探討牛大力對(duì)小鼠免疫功能的影響

1、探討牛大力對(duì)小鼠免疫功能的影響摘要： 【目的】觀察牛大力水提液對(duì)小鼠免疫功能的影響。【方法】選用SPF級(jí)KM小鼠，通過(guò)計(jì)算小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、廓清指數(shù)和采用血清溶 血素試驗(yàn)法、二硝基氯苯誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)法，觀察高、中、低劑量 牛大力（劑量分別為20、10、5 g kg-1 d-l）對(duì)正常小鼠免疫調(diào)節(jié)的影響。通 過(guò)測(cè)定免疫抑制小鼠（灌胃給予40 mg kg-1 d-l醋酸潑尼松）脾臟指數(shù)、胸腺 指數(shù)以及廓清指數(shù)，觀察高、中、低劑量牛大力（劑量同前）對(duì)免疫低下小鼠免疫 調(diào)節(jié)的影響。【結(jié)果】牛大力對(duì)正常小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)以及廓清指數(shù)均無(wú) 顯著性影響，但能不同程度地增加免疫低下小鼠的

2、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及廓清指數(shù)。【結(jié)論】牛大力能不同程度地提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠的免疫功能。關(guān)鍵詞：牛大力/藥理學(xué);免疫功能低下/中藥療法;溶血素/血液;疾病模型，動(dòng)物;小鼠牛大力（Radix Millettiae Speciosae），載于陸川本草，為蝶形花科植物美 麗崖豆藤M(fèi)illetia speciosa Champ勺干燥根。功能清肺止咳，清涼解毒，用于 治療咳血，痢疾，溫病身熱口渴，頭昏等。本實(shí)驗(yàn)觀察了不同劑量牛大力水提液 對(duì)小鼠免疫功能的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。1材料與方法11動(dòng)物SPF級(jí)KM小鼠,體質(zhì)量1822 g，雌雄各半;SPF級(jí)豚鼠，體質(zhì)量250300 g，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)

3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證號(hào)：SCXK粵20XX 0001o1 2藥物與制備醋酸潑尼松片由廣東華南藥業(yè)有限公司生產(chǎn) （批號(hào)： 071104）。牛大力購(gòu)于廣州致信中藥飲片有限公司（批號(hào)：070701）,制備方法：取 牛大力干燥藥材，用10倍體積的蒸餾水浸泡1 h，加熱煮沸2 h，趁熱過(guò)濾，殘 渣再加6倍體積的蒸餾水，加熱煮沸1 h，合并2次濾液，濃縮至1 g /mL濃度 備用，用時(shí)加蒸餾水稀釋至所需濃度。丨3試劑與儀器二硝基氯苯（DNCB由上海試劑一廠生產(chǎn)（批號(hào)：20XX0101）, 丙酮由天津市紅巖化學(xué)試劑廠生產(chǎn)（批號(hào)：20XX730）。UNICO720型光柵分光光 度計(jì)由尤尼柯上海儀器有限公司

4、提供，LDZ5型離心機(jī)由北京醫(yī)用離心機(jī)廠生產(chǎn)， .VikcTGI. IM型高速離心機(jī)由上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)，爲(wèi)卩150型隔水式電 熱恒溫培養(yǎng)箱由上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。1牛大力對(duì)正常小鼠免疫器官質(zhì)量的影響1-2取KM小鼠60只，隨機(jī)分為5組：空白組，醋酸潑尼松組（劑量為40 mg- kg-1 d-l），牛大力高、中、 低劑量組（劑量分別為20、10、5 g kg-1 d-l）。每天灌胃給藥1次，連續(xù)給 藥12 d。末次給藥1 h后，將小鼠脫頸椎處死，稱體質(zhì)量，取脾臟和胸腺，用 電子天平稱質(zhì)量，計(jì)算脾臟和胸腺指數(shù) ：w脾=時(shí)脾/mbody,w胸腺=m胸腺/mbody。15牛大力對(duì)正常小鼠單核巨

5、噬細(xì)胞吞噬功能的影響1-3分組及給藥方法同1 4。于末次給藥1 h后，各鼠尾靜脈注射50 g/L中華墨汁生理鹽水液10 mL/kg，于注射墨汁后2 min及12 min，用毛細(xì)玻璃管從小鼠眼眶后靜脈叢取血 23滴，吸20卩L溶于1 g/L Na2CO3 mL溶液中，搖勻，于分光光度計(jì) 680 nm 處測(cè)吸光度（D）值，計(jì)算廓清指數(shù)（IK） : IK=（logD2-logD12）/（t12-t2）（D2、D12分別為2 min、12 min時(shí)的吸光度，t12、t2分別為時(shí)間12 min、2 min）。丨6牛大力對(duì)免疫低下小鼠免疫器官質(zhì)量的影響取KM小鼠60只，隨機(jī)分為5組：空白組，模型組，牛大力

6、高、中、低劑量組，給藥劑量同項(xiàng)下。除空白組外，其他各組小鼠上午灌胃給予40 mg - kg-1 d-1醋酸潑尼松，空白組給予等容積的蒸餾水，下午牛大力組小鼠灌胃給予相應(yīng)藥物，空白組和模型組灌服等容積的蒸餾水，連續(xù)12 d。末次給藥1 h后，處死小鼠，按1 4項(xiàng)下方 法計(jì)算脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)。丨7牛大力對(duì)免疫低下小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響4-5分組及給藥方法同丨6項(xiàng)下。按13項(xiàng)下方法檢測(cè)IK。丨8牛大力對(duì)雞紅細(xì)胞致小鼠血清溶血素抗體形成的影響在雞血中加入5倍體積的滅菌Alsever溶液，離心洗滌，用生理鹽水配成體積分?jǐn)?shù)5%生理鹽水雞紅細(xì)胞混懸液。補(bǔ)體的制備：將 2只豚鼠心臟采血，離心后分離血

7、清，用10倍生理鹽水稀釋。取KM小鼠72只，隨機(jī)分為6組：空白組，模型組，醋酸潑尼 松組（劑量為40 mg - kg-1 d -1），牛大力高、中、低劑量組（給藥劑量同1 -1 項(xiàng)下）。除空白組外，各組小鼠先腹腔注射體積分?jǐn)?shù)5%生理鹽水雞紅細(xì)胞混懸液0 2汕進(jìn)行免疫，然后灌胃給藥1次，連續(xù)12 d。末次給藥后1 h，眼眶靜脈 取血，3 000 r/min 離心10 min，取30卩L血清用生理鹽水稀釋100倍，取稀 釋后的血清1 mL，與體積分?jǐn)?shù)5%生理鹽水雞血細(xì)胞混懸液0 5認(rèn)、體積分?jǐn)?shù) 10%補(bǔ)體0 5iL混合,在37C恒溫箱中保溫30 min后，0C冰箱中止反應(yīng)，然 后離心，取上清液于分

8、光光度計(jì) 540 nm處比色，測(cè)D值，另設(shè)不加血清的空白 對(duì)照，取其上清液作為比色時(shí)調(diào)零的基準(zhǔn)。1 9牛大力對(duì)DNCB致小鼠遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)的影響1 ,7取KM小鼠60 只，隨機(jī)分為5組：模型組，醋酸潑尼松組，牛大力高、中、低劑量組 （給藥劑 量同1 項(xiàng)下）。首次給藥后，用脫毛劑（硫化鋇加水調(diào)成稀糊狀）脫去背部頸毛，次日于脫毛的頸部皮膚上滴100 g/L DNCB丙酮溶液20卩L/只致敏。小鼠每天 灌胃給藥1次，連續(xù)14 d。末次給藥后1 h，各鼠脫去腹部毛后滴25 g/L DNCB 丙酮溶液30卩L/只進(jìn)行攻擊。24 h后,尾靜脈注射10 g/L伊文斯藍(lán)溶液10 mL/kg 30 min后

9、，脫頸椎處死小鼠，剪取腹部藍(lán)染皮膚，剪碎，用1 ：1丙酮和生理鹽水混合液5 mL浸泡24 h，3 000 r/min離心10 min，取上清液于分光光度計(jì) 610 nm處比色，測(cè)定D值。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS丨15統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性分析。組間差異顯著性采用單因素方差分析中的 LSD方法進(jìn)行 多重比較檢驗(yàn)。2結(jié)果2 1牛大力對(duì)正常小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及廓清指數(shù)（IK）的影響表1結(jié) 果顯示，牛大力高、中、低劑量組對(duì)正常小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及IK無(wú)顯著性影響，與空白組比較差異均無(wú)顯著性意義汗汕05；。表1牛大力對(duì)正常小鼠 脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及廓清指數(shù)的影響2 2牛

10、大力對(duì)免疫低下小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及廓清指數(shù)的影響表2結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)與廓清指數(shù)均顯著降低 【陀05）。牛大力高、中劑量組均能顯著提 高模型小鼠的廓清指數(shù)汗0 05）。表3牛大力對(duì)雞紅細(xì)胞所致小鼠血清溶血素抗 體形成的影響2 牛大力對(duì)DNC致小鼠遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)的影響表 4結(jié)果顯示，牛 大力高、中、低劑量組均能不同程度抑制小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，但與模型組比較 差異無(wú)顯著性意義汗汕05； o表4牛大力對(duì)DNCBt小鼠遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)的 影響3討論機(jī)體免疫功能狀態(tài)對(duì)很多疾病有重要影響。研究表明清熱藥能增強(qiáng)免疫能 力，抑制變態(tài)反應(yīng)。胸腺是T淋巴細(xì)胞分化成熟的

11、中樞免疫器官， 脾臟則是體內(nèi) 最重要的外周免疫器官，也是 T、B淋巴細(xì)胞定居和接受抗原刺激后產(chǎn)生免疫應(yīng) 答的重要場(chǎng)所，它們與機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫密切相關(guān)，在免疫功能低下時(shí)常有胸腺和脾臟萎縮，體積變小。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在醋酸潑尼松致小鼠形成免 疫抑制的條件下，牛大力水提液能增加小鼠胸腺和脾臟指數(shù)，但對(duì)正常小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)無(wú)顯著性影響。本實(shí)驗(yàn)選用小鼠炭粒廓清實(shí)驗(yàn)，觀察牛大力對(duì)正常小鼠及免疫低下小鼠非 特異性免疫的影響。中華墨汁作為顆粒狀異物靜脈注射進(jìn)入血循環(huán)，能迅速被單核吞噬細(xì)胞清除。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，牛大力水提液對(duì)正常小鼠的廓清指數(shù)無(wú)顯著 性影響，但可使醋酸潑尼松所致免疫低下小鼠的廓清

12、指數(shù)顯著增加，即單核吞噬細(xì)胞功能明顯增強(qiáng)。說(shuō)明牛大力能增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫功能。本實(shí)驗(yàn)選用血清溶血素實(shí)驗(yàn)，觀察牛大力對(duì)特異性免疫的影響。經(jīng)雞紅細(xì) 胞免疫的小鼠，可產(chǎn)生溶血素即抗雞紅細(xì)胞抗體，這種抗體在體外與雞紅細(xì)胞、 補(bǔ)體一起溫育，即可使雞紅細(xì)胞溶解，釋放出血紅蛋白，使溶液成紅色，根據(jù)顏 色的深淺，可反映紅細(xì)胞溶出量的多少，而紅細(xì)胞溶血與血清中抗體含量有關(guān)， 測(cè)定其上清液的光密度，則可間接判斷血清中抗體形成的數(shù)量。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 牛大力水提液能增加血清溶血素含量， 以中、低劑量組效果顯著，說(shuō)明牛大力能 增強(qiáng)機(jī)體的特異性免疫功能。DNCB是一種小分子半抗原，可透過(guò)上皮與角蛋白及膠原蛋白結(jié)合為

13、全抗原，從而刺激T淋巴細(xì)胞致敏，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)此類物質(zhì)產(chǎn)生過(guò)敏性。當(dāng)DNCB第 2次攻擊時(shí),T淋巴細(xì)胞與抗原反應(yīng)釋放淋巴因子而引起組織損傷，繼而形成遲發(fā)性皮膚過(guò)敏反應(yīng)11。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，牛大力水提液能一定程度抑制DNCBI起的小鼠遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)，抑制T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.第3版.北京：人民衛(wèi)生出 版社，20XX 934-935，945-946，1430.戴岳，杭秉茜，李佩珍，等.女貞子煎劑對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的作用J.中國(guó)藥 科大學(xué)學(xué)報(bào)，1987，18(4) : 301.鄧文龍，劉家玉，葉尚鈞，等.人參對(duì)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能影響的研究J. 中醫(yī)雜志，1983，24(7) : 546.張大方，金若敏.藥理與中藥藥理實(shí)驗(yàn)M.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，20XX 89.黃蕾,文昌凡.丹柏四逆顆粒劑抗炎免疫作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)中醫(yī)藥信 息雜志，20XX 1(2) : 120.李勇，夏翠英，章天壽，等.前列康對(duì)雞紅細(xì)胞致小鼠溶血素抗體生成的影 響J.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，20XX 23(6) :