìn)行三天的詢問法膳食調(diào)查，為排除飲食因素對試驗結(jié)果的影響，要求盡可能與日常飲食相一致

10、。對試驗期間受試者的運動狀況進(jìn)行詢問觀察，要求與日常運動情況一致。替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪試驗，除開展不替代主食的設(shè)計指標(biāo)外，還應(yīng)設(shè)立身體活動、情緒、工作能力等測量表格，排除服用受試樣品后無相應(yīng)的負(fù)面影響產(chǎn)生。結(jié)合替代主食的受試樣品配方，對每日膳食進(jìn)行營養(yǎng)學(xué)評估。 每日能量攝入量男性、女性分別不低于1200kcal、1000kcal，每日主要營養(yǎng)素攝入量要達(dá)到人體膳食營養(yǎng)素參考攝入量（DRIs），蛋白質(zhì)（男：75g，女：65g），鈣（800mg），磷（700mg），鉀（2000mg），鈉（2200mg），鎂（350mg），鐵（男：15mg，女20mg），維生素A（男：800µg，

11、女：700µg）維生素D（5µg）。2.3.5.3 功效性指標(biāo)2.3.5.3.1 體重，身高，腰圍（臍周）、臀圍，并計算體質(zhì)指數(shù)（BMI），標(biāo)準(zhǔn)體重、超重度。體重（kg）成年人（BMI）身高2（m2）實測體重標(biāo)準(zhǔn)體重超重度（%） ×100%標(biāo)準(zhǔn)體重 2.3.5.3.2 體內(nèi)脂肪含量的測定 體內(nèi)脂肪總量和脂肪占體重百分率，用水下稱重法或電阻抗法。 皮下脂肪厚度用B超測定法或皮卡鉗法，4個測定位點見下表A點右三角肌下緣臂外側(cè)正中點B點右肩胛下角C點右臍旁3cmD點右髂前上棘2.4 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定試驗數(shù)據(jù)為計量資料，可用t檢驗進(jìn)行分析。凡自身對照資料可以采用配對t檢驗，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t檢驗或秩和檢驗；但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗。3 結(jié)果判定不替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪受試樣品：試食組自身比較及試食后試食組與對照組比較，其體內(nèi)脂肪含量減少，皮下脂肪四個點中至少有兩個點減少，腰圍與臀圍之一減少，且差異有顯著性（P<0.05），運動耐力不下降，對機體健康無不良影響，并排除膳食及運動對有助于控制體內(nèi)脂肪作用