病毒性肝炎肝細胞凋亡及與肝纖維化的關(guān)系

1、病毒性肝炎肝細胞凋亡及與肝纖維化的關(guān)系【摘要】目的研究病毒性肝炎肝細胞凋亡及與肝纖維化的關(guān)系。方法以原位末端標記及免疫組化檢測40例慢性病毒性肝炎(CH)肝組織細胞凋亡相關(guān)線狀斷裂DNA以及Fas抗原、轉(zhuǎn)化生長因子1(TGF-1)、型前膠原肽(PP)在肝組織中的表達；以酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測血清可溶性Fas(sFas)及TGF-1。結(jié)果CH肝細胞DNA損傷與肝組織Fas抗原、TGF-1表達及血清sFas、TGF-1水平明顯相關(guān)(r0.6219，0.5368，0.5564，0.5996。P0.050.01)；重度CH及肝硬變患者DNA損傷程度明顯高于輕度CH患者，且與肝組織PP、TG

2、F-1的表達明顯相關(guān)。結(jié)論sFas可能也是促進肝細胞凋亡的因素之一。在肝細胞凋亡的同時伴有膠原等細胞外基質(zhì)合成的增加，而TGF-1在細胞凋亡與肝纖維化之間可能起著極為重要的橋梁作用?！局黝}詞】肝炎，慢性活動性； 脫噬作用； 肝硬化 Study on relationship between the apoptosis of hepatocytes and liver fibrosis of chronic viral hepatitisXIN Shaojie, ZHAO Jingmin, WANG Linjie, et al.（302 Hospital of PLA, Beijing 1000

3、39, China）【Abstract】ObjectiveTo study the relationship between apoptosis of hepatocytes and liver fibrosis of chronic viral hepatitis(CH). MethodsDNA fragmentation, one of the characteristic features of apoptosis,was detected by in situ terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end la

4、beling(TUNEL) and the expression of Fas, transforming growth factor 1(TGF-1) and Pre-collagen peptide(P P)in liver tissues were detected by immunohistochemistry. Soluble Fas (sFas) and TGF-1 in serum were detected by ELISA. ResultsThe damage of DNA in hepatocytes of CH correlated closely with the ex

5、pression of Fas and TGF-1 in liver tissue and serum(r=0.6129,0.5368,0.5564,0.5996; P0.050.01). In severe type CH and liver cirrhosis, the degree of liver fibrosis and the expression of P P and TGF-1 were higher than that in mild type and moderate type CH. ConclusionThe sFas in serum may be one of th

6、e factors associated with the apoptosis. The apoptosis of hepatocytes correlated with liver fibrosis of CH and TGF-1 may play an important role between apoptosis and liver fibrosis.【Key words】hepatitis,Chronic active； Apoptosis； Liver cirrhosis為了解慢性病毒性肝炎(CH)肝細胞凋亡的發(fā)生機制及與纖維化關(guān)系，我們以原位末端標記(TUNEL)及免疫組化檢測了

7、細胞凋亡相關(guān)線狀斷裂DNA、Fas抗原、轉(zhuǎn)化生長因子1(TGF-1)、型前膠原肽(P P)在肝組織中表達，同時以ELISA檢測血清sFas及TGF-1，探討了CH肝細胞凋亡及與肝纖維化的關(guān)系。1材料和方法1.1研究對象及診斷標準40例病人均為302醫(yī)院住院病人。男性34例，女性6例，年齡1573歲。按照1995年北京第五次全國傳染病與寄生蟲病學術(shù)會議修訂的病理診斷標準，其中CH輕度18例，中度11例，重度5例；肝硬變6例，均為死亡患者。病原學診斷，乙型肝炎31例，丙型肝炎6例，乙丙重疊感染3例。肝穿活檢前后2 d空腹抽血，24 h內(nèi)分離血清，-20凍存?zhèn)溆?。死亡患者死后立即肝穿，同時留取靜脈血

8、或心血分離血清。1.2主要試劑及方法TUNEL試驗主要試劑與方法：末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TDT)、生物素化dUTP(Bio-11-dUTP)分別為Progema公司、Sigma公司產(chǎn)品，親和素-辣根過氧化物酶(Avidin-HRP)購自華美生物工程公司。方法按文獻1進行。陽性對照片標記前以0.7 mg/ml DNase 室溫處理10 min；陰性對照片不加TDT。結(jié)果判定參照文獻2，3按-、+、+、+作半定量記分。肝組織免疫組化采用ABC法，ABC試劑盒購自華美生物工程公司。抗人Fas抗體購自中山公司，結(jié)果判定同TUNEL。兔抗人TGF-1為美國ZYMED公司產(chǎn)品，抗人PP抗體為Sigma公

9、司產(chǎn)品。用彩色醫(yī)學像分析儀對切片進行像處理，以百分比表示陽性反應(yīng)所占比例。1.3血清sFas和TGF-1的檢測采用ELISA法，試劑盒為美國Genzyme公司產(chǎn)品，操作按說明書。2結(jié)果2.1肝細胞凋亡與肝組織及血清Fas、TGF-1表達的關(guān)系表1結(jié)果表明，肝細胞凋亡與肝組織及血清Fas、TGF-1表達明顯相關(guān)。TUNEL試驗TUNEL test例數(shù)Cases肝組織Fas表達Expression of Fasin liver tissue肝組織TGF-1Expression of TGF-1in liver tissue血清sFas(ng/ml)Level of sFasin serum血清TG

10、F-1(ng/ml)Level of TGF-1in serum-70.890.206.443.5215.715.4816.887.66+211.090.838.325.8718.557.1318.718.48+91.420.7516.396.4123.1710.5032.1512.13+31.830.5529.4512.0426.3311.4846.4720.50r?0.62190.53680.55640.5996 *Spearman秩相關(guān)檢驗,P0.05Spearmans test, P0.052.2肝細胞凋亡與肝纖維化關(guān)系表2結(jié)果表明，肝細胞凋亡程度與肝纖維化程度及TGF-1、PP在肝組

11、織中的表達明顯相關(guān)。病理診斷Pathological diagnosis例數(shù)CasesTUNEL試驗TUNEL test肝組織PP表達Expression of PP in liver tissue肝組織TGF-1表達Expression of TGF-1 in liver tissueS0-S1180.830.626.582.139.473.55S2-S3111.000.6311.755.9111.224.34S4+Lc112.000.7119.537.8229.459.85F11.1000*7.3954*9.1342*P0.01, *P0.05 3討論目前對慢性病毒性肝炎細胞凋亡機制的研究

12、較多的是Fas-Fas配體系統(tǒng)。Fas抗原在肝細胞凋亡中起重要作用2，3。我們的結(jié)果表明，CH肝細胞凋亡與肝組織Fas抗原、TGF-1表達及血清sFas、TGF-1水平明顯相關(guān)(表1)，提示影響CH肝細胞凋亡是極為復雜的，同時證明在CH sFas可能并不阻斷細胞凋亡，而是促進肝細胞凋亡的因素之一。CH肝細胞凋亡的意義尚不十分清楚，DNA損傷程度與肝纖維化程度及肝組織PP、TGF-1的表達明顯相關(guān)。PP是型膠原生成細胞的標志4，提示在肝細胞凋亡的同時伴有膠原等細胞外基質(zhì)合成的增加，因此在CH發(fā)病機制中細胞凋亡可能與CH肝纖維化的發(fā)生有密切關(guān)系。TGF-1與肝纖維化有密切關(guān)系，可能通過刺激星狀細胞

13、，大量合成細胞外基質(zhì)，最終導致肝纖維化4。同時TGF-的激活是肝細胞再生終止信號之一5，TGF-是肝細胞發(fā)生凋亡的啟動因子6，本文結(jié)果顯示TGF-1與肝細胞凋亡及肝纖維化均有密切關(guān)系。因此TGF-1在CH細胞凋亡與肝纖維化之間可能起著極為重要的橋梁作用。作者單位：辛紹杰（100039北京，解放軍302醫(yī)院三科）趙景民（100039北京，解放軍302醫(yī)院三科）王林杰（100039北京，解放軍302醫(yī)院三科）王松山（100039北京，解放軍302醫(yī)院三科）參考文獻1，Nakagawa S, Shiraishi T, Kihaa S, et al. Detection of DNA strand b

14、reaks associated with apoptosis in human brain tumors. Virchows Arch, 1995,427:175-179.2，秦波，張定鳳，馬英，等.乙型肝炎患者肝組織Fas/FasL表達及其在肝細胞凋亡中的作用.中華肝臟病雜志，1997，5：88-90.3，朱幼芙，駱抗先，何海棠，等.慢性乙型肝炎肝細胞Fas表達和凋亡.中華肝臟病雜志，1997，5：86-87.4，徐冬波，翟為溶，周莜梅，等.細胞因子TGF-1、PDGF-BB、bFGF在人肝纖維化中的作用. 上海醫(yī)科大學學報，1996，23：203-206.5，F(xiàn)austo N. Hepatocyte apoptosis: is transforming growth factor-B1 the kiss of death?