高效液相操作步驟

1、Agilent 1200 LC1、儀器設(shè)備： Agligengt 1200 LC* G1310A :（單元泵）;G1312A G1312B XL:（二元泵）;G1311A （四元泵）* G1329A （標(biāo)準(zhǔn)型自動(dòng)進(jìn)樣器）* G1316A，G1316B XL:* G1314B ，G1314C XL:* G1362A （示差僉測(cè)器）* G1315B ，G1315C XL:* G1365B ，G1365C XL:* G1321A （ FLD 檢測(cè)器）柱溫箱）（VWD僉測(cè)器）（DAD僉測(cè)器）（MW 僉測(cè)器）*色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C18 150 x ,5um columnP/N

2、993967-902/5063-66002、溶劑準(zhǔn)備:*色譜級(jí)純或優(yōu)級(jí)純乙腈或甲醇*二次蒸餾水 基本操作步驟:（一）開(kāi)機(jī)1 、打開(kāi)計(jì)算機(jī)，進(jìn)入 Windows 2000 （或 Windows XP ）畫(huà)面。（ IP 地址由 Bootp Service 程 序?qū)懭耄?、打開(kāi) 1200LC 各模塊電源3、 待各模塊自檢完成后，雙擊“Instrument 1 On line ”圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與 1200LC 通訊， 進(jìn)入工作站畫(huà)面。4、從“ View ”菜單中選擇“ Method and Run control ”畫(huà)面，點(diǎn)擊“ View ”菜單中得“ Show TopToolbar”， “Sh

3、ow status toolbar”， “System diagram”， “Sampling diagram”，“2”標(biāo)志，來(lái)調(diào)用所需的界面。 把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。打開(kāi)“ Purge”閥。點(diǎn)擊“ Pump 圖標(biāo)，設(shè) Flow: 3-5ml/min點(diǎn)擊“ Pump 圖標(biāo)，使其命令前有5、6、7、8、9、點(diǎn)擊“，點(diǎn)擊點(diǎn)擊“Setup pump ”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫(huà)面。OK”。Pump control ”選項(xiàng)，選中“ On” , 點(diǎn)擊“ OK”。Purge ，則系統(tǒng)開(kāi)始直到所有要Purge,直到管線(xiàn)內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止，切換通道繼續(xù) 用通道無(wú)氣泡為止。10、點(diǎn)擊“ Pump 圖標(biāo)，點(diǎn)

4、擊“ PumpControl ”選項(xiàng)，選中“ Of ”，點(diǎn)擊“ OK”關(guān)泵，關(guān)閉 Purgevalue 。11、點(diǎn)擊“ Pump 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“ Set up pump ”選項(xiàng)，設(shè) Flow:min。12、點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo),如下圖所示（以四元泵為例） 也可輸入停泵的體積 。點(diǎn)擊“ OK”。（二）數(shù)據(jù)采集方法編輯:1 、開(kāi)始編輯方法:從“Method”菜單中選擇 “ Edit entire method”項(xiàng)，外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊“ OK,進(jìn)入下一畫(huà)面。2、方法信息:（1）在“ Method Comments”中寫(xiě)入方法的信息（如：，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。如上圖所示選中除 “ Data analy

5、sis ”This is fortest）。（2）點(diǎn)擊“ OK”進(jìn)入下一畫(huà)面。3、 泵參數(shù)設(shè)置： （以四元泵為例）（1）在“ Flow ”處輸入流量，如 min，在“ Solve nt B ” 處輸入 70,（ A=100-B-C-D）,也可Insert 一行，“ Timetable ”，編輯梯度。在“ Pressure Limits Max ”處輸入柱子的最大耐 高壓,以保護(hù)柱子。（2）點(diǎn)擊“ OK 進(jìn)入下一畫(huà)面。4、 自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定：（以標(biāo)準(zhǔn)型 G1329A 為例）（ 1 ）選擇合適的進(jìn)樣方式,進(jìn)樣體積,洗瓶位置為入進(jìn)樣體積,此方式無(wú)洗針功能） 。“ Injection withNee

6、dle Wash 洗瓶位置,此方式針從樣品瓶抽完樣品后,會(huì)在洗瓶中洗針 可以點(diǎn)擊“ Edit ”鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。（2）點(diǎn)擊“ OK 進(jìn)入下一畫(huà)面。5、 柱溫箱參數(shù)設(shè)定：（1）G1316A 在“Temperature ”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度， 鍵選中“ Same as left ”使柱溫箱的溫度左右一致。G1316B 在“ Temperature ”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度或與檢測(cè)池一致，并選中 它，點(diǎn)擊“ more”鍵，選中“ Same as left ”使柱溫箱的溫度左右一致與檢測(cè)池一致。（2）點(diǎn)擊“ OK進(jìn)入下一畫(huà)面。6、 VWD 僉測(cè)器參數(shù)設(shè)定（1） G1314B 在“

7、Wavelength ”下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng)，如 width（Response time） ”下方點(diǎn)擊下拉式箭頭,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間,如 速率。G1314C 在“ Wavelength ”下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng)，如 width（Response time） ”下方點(diǎn)擊下拉式箭頭,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間,如 速率 55HZ。（2）在 Timetable 中可以“Insert ” 一行，輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)，如1min,波長(zhǎng)=300nm點(diǎn)擊“ OK進(jìn)入下一畫(huà)面。7、DAD 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定：（1）G1315B 檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm,BW=4nm 參比波長(zhǎng)=360nm BW=100nm檢

8、測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇最大吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬 BW般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸收區(qū)域。參比帶寬 BW 至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等，許多情況下用 100nm 作為缺省值。Peak width （Response time）:其值盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬。 Slit: 狹縫窄,光譜分辨率高；寬時(shí),噪音低。同時(shí)可以 輸入采集光譜方式,步長(zhǎng),范圍,閾值。選中所用的燈。G1315C XL:可以開(kāi)啟光學(xué)單元溫度控制；可以設(shè)定8 通道信號(hào)等。（2）點(diǎn)擊“ OK 進(jìn)入下一畫(huà)面。8、RID 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定：（ 1 ）色譜條件：進(jìn)樣體積：20ul ;流速：min;

9、光學(xué)單元溫度：35C；柱箱溫度：25C；極性：正；峰 寬（響應(yīng)時(shí)間） ： 4s。（ 2）“ Optical Unit Temperature ” 境溫度不穩(wěn)定, 則設(shè)定光學(xué)單元。 溫度為高于環(huán)境溫度 5 度,以防止樣品在池中沉淀。width ” 大多數(shù)分析設(shè)為 4S,只有在高速分析6 號(hào)?！?Standard Injection ”(只能輸 ”( 可以輸入進(jìn)樣體積和 Use injectionprogram ”）。并選中它，點(diǎn)擊“more”254nm，（2s）。在“ Peak最快采樣254nm，（2s）。在“ Peak最快采樣若環(huán)境溫度控制在2C,設(shè)定為“ Off”，若環(huán)“ Peakafter

10、可隨時(shí)下設(shè)為更短。“ Automatic recycling analysis ”在不進(jìn)行分析時(shí)可以讓流動(dòng)相循環(huán), 節(jié)省流動(dòng)相, 檢測(cè)器連續(xù)運(yùn)行,投入使用。（3）點(diǎn)擊 RID 圖標(biāo)，選擇“ RID Co ntrol ”： Heater 設(shè)為“ On,若要循環(huán)流動(dòng)相，必須將”Recycii ng Valve ”設(shè)為“ On。手動(dòng) Purge 參比池，將其設(shè)為“ On。9、 FLD 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定：色譜條件：* 樣品： P/N 01018-68704 用甲醇稀釋為 1:10* ODS Hypersial column 125mm xx 5u* 流動(dòng)相： A:Water 35% B ：乙腈 65%*

11、 進(jìn)樣體積：5ul ;柱溫箱：30C； EX 246nm, EM=317nm PMT=10* 響應(yīng)時(shí)間 =4s 停止時(shí)間： 4min* Excitation A : 激發(fā)波長(zhǎng)：200-700nm,步長(zhǎng)為 1nm,或 Zero Order* Emission:發(fā)射波長(zhǎng)：280-900nm，步長(zhǎng)為 1nm,或 Zero Order* PMT: 多數(shù)應(yīng)用適當(dāng)?shù)脑O(shè)定直為 10,若高濃度樣品峰被切平頭,則減少*“ Peak width :大多數(shù)應(yīng)用設(shè)為 4s，只有快速分析采用小的設(shè)定值* Multi Ex: 多波長(zhǎng)及光譜（激發(fā)）* Multi Em ：多波長(zhǎng)及光譜（發(fā)射）*同時(shí)可以輸入范圍 Range、

12、步長(zhǎng) step、采集光譜10、 在“ Run time checklist 中選中 Data acquisition ,點(diǎn)擊“自動(dòng)進(jìn)樣器,則基線(xiàn)平穩(wěn)后,進(jìn)樣并搬動(dòng)手動(dòng)進(jìn)樣閥,啟動(dòng)運(yùn)行）（三）數(shù)據(jù)分析方法編輯：1、從“ View”菜單中，點(diǎn)擊“ Data analysis ”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫(huà)面。2、 從“ File ”菜單選擇“ Load signal ”，選中您的數(shù)據(jù)文件名，點(diǎn)擊“O 心則數(shù)據(jù)被調(diào) 出。3、做圖譜優(yōu)化：從 “Graphics ”菜單中選擇 “Signal option ” 選項(xiàng)。從“Ranges” 中選擇 “Full ” 或Autoscale ”及合適的顯示時(shí)間或選擇“Use R

13、anges”調(diào)整。反復(fù)運(yùn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊“ OK”。4、積分：*從 “ Integration ” 菜單 中 選擇“ Integrationsensitivity ” , “ Peak width ” , “ Area reject ”*從“ Integration ”菜單中選擇“ Integrate ”選項(xiàng),則數(shù)據(jù)被積分。*0 積分結(jié)果不理想,則修改相應(yīng)的積分參數(shù),直到滿(mǎn)意為止。*點(diǎn)擊左邊“2”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。并輸入 Purge 時(shí)間。PMT直O(jiān)k”。11、 點(diǎn)擊“Method”菜單，選中“Save method as”，輸入一方法名。女 0 “test ”，點(diǎn)擊“O

14、k”。12、 從菜單“ View ”中選中“ Online signal” ,選中 Windows1,然后點(diǎn)擊“ Change按鈕，將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊“Ok”。Windows2）。13、 從“ Run control ”菜單中選擇“ Sample infoData file ”中選擇“ Manual” 或“ Prefix ”。區(qū)別：Manua每次做樣之前必須給出新名字，在 Prefix 框中輸入前綴,在vwd0001,vwd0002、。14、點(diǎn)擊“ OK”，從 “ Instrument15、等儀器 Ready, 基線(xiàn)平穩(wěn)，從如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào)，則重復(fù)”選項(xiàng)，輸入操作者名稱(chēng)，如

15、12，選中zzz ；在”否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。Counter 框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如Prefix”菜單選擇“ System on ”，或依次點(diǎn)擊圖標(biāo)開(kāi)啟各模塊。 RunControl ”菜單中選擇“ Run method ” , 進(jìn)樣。（若無(wú)Events ” 選項(xiàng) 。 選擇 合適 的 Slope“ Height reject ”。5、打印報(bào)告：* 從“ Report ” 菜單中選擇“ Specify report ”選項(xiàng)。* 點(diǎn)擊“ Quantitative Results ”框中“ Calculate ”右側(cè)的黑三角，選中“ Percent ”（面 積百分比），其它選項(xiàng) 不 變 。 點(diǎn) 擊“ OK”。* 從“ Report ”印機(jī)上，則點(diǎn)擊“（四）關(guān)機(jī)* 關(guān)機(jī)前，先關(guān)燈，* 退出化學(xué)工作站，* 關(guān)閉 Agilent 1200（五） Agilent1200 LC 維護(hù)保養(yǎng)：* 色譜柱長(zhǎng)時(shí)間不用，存放時(shí)，柱內(nèi)充滿(mǎn)溶劑，兩端封死（乙腈 正相色譜柱用相應(yīng)的有機(jī)相） 。* 手動(dòng)進(jìn)樣