腺苷誘導急性冠脈綜合征患者單核細胞血管內(nèi)皮生長因子表達

1、腺苷誘導急性冠脈綜合征患者單核細胞血管內(nèi)皮生長因子表達*    張 翼，楊玉蓮，郭 瑩，歐柏青，寧忠平，駱陽平，崔 波，唐銘強，付慶華    【摘要】 目的 探討腺苷是否能誘導急性冠脈綜合征（ACS）患者外周血單核細胞中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達。方法 分別抽取80例ACS患者發(fā)病后第1天的外周靜脈血，隨機分為4組，每組20例，對外周血單核細胞進行分離、培養(yǎng)，其中3組分別加入腺苷10g、100g、1000g培養(yǎng)。用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定VEGF濃度。結(jié)果 ACS患者VEGF水平隨著培養(yǎng)時間的延長而

2、增加，在腺苷10g組與對照組同時程比差異無顯著性（P0.05）。VEGF水平在腺苷100g組和1000g組均顯著高于同時程對照組（P0.05，P0.01），與腺苷濃度和作用時間成正比。結(jié)論 腺苷能誘導ACS患者外周血單核細胞中血管內(nèi)皮生長因子表達且與濃度和作用時間成正比。    【關鍵詞】 腺苷；急性冠脈綜合征；外周血單核細胞；血管內(nèi)皮生長因子    【Abstract】 Objective To investigate expression of vascular endothelial growth facto

3、r by peripheral blood mononuclear cells with adenosine in patients with acute coronary syndrome.Methods 80 patients with acute coronary syndrome(ACS) were used for this study.Peripheral blood mononuclear cells，(PBMCs) were isolated from peripheral blood on the 1st day after the onset of ACS.PBMCs we

4、re cultured with normal sodium (control group) and adenosine 10g，100g，1000g for 6h，12h，24h.Vascular endothelial growth factor (VEGF) levels in the culture media were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Results VEGF levels in the cultured medium of PBMCs after incubation of 6h，12h，2

5、4h these group were significantly higher (P0.05，P0.01)，but in adenosine 10g group were insignificant.Conclusion This study showed that adenosine can induce the expression of vascular endothelial growth factor by peripheral blood mononuclear cells in patients with acute coronary syndrome.VEGF levels

6、were increased gradually along with the action time and concentration of adenosine.    【Key words】 adenosine；acute coronary syndrome；peripheral blood mononuclear cells；vascular endothelial growth factor    目前應用血管生長基因來促進缺血心肌血管再生，即分子搭橋的方法在治療急性冠脈綜合征（acute coronar

7、y syndrome，ACS)方面正日益受到重視，血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）已被證實1，2能促血管生成，重建冠狀動脈側(cè)支循環(huán)形成，改善心功能。研究發(fā)現(xiàn)3急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）患者左室收縮功能改善與外周血單核細胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）源性VEGF呈正相關。腺苷（adenosine，Ado）被公認為能使缺血心肌4產(chǎn)生藥理性預適應，對缺血心肌有保護作用，但是否通過誘導PBMCs表達VEGF來參與保護缺血心??？目前

8、國內(nèi)外未見報道。本試驗旨在探討腺苷是否能誘導ACS患者PBMCs中VEGF表達。    1 對象與方法    1.1 研究對象 患者來源于2003年9月2004年9月在我院心內(nèi)科住院并確診為急性冠脈綜合征的患者共80例，AMI 24例，不穩(wěn)定型心絞痛56例。其中男47例，女33例；年齡4286歲，平均年齡（62.7±10.9）歲。所有患者均常規(guī)服用阿司匹林、-受體阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑或血管緊張素受體拮抗劑、他汀類調(diào)脂藥。入選者隨機分為4組，每組20例（AMI 6例，不穩(wěn)定型心絞痛14例），4組患

9、者在年齡、性別、冠心病危險因素方面差異無顯著性，具有可比性。合并嚴重心衰、肝、腎功能衰竭、感染性疾病、腫瘤、外周血管病、腦卒中者予以剔除。    1.2 研究方法    1.2.1 PBMCs分離 在ACS患者發(fā)病后的第1天抽取20ml靜脈血放入肝素抗凝離心管內(nèi)，用淋巴分離液分離出單核細胞，用含10%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液重懸單核細胞，并將細胞濃度調(diào)節(jié)至5×106/ml。    1.2.2 PBMCs培養(yǎng)及標本的提取 分別從4組中各取1ml濃度為5

10、15;106/ml PBMCs懸液放入24孔培養(yǎng)板中，將生理鹽水1ml（對照組）、Ado10g/ml（試驗1組）、Ado 100g/ml（試驗2組）、Ado 1000g/ml（試驗3組）分別加入4組PBMCs培養(yǎng)板中，在37、5%CO2條件下于培養(yǎng)箱中進行細胞培養(yǎng)。分別于6h、12h和24h收取PBMCs培養(yǎng)的上清液置于-70冰箱保存待測。    1.2.3 VEGF的測定 單核細胞培養(yǎng)分泌的VEGF量均采用ELISA法測定，濃度單位為pg/ml。試劑盒由北京晶美生物工程有限公司提供，檢測靈敏度為30pg/ml，批內(nèi)、批間誤差均9.5%。按試劑盒說明進行

11、操作。    1.2.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 10.0軟件包進行統(tǒng)計分析，各統(tǒng)計指標以均數(shù)±標準差（x±s）表示。計量資料的組間比較采用t檢驗，P0.05具有統(tǒng)計學意義。    2 結(jié)果    PBMCs培養(yǎng)產(chǎn)生的VEGF在不同培養(yǎng)時間段呈動態(tài)變化，結(jié)果見表1。從表1中可見VEGF水平隨著培養(yǎng)時間的延長而逐漸增加。試驗1組與對照組同時程比VEGF水平差異無顯著性（P0.05），試驗2組和試驗3組VEGF水平顯著高于同時程對照組（P0.05、P0.01

12、）。試驗2組VEGF水平顯著高于同時程試驗1組（P0.05），試驗3組VEGF水平顯著高于同時程試驗2組（P0.05）。    表1 ACS患者PBMC-VEGF水平的變化 （x±s，pg/ml）    注：與對照組同時程比較，t2.187，*P0.05；t2.673，*P0.01；與試驗1組比較，t2.329，P0.05；與試驗2組比較，t2.042，#P0.05    3 討論    腺苷是一種內(nèi)源性嘌呤核苷酸，由腺嘌呤和

13、戊糖結(jié)合而成，其作用是通過激活受體機制和非受體機制實現(xiàn)。Ado受體存在于大多數(shù)細胞膜上，其中A1和A2受體與心血管作用關系密切。有報道5血管內(nèi)皮細胞膜上存在Ado-A2B受體，能調(diào)節(jié)VEGF生成。本研究發(fā)現(xiàn)Ado能誘導ACS患者外周血單核細胞VEGF的表達，提示ACS患者外周血單核細胞膜上存在Ado受體，能調(diào)節(jié)VEGF生成。    大量研究證實Ado對缺血心肌的保護作用，AMI患者再灌注損傷的減輕及梗死范圍的減少多是通過其缺血預處理來實現(xiàn)的6。現(xiàn)今發(fā)現(xiàn)Ado能上調(diào)ACS患者外周血單核細胞VEGF的表達，其表達的量與Ado的作用劑量和持續(xù)時間成正比。目前已

14、證實7VEGF的持續(xù)高表達能刺激缺血區(qū)冠狀動脈側(cè)支循環(huán)形成，使受損的血管內(nèi)皮細胞再生，恢復內(nèi)皮細胞的完整性和功能，增加缺血區(qū)血流灌注，抑制缺血、梗死范圍，改善心臟收縮功能。而單核細胞分泌的VEGF在促進AMI患者缺血區(qū)側(cè)支循環(huán)建立、改善左室收縮功能方面起重要作用8。本研究結(jié)果提示Ado除了通過藥理性預處理來保護缺血心肌外，還可能通過上調(diào)外周血單核細胞VEGF的表達來保護缺血心肌。    綜上所述，Ado能上調(diào)ACS患者外周血單核細胞VEGF的表達，其表達的量與Ado的作用劑量和持續(xù)時間成正比，對保護缺血心肌將產(chǎn)生重要作用。  

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