云母顆粒對無水乙醇誘導(dǎo)大鼠胃黏膜損傷的影響及機(jī)理探討

1、云母顆粒對無水乙醇誘導(dǎo)大鼠胃黏膜損傷的影響及機(jī)理探討 作者：欽丹萍 呂海麗 邵國民 任永葆 韓建新 邱添 黃一鳴【摘要】 目的研究云母顆粒對無水乙醇誘導(dǎo)大鼠胃黏膜損傷的保護(hù)作用及其機(jī)理。方法將48只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為云母顆粒高、中、低劑量組，思密達(dá)組，模型對照組，空白對照組6組。分別將云母顆粒和思密達(dá)預(yù)先灌胃于相應(yīng)各組大鼠，3h后以1ml/100g無水乙醇灌胃致胃黏膜損傷，45min后下腔靜脈取適量血，處死取胃，然后分別檢測各組的胃黏膜損傷指數(shù)、血清和胃黏膜組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）含量，并觀察病理學(xué)變化，以評價(jià)胃黏膜損傷程度及藥物

2、的作用。結(jié)果云母各劑量組中SOD、GSHPx含量均顯著高于模型對照組，而MDA含量則明顯低于模型對照組（P<0.05）。結(jié)論云母顆粒對無水乙醇誘導(dǎo)的大鼠胃黏膜損傷具有預(yù)防與保護(hù)作用，其保護(hù)作用是通過增加大鼠血清和胃黏膜組織中SOD、GSHPx含量并減少M(fèi)DA的生成來實(shí)現(xiàn)的，即云母顆粒具有抗脂質(zhì)過氧化作用。 【關(guān)鍵詞】 云母顆粒 無水乙醇 損傷指數(shù) 損傷程度 超氧化物歧化酶 丙二醛 谷胱甘肽過氧化物酶Abstract：Objective To study the protection and mechanism of mica granules to rats stomach mu

3、cosa injury caused by nonwater ethanol.Method Randomly divide 48 healthy SD rats into high，middleand lowdosed groups of mica granules，Simida group，model control group and blank control group as well，i.e.6 groups.After fasting for 24h，separately make stomach perfusion of mica granules and Simida to a

4、ll rats in advance；after 3h，make stomach perfusion of nonwater ethanol 1ml/100g for stomach mucosa injury；45m later，take proper blood of lower vena cava，sacrifice them for stomach，then respectively test all mucosa injury index，SOD，MDA，and GSHPx content in serum and mucosa，observe pathological change

5、s to evaluate mucosa injury degree and medical function.Result In mica groups，the SOD and GSHPx were markedly higher than that in model control group，but MDA was lower than later（P<0.05）.Conclusion Mica granules have prevention and protection to rats gastric mucosa injury caused by nonwater e

6、thanol，which is produced from mica granules' increasing SOD，GSHPx content and decreasing MDA in serum and gastric mucosa，i.e.mica granules have function of antilipid peroxidation.Key words：mica granules；nonwater ethanol；injury index；injury degree；SOD；MDA；GSHPx 本實(shí)驗(yàn)通過預(yù)防性予大鼠灌服云母顆粒，并與思密達(dá)作對照，觀察云母顆粒對大

7、鼠胃黏膜損傷的防治療效，同時(shí)從血清和胃黏膜組織中SOD、MDA、GSHPx方面探討其可能的作用機(jī)制。1 實(shí)驗(yàn)材料 動物模型：健康SD大鼠48只，SPF級，體重200±20g，雄性，購自中科院上海實(shí)驗(yàn)動物中心，標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。藥物及制備：云母顆粒由浙產(chǎn)絹云母組成，其粒子直徑40%以上達(dá)6250目，由江蘇江陰中藥廠制劑，3g/袋，浙江省中醫(yī)院中藥房提供。思密達(dá)（蒙脫石散劑）：博福-益普生（天津）制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20000690；灌胃時(shí)均加適量生理鹽水（NS）進(jìn)行稀釋。儀器與試劑：自動勻漿機(jī)（蘇州醫(yī)療機(jī)械公司），臺式高速離心機(jī)（海安亭科學(xué)儀器廠 型號：

8、DL56），721可見光光度計(jì)（上海欣茂儀器有限公司），BH體視顯微鏡（北京泰克儀器有限公司），超氧化物岐化酶試劑盒、丙二醛試劑盒和谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒（南京建成生物工程研究所 批號分別為：20061214；20061248；20061265）。2 實(shí)驗(yàn)方法2.1 造模與實(shí)驗(yàn)方法2.2 觀察指標(biāo)2.2.1 胃黏膜損傷指數(shù) 處死大鼠后，立刻剖腹取胃，沿大彎側(cè)剪開，用NS沖洗，濾紙吸干，平鋪于濾紙上。黏膜損傷的程度以損傷指數(shù)表示，計(jì)分參考Guth1等的標(biāo)準(zhǔn)。正常胃黏膜為0分，點(diǎn)狀損傷計(jì)1分，病損小于1mm計(jì)2分，12mm計(jì)3分，23mm計(jì)4分，依次類推，損傷寬度大于2mm，損傷指數(shù)計(jì)分加倍。2

9、.2.2 病理學(xué)檢查 在胃黏膜組織上，從小彎側(cè)到大彎側(cè)切下一條10mm寬的胃黏膜組織，用10%甲醛溶液固定，經(jīng)切片及HE染色，在光鏡下觀察胃黏膜表面的病理學(xué)改變。黏膜損傷程度判斷標(biāo)準(zhǔn)2：0級為無損傷；1級為黏膜表面上皮細(xì)胞損傷；2級損傷累及胃小凹；3級損傷侵及淺層胃腺；4級損傷達(dá)到腺體深部。在光鏡下分別計(jì)算出總損傷長度占所取黏膜標(biāo)本長度的百分比。2.2.3 各組血清中SOD、MDA、GSHPx的含量 取大鼠血液4ml，注入試管中，4下用普通離心機(jī)3000r/min離心10min，取上清液，200C保存至測定。測定時(shí)嚴(yán)格按說明書操作進(jìn)行。2.2.4 各組胃黏膜中SOD、MDA、GSHPx的含量

10、取腺胃黏膜適量，即刻電子天平上稱重后，置于試管中，加入適量NS用自動勻漿機(jī)制成10%勻漿，4下用普通離心機(jī)3000r/min離心10min，取上清液，20保存待測。測定時(shí)嚴(yán)格根據(jù)說明書操作進(jìn)行。2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)包對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；均數(shù)間兩兩比較用q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異顯著的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)數(shù)資料用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3 結(jié)果3.1 胃黏膜損傷的影響 大體觀下空白對照組胃黏膜表面光滑，附有較多黏液，黏膜皺襞光整，未見潰瘍、糜爛、出血點(diǎn)。模型對照組黏膜

11、充血水腫明顯，可見片狀糜爛壞死灶形成。云母高、中、低劑量組及思密達(dá)組黏膜光滑，充血水腫糜爛程度輕。對胃黏膜損傷指數(shù)分析顯示：云母高、中、低劑量組及思密達(dá)組胃黏膜損傷指數(shù)顯著低于模型對照組（P<0.05），云母各劑量組間比較及其分別與思密達(dá)組比較均不存在顯著差異（P>0.05）。光鏡下空白對照組黏膜層、固有層、肌層結(jié)構(gòu)完整連續(xù)，依次排列，腺體排列緊密，未見炎性細(xì)胞浸潤。模型對照組黏膜結(jié)構(gòu)排列紊亂失去完整性及連續(xù)性，部分區(qū)域黏膜上皮層缺失，損傷多累及胃深部腺體，可見大量炎性細(xì)胞浸潤；云母高、中、低劑量組及思密達(dá)組各層排列欠整齊，部分損傷可累及胃小凹及胃腺體，可見炎性細(xì)胞

12、浸潤。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，云母高、中、低劑量組及思密達(dá)組粘膜損傷程度顯著低于模型對照組（P<0.05），云母各劑量組間比較及其分別與思密達(dá)組比較均無顯著差異（P>0.05）。損傷長度百分比云母高、中、低劑量組及思密達(dá)組亦顯著低于模型對照組（P<0.05），而云母各劑量組間比較及其分別與思密達(dá)組比較則均無顯著差異（P>0.05）。 因此，上述的研究提示云母顆粒對胃黏膜損傷具有保護(hù)作用。3.2 如表1示，各組血清中SOD、GSHPx、MDA的含量的表達(dá) 統(tǒng)計(jì)學(xué)比較顯示模型對照組血清中SOD和GSHPx含量均顯著低于空白組含量、云母各劑量組和思密達(dá)

13、組（P<0.05）；思密達(dá)組中SOD含量亦明顯低于云母高、中劑量組（P<0.05）；云母各劑量組間比較及思密達(dá)組與云母低劑量組比較均無顯著差異（P>0.05）。云母低劑量組血清GSHPx含量顯著低于云母高劑量組（P<0.05）。模型對照組中MDA 含量明顯高于空白對照組、云母各劑量組及思密達(dá)組（P<0.05），但云母各劑量組間比較及其分別與思密達(dá)組比較均不存在顯著差異（P>0.05）。3.3 如表1示，各組胃黏膜組織中SOD、GSHPx、MDA的含量表達(dá) 統(tǒng)計(jì)學(xué)比較顯示模型對照組中胃黏膜SOD和GSHPx含量明

14、顯低于空白組、云母各劑量組和思密達(dá)組（P<0.05）；云母低劑量組SOD、GSHPx含量均顯著低于云母高劑量組（P<0.05），而云母中劑量組分別與高劑量組和低劑量組比較及思密達(dá)組分別與云母各治療組比較均不存在顯著差異（P>0.05）。并且模型對照組中MDA含量顯著高于空白對照組、云母各劑量組及思密達(dá)組（P<0.05）；思密達(dá)組和云母低劑量組胃黏膜組織中MDA含量顯著高于云母高劑量組（P<0.05），而思密達(dá)組分別與云母中、低劑量組比較比較均無顯著差異（P>0.05）；云母高劑量組與中劑量組比較無顯著差異（P&

15、amp;gt;0.05）。表1 各組血清及胃黏膜組織中SOD、GSHPX及MDA含量（略）與模型對照組比較，P<0.05，與思密達(dá)組比較，P<0.05；與低劑量組比較，P<0.05，與高劑量組比較 P<0.054 討論 本實(shí)驗(yàn)動物造模方法采用無水乙醇攻擊導(dǎo)致胃黏膜急性損傷，乙醇能影響?zhàn)さ鞍坠丫厶墙Y(jié)構(gòu)的合成及誘發(fā)氧自由基導(dǎo)致胃黏膜脂質(zhì)過氧化，造成胃粘膜損傷4。一些氧自由基清除劑如SOD、GSHPx具有良好的減輕氧自由基介導(dǎo)的胃黏膜損傷的保護(hù)作用。 云母顆粒其粒子直徑40%在6250目以上，能均勻吸附在胃腸黏膜表面。云母（muscovite）

16、是鱗片狀的天然礦石，為含鉀、鎂、鋁的硅酸鹽化合物KA12（ALSi3）O10（OH2F）2，記載于神農(nóng)本草經(jīng)、本草綱目，謂其性味”甘、平、無毒”，有”補(bǔ)中”、”止血斂瘡”作用。 SOD作為胃黏膜細(xì)胞保護(hù)因子，其主要功能是將超氧陰離子自由基歧化生成過氧化氫，而過氧化氫在過氧化氫酶或谷胱甘肽過氧化物酶催化下生成水，使有害的自由基變成無害的物質(zhì)5。GSHPx存在于線粒體和胞漿內(nèi)，具有清除氧自由基（OFR）能力，其主要是通過清除脂類氫過氧化物來參與胃黏膜保護(hù)機(jī)制6?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Guth P H，Aurse D，Paucsen G，et a.l Topical aspirin plusHCL ga

17、stric lesion in the rat，Cytoprtective effect of prostagiandin，Cimctidinc and probanthincJ.Gastroenterology，1979，76 （1）：8893.2 Eric R L，Susumu I.Microscopic analysis of ethanol damage to ratgastricmucosa after treatmentwith aprostaglandinJ.Gastroenterology，1982，83：619625.3 吳作燕.乙醇對大鼠胃黏膜慢性損傷及適應(yīng)性細(xì)胞的保護(hù)作用J.中華消化雜志 2006，26（1）：5960.4 方爾笠.益氣化瘀煎劑抗大鼠胃潰瘍作用及其機(jī)制的探討J.中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2001，9（4）：208210.5 Koch OR，Pani G，Borrello S，et al.Oxidative stress and antioxidant defenses in ethanolinduced cell injuryJ.Mol AsPects Med，2004，25 （122）：191198.6 Balasubramanian T，et al.Taurine