項(xiàng)目檢測(cè)-腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)(09)講課講稿

1、項(xiàng)目檢測(cè)-腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)(09)一、概 述腫瘤概述腫瘤：腫瘤： 生物機(jī)體內(nèi)由遺傳性發(fā)生改變并具有相對(duì)自主生長(zhǎng)能力的細(xì)胞所構(gòu)成的新生組織，統(tǒng)稱為腫瘤。腫瘤的種類腫瘤的種類:l良性腫瘤l惡性腫瘤腫瘤現(xiàn)況l根據(jù)WHO資料，全球范圍內(nèi)惡性腫瘤是人類僅次于心腦血管病的第二大死亡原因，占總死亡人數(shù)的22%，并逐年增加。 l2013年腫瘤年報(bào)，中國(guó)年新發(fā)癌癥病例數(shù)309萬(wàn)例，按照平均壽命74歲計(jì)算，人一生中患惡性腫瘤的幾率是22%。l2013年腫瘤年報(bào)顯示，從發(fā)病率來(lái)看，肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、食管癌、結(jié)直腸癌、宮頸癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤。從死亡率來(lái)看，肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、胰腺癌是

2、主要的腫瘤死因。中國(guó)腫瘤發(fā)病率和死亡率總體情況總體腫瘤發(fā)病率和死亡率較高：總體腫瘤發(fā)病率和死亡率較高： l腫瘤發(fā)病率：每10萬(wàn)人中有286人患癌；人一生中患癌癥的概率為22%l腫瘤死亡率：每10萬(wàn)人有181人患癌死亡；人一生中患癌癥死亡的概率為13%患癌人群中，因患癌而死亡的概率高達(dá)患癌人群中，因患癌而死亡的概率高達(dá)63%前10位惡性腫瘤發(fā)病構(gòu)成2013腫瘤登記年報(bào)前10位惡性腫瘤死亡構(gòu)成2011腫瘤登記年報(bào)腫瘤防治原則惡性腫瘤的防治原則：惡性腫瘤的防治原則：l早期發(fā)現(xiàn)l早期診斷l(xiāng)早期治療世界衛(wèi)生組織（世界衛(wèi)生組織（WHO）指出：）指出：若能早期診斷并及時(shí)治療，若能早期診斷并及時(shí)治療，90%9

3、5%的腫瘤是可以治愈的。的腫瘤是可以治愈的。腫瘤檢測(cè)手段l影像學(xué)檢測(cè)影像學(xué)檢測(cè) 通過X線、B超、CT、核磁共振成像等手段。通常發(fā)現(xiàn)時(shí)腫瘤基本已經(jīng)錯(cuò)過治療的最佳時(shí)機(jī)。l腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè) 簡(jiǎn)單易行，選擇合適的腫瘤標(biāo)志物便于早期發(fā)現(xiàn)。l病理切片檢測(cè)（金標(biāo)準(zhǔn)）病理切片檢測(cè)（金標(biāo)準(zhǔn)） 病理切片結(jié)果出來(lái)時(shí)腫瘤已經(jīng)到了中晚期。腫瘤重量 1g 10 1mg1061g109 10-100g1010-11 1kg1012臨床前期，可持續(xù)數(shù)月至數(shù)年腫瘤細(xì)胞數(shù)免疫學(xué)方法影像學(xué)方法晚期早期的診斷閾值 腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)幾乎是迄今為止早期發(fā)現(xiàn)無(wú)癥狀微灶腫瘤的唯一途徑?？上扔赬線、超聲、CT

4、、MRI 或 PET-CT 等物理檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤。腫瘤的發(fā)展過程腫瘤標(biāo)志物u 腫瘤標(biāo)志物（腫瘤標(biāo)志物（Tumor Marker，TM）是指在腫瘤的發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細(xì)胞本身所產(chǎn)生的或者是由機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生的，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、激素、酶（同工酶）及癌基因產(chǎn)物等。u 腫瘤標(biāo)志物的作用：腫瘤標(biāo)志物的作用：l腫瘤早期篩查l腫瘤的診斷和鑒別診斷l(xiāng)腫瘤預(yù)后評(píng)估和分期l腫瘤療效及復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)l腫塊良惡性狀況鑒別診斷理想的腫瘤標(biāo)志物 l靈敏度100%；l特異性100%；l器官特異性；l與腫瘤的大小或分期有關(guān)；l與預(yù)后有關(guān)；l監(jiān)測(cè)腫瘤的復(fù)發(fā)目前的腫瘤標(biāo)志物均未達(dá)到上述要求，但如正

5、確合理使用，仍有很目前的腫瘤標(biāo)志物均未達(dá)到上述要求，但如正確合理使用，仍有很大臨床價(jià)值，關(guān)鍵是要正確評(píng)價(jià)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的臨床意義。大臨床價(jià)值，關(guān)鍵是要正確評(píng)價(jià)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的臨床意義。 常見腫瘤標(biāo)志物AFP 甲胎蛋白CEA 癌胚抗原Ferritin 鐵蛋白CA12-5 腫瘤相關(guān)抗原CA12-5CA19-9 腫瘤相關(guān)抗原CA19-9CA153 腫瘤相關(guān)抗原CA153CA72-4 腫瘤相關(guān)抗原CA724CA242 腫瘤相關(guān)抗原CA242CA50 腫瘤相關(guān)抗原CA50CYFRA2101 細(xì)胞角蛋白19片段NSE 神經(jīng)元特意性烯醇化酶PSA 前列腺特異抗原fPSA 游離前列腺特異抗原甲胎蛋白（AFP）

6、臨床意義：臨床意義：lAFP是原發(fā)性肝癌的最佳腫瘤標(biāo)志物，是原發(fā)性肝癌的最佳腫瘤標(biāo)志物， 80% AFP400ng/ml，近，近20% AFP正常；正常；l內(nèi)胚層癌、畸胎瘤、睪丸癌、卵巢癌、胃癌與其伴肝轉(zhuǎn)移者AFP可升高。 l病毒性肝炎、肝硬化絕大部分AFP0.25多為良性疾病， fPSA/PSA0.16高度提示前列腺癌。神經(jīng)特異性烯醇化酶（NSE）臨床意義臨床意義: lNSE是小細(xì)胞肺癌（是小細(xì)胞肺癌（SCLC）首選腫瘤標(biāo)志物，診斷陽(yáng)性率為）首選腫瘤標(biāo)志物，診斷陽(yáng)性率為91%。l與CYFRA21-1聯(lián)合檢測(cè)，將會(huì)顯著提高肺癌的檢出率；l有助于鑒別大、小細(xì)胞性肺癌；l對(duì)療效有很好的指導(dǎo)意義；l

7、是神經(jīng)母細(xì)胞瘤的標(biāo)志物；l可提示用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的診斷及治療檢測(cè)，如胰島細(xì)胞瘤、嗜細(xì)胞瘤、甲狀腺瘤等。NSE主要來(lái)源于神經(jīng)細(xì)胞核神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞，以及這些細(xì)胞引發(fā)的腫瘤細(xì)胞中。鐵蛋白（Ferritin）鐵蛋白由人體網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞分泌，人體內(nèi)的2/3的鐵在肝、脾、骨髓和腸黏膜細(xì)胞中，某些腫瘤細(xì)胞也可合成并釋放鐵蛋白。臨床意義：臨床意義：l原發(fā)性肝癌診斷中鐵蛋白可以作為原發(fā)性肝癌診斷中鐵蛋白可以作為AFP的補(bǔ)充指標(biāo)，尤其在血清的補(bǔ)充指標(biāo)，尤其在血清AFP呈陰性的呈陰性的疑診者，鐵蛋白測(cè)定是不可缺少的一個(gè)補(bǔ)充檢查項(xiàng)目。疑診者，鐵蛋白測(cè)定是不可缺少的一個(gè)補(bǔ)充檢查項(xiàng)目。l肝癌、肺癌、膽管癌、胰頭癌、淋巴瘤

8、、白血病、泌尿系腫瘤、腦腫瘤、鼻咽癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、多發(fā)性骨髓瘤、非何杰金氏病等SF升高。l原發(fā)性肝癌，76%的肝轉(zhuǎn)移病人鐵蛋白含量高于400g/L，鐵蛋白與AFP聯(lián)合檢測(cè)可使陽(yáng)性率達(dá)到90%以上。糖類抗原125（CA125）CA125 是一種高分子量糖蛋白，存在于胎兒的體腔上皮來(lái)源的組織中，包括腹膜、胸膜和心包膜。正常人輸卵管、子宮內(nèi)膜和子宮頸內(nèi)膜均有表達(dá)。臨床意義：臨床意義：lCA125是卵巢癌首選腫瘤標(biāo)志物，診斷的靈敏度為是卵巢癌首選腫瘤標(biāo)志物，診斷的靈敏度為79%，特異性，特異性82%；l治療有效的患者CA125下降，復(fù)發(fā)CA125升高先于臨床癥狀的出現(xiàn)，CA125是判斷卵巢

9、癌療效和復(fù)發(fā)的良好指標(biāo)；l其他非卵巢惡性腫瘤也有一定的陽(yáng)性率，如生殖系統(tǒng)腫瘤、消化道腫瘤、肺癌、 乳腺癌等（廣譜）；l良性婦科疾病和胸、腹水也不同程度的升高，但陽(yáng)性率較低；l早期妊娠，CA125也有升高。糖類抗原15-3（CA15-3）CA15-3是分子量為400KD的上皮粘蛋白，主要來(lái)源于腺體細(xì)胞。臨床意義：臨床意義：lCA15-3是乳腺癌首選腫瘤標(biāo)志物，是乳腺癌首選腫瘤標(biāo)志物，原發(fā)乳腺癌患者CA15-3升高，乳腺癌初期的敏感性60%，乳腺癌晚期的敏感性80%；lCA15-3適用于乳腺癌的輔助診斷，連續(xù)檢測(cè)可用于II期和III期乳腺癌腫瘤復(fù)發(fā)的早期診斷，轉(zhuǎn)移性乳腺癌的療效監(jiān)測(cè)；l其他惡性腫瘤

10、也有一定的陽(yáng)性率，如肺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、肝臟、子宮頸癌等。l某些子宮內(nèi)膜癌患者的CA15-3升高，提示預(yù)后不佳，特別是血清CA15-3和CA125同時(shí)增高。糖類抗原19-9（CA19-9）臨床意義：臨床意義：lCA19-9可作為胰腺癌、膽囊癌、胃癌等惡性腫瘤的輔助診斷指標(biāo)，監(jiān)測(cè)病情可作為胰腺癌、膽囊癌、胃癌等惡性腫瘤的輔助診斷指標(biāo)，監(jiān)測(cè)病情變化和復(fù)發(fā)；變化和復(fù)發(fā)；l胰腺癌、膽囊癌CA19-9明顯升高，尤其胰腺癌晚期的陽(yáng)性率可達(dá)75%，是重要的輔助診斷指標(biāo)；l胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌等患者CA19-9也有不同程度升高。CA19-9在胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌的陽(yáng)性率分別為：

11、 50%、60%、65%；l某些消化道炎癥CA19-9也有不同程度的升高，如：急性胰腺炎、膽囊炎、膽汁淤積性膽管炎、肝炎、肝硬化等。CA19-9是一種與胃腸道癌相關(guān)的糖類抗原，胎兒的胰腺、膽囊、肝臟、腸等組織表達(dá)，成年人肺、肝臟、胰腺等組織也有低濃度的表達(dá)。糖類抗原72-4（CA72-4）臨床意義臨床意義: lCA72-4是胃癌首選腫瘤標(biāo)志物，對(duì)胃癌具有較高特異性，在轉(zhuǎn)移是胃癌首選腫瘤標(biāo)志物，對(duì)胃癌具有較高特異性，在轉(zhuǎn)移性胃癌患者中陽(yáng)性率更高；性胃癌患者中陽(yáng)性率更高；l胃癌檢測(cè)CA72-4較CEA和CA19-9有更高的敏感性；CA72-4、CA19-9和CEA聯(lián)合測(cè)定診斷胃癌符合率為86.2%

12、；lCA72-4用于胃癌預(yù)后判斷和療效觀察；lCA72-4升高還可見于乳腺癌、結(jié)直腸癌人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）暫未開展暫未開展人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）是由原癌基因ERBB2編碼，通過參與多種信號(hào)途徑調(diào)控細(xì)胞的分裂、分化和血管表達(dá)。臨床意義：lHER2 是乳腺癌的新型腫瘤標(biāo)志物，可有效評(píng)估乳腺癌的預(yù)后，并指導(dǎo)乳腺癌是乳腺癌的新型腫瘤標(biāo)志物，可有效評(píng)估乳腺癌的預(yù)后，并指導(dǎo)乳腺癌的治療。的治療。lHER 2在10%-25%的乳腺癌患者中過表達(dá)，預(yù)示了患者有更高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)及更短的存活率。HER2是乳腺癌復(fù)發(fā)和生存期長(zhǎng)短的獨(dú)立預(yù)后因子。l良性乳腺疾病中檢測(cè)到HER2輕微過表達(dá)，可增加患者

13、患浸潤(rùn)性乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)。lHER2 過表達(dá)乳腺癌患者，推薦使用基因靶向藥物，如赫賽汀。糖類抗原50（CA50）暫未開展暫未開展CA50是廣泛存在胰腺、膽囊、肝、胃、結(jié)直腸、膀胱、子宮等，是一種最常用的的糖類抗原腫瘤標(biāo)志物之一。臨床意義：臨床意義：lCA50是是胰腺癌和膽囊癌首選腫瘤標(biāo)志物之一，可用于胰腺癌、膽囊癌的早是是胰腺癌和膽囊癌首選腫瘤標(biāo)志物之一，可用于胰腺癌、膽囊癌的早期診斷、療效和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)。期診斷、療效和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)。lCA50是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，在胰腺、膽囊、肝、胃、結(jié)直腸、膀胱、子宮等多種惡性腫瘤中均有不同程度的升高。lCA50在胰腺癌和膽囊癌陽(yáng)性檢出率最高，可達(dá)94.4

14、%，其它惡性腫瘤肝癌、卵巢癌、子宮癌、胃癌、結(jié)直腸癌中亦有一定的陽(yáng)性檢出率。l淋巴增生性惡性病變也可見CA50增高。l炎癥如急慢性胰腺炎、結(jié)腸炎、肝炎、膽囊炎也有CA50的增高，而炎癥消退后CA50降低。腫瘤標(biāo)志物臨床應(yīng)用原則l腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)l動(dòng)態(tài)隨訪腫瘤標(biāo)志物的濃度值l與其他臨床診斷方法相結(jié)合如影像學(xué)、內(nèi)窺鏡以及病理檢查等。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)應(yīng)遵循以下原則：腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)應(yīng)遵循以下原則：二、腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合診斷腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)l同一腫瘤可含有一種或多種腫瘤標(biāo)志物l不同腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型可有共同的腫瘤標(biāo)志物 ，也有不同的腫瘤標(biāo)志物l使用聯(lián)合檢測(cè)可提高靈敏度和特異性AFP：1967年

15、開始用于肝CA診斷；公認(rèn)的早期診斷原發(fā)肝癌的指標(biāo)。上海東方肝膽外科醫(yī)院統(tǒng)計(jì)：1998-2001年期間，經(jīng)病理證實(shí)1013例肝癌患者，AFP陽(yáng)性率僅68.8%。如何提高腫瘤的檢出率？如何提高腫瘤的檢出率？來(lái)源：腫瘤與腫瘤標(biāo)志物研究中證據(jù)的思考 醫(yī)學(xué)與哲學(xué) 2009年2月 第30卷第2期來(lái)源：CEA、NSE、CYFRA211聯(lián)合檢測(cè)在肺癌診斷中的價(jià)值中國(guó)腫瘤2005年第14卷腫瘤標(biāo)志物在肺癌檢測(cè)中的應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物在肺癌檢測(cè)中的應(yīng)用吸煙鈾、鐳肺部慢性病家族遺傳NSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEANSE、CYF

16、RA211、CEA腫瘤標(biāo)志物小細(xì)胞肺癌檢測(cè)中的應(yīng)用來(lái)源：肺癌診斷技術(shù)研究進(jìn)展重慶工學(xué)院學(xué)報(bào) 第22卷 第一期腫瘤標(biāo)志物在胃癌檢測(cè)中的應(yīng)用血清中CEA、CA19-9、CA50、CA72-4、CA24-2在胃癌檢測(cè)中的靈敏度與特異性來(lái)源：血清腫瘤標(biāo)志物單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)的臨床意義臨床內(nèi)科雜志2007年8月第24卷第8期 胃癌診斷標(biāo)志物研究新進(jìn)展 醫(yī)學(xué)綜述 2008年5月第14卷第10期腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合診斷在胃癌檢測(cè)中的靈敏度及特異性CA724是早期診斷胃癌復(fù)發(fā)的重要手段是早期診斷胃癌復(fù)發(fā)的重要手段 CA724是胃癌最有價(jià)值的標(biāo)志物是胃癌最有價(jià)值的標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物在胃癌檢測(cè)中的應(yīng)用慢性萎縮性胃炎CEA+

17、CA19-9+ CA72-4胃息肉殘胃良性胃潰瘍惡性貧血腫瘤標(biāo)志物在胰腺癌檢測(cè)中的應(yīng)用來(lái)源：腫瘤標(biāo)志物CA19-9、CA242、CEA 和CA125聯(lián)合檢測(cè)在胰腺癌診斷中的意義肝膽胰外科雜志 第21卷第2期，2009年3月有多篇報(bào)道稱，CA242的特異性高于CA199。四種標(biāo)志物聯(lián)合診斷，是診斷胰腺癌早期而有效的方法。腫瘤標(biāo)志物在結(jié)直腸癌檢測(cè)中的應(yīng)用兩者聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，陽(yáng)性率提高兩者聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，陽(yáng)性率提高至至84.8%來(lái)源：結(jié)、直腸癌患者血清CEA、CA242聯(lián)檢的臨床意義 放射免疫學(xué)雜志 2005年第18卷第4期來(lái)源：血清腫瘤標(biāo)記物測(cè)定在結(jié)直腸癌中的意義腫瘤標(biāo)志物在結(jié)直腸癌檢測(cè)中的應(yīng)用來(lái)源：CE

18、A、CA19-9、CA24-2、CA72-4在大腸癌中的應(yīng)用價(jià)值探討放射免疫雜志2005年第18卷第2期腫瘤標(biāo)志物在結(jié)直腸癌檢測(cè)中的應(yīng)用慢性炎癥家族遺傳大腸腺瘤息肉CEA、CA24-2、CA199、CA724來(lái)源：血清CA - 724、CA - 199、CEA及CA - 50 聯(lián)檢對(duì)消化系統(tǒng)腫瘤的臨床應(yīng)用價(jià)值分析放射免疫雜志2005年第18卷第2期對(duì)于消化系統(tǒng)腫瘤，四項(xiàng)目聯(lián)合檢出率明顯提高，大大降低了漏檢率。對(duì)于消化系統(tǒng)腫瘤，建議聯(lián)檢：對(duì)于消化系統(tǒng)腫瘤，建議聯(lián)檢：CA724、CA199、CA50、CEA、CA242消化系統(tǒng)腫瘤篩查腫瘤標(biāo)志物在卵巢癌檢測(cè)中的應(yīng)用來(lái)源：血清CA125、CA724、

19、和CA199聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 2007年11月第6卷第11期來(lái)源：聯(lián)合檢測(cè)血清J6!# 和J6&!$T 對(duì)卵巢癌診斷的價(jià)值 海南醫(yī)學(xué) 2005年第16卷第7期腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)項(xiàng)目腫瘤名稱腫瘤名稱首選項(xiàng)目首選項(xiàng)目最佳聯(lián)合項(xiàng)目最佳聯(lián)合項(xiàng)目原發(fā)性肝癌AFPCA50、FE、CA199、CEA胰腺癌CA199CEA、CA242、結(jié)、直腸癌CEACA724、CA199、CA242乳腺癌CA153CEA膽囊癌CA199CEA、CA242絨癌B-HCGCA125、CEA、CA50卵巢癌CA125CA153、CEA、CA724肺癌Cyfra21-1NSE、CEA腎癌CA5

20、0CEA、AFP胃癌CA724CA50、CEA、CA199總 結(jié)l腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)優(yōu)于單項(xiàng)檢測(cè)l腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)可提高靈敏度和特異性l遴選出對(duì)某一腫瘤適用的“聯(lián)合診斷腫瘤標(biāo)志物群”，可提高診斷效率，降低費(fèi)用腫瘤標(biāo)志物在腫瘤篩查的應(yīng)用l對(duì)于腫瘤標(biāo)志物呈陽(yáng)性并非一定就是癌癥，檢測(cè)呈陰性也不一定就能排除癌癥，因而腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)健康人群篩查作用有限l腫瘤標(biāo)志物更適用于高危人群及年齡40歲以上群體的腫瘤篩查，特別是對(duì)于發(fā)生率高的腫瘤，有腫瘤家族史以及有癥狀的患者，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療有重要的意義腫瘤標(biāo)志物體檢套餐配置體檢套餐配置的原則體檢套餐配置的原則l科學(xué)性：合理利用各種腫瘤標(biāo)志物的優(yōu)

21、勢(shì)，聯(lián)合檢測(cè)達(dá)到理想的檢測(cè)效果。 測(cè)定方法應(yīng)靈敏、特異性高、重復(fù)性好。 原則上腫瘤檢測(cè)項(xiàng)目越多越好。l篩查費(fèi)用經(jīng)濟(jì)、合理。即根據(jù)不同的體檢套餐價(jià)格來(lái)配置腫瘤篩查項(xiàng)目。普通套餐 CEA AFP Ferritin 女性套餐 CA153 B-HCG CA125男性套餐 PSA fPSA 高級(jí)套餐 CA50 CA724 CYFRA21-1 CA199 NSE CA242 三、腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)技術(shù)臨床腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)方法l放射免疫分析法放射免疫分析法l熒光免疫分析法熒光免疫分析法l酶聯(lián)免疫分析法酶聯(lián)免疫分析法l膠體金層析免疫分析法膠體金層析免疫分析法l化學(xué)發(fā)光免疫分析法化學(xué)發(fā)光免疫分析法l蛋白芯片蛋白芯

22、片基于免疫分析基于免疫分析免疫分析免疫反應(yīng)免疫反應(yīng): : 抗原進(jìn)入機(jī)體，刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使之產(chǎn)生免疫應(yīng)答，這種反應(yīng)叫免疫反應(yīng)。免疫應(yīng)答應(yīng)答包括對(duì)抗原物質(zhì)的感應(yīng)、反應(yīng)、效應(yīng)三個(gè)連續(xù)的階段。免疫分析（免疫分析（I Immunoassaymmunoassay，IAIA）: : 在臨床檢驗(yàn)中, 體外模擬抗體抗原的免疫反應(yīng)，根據(jù)抗原與其配對(duì)抗體能夠發(fā)生特異反應(yīng), 用已知的抗原或抗體檢測(cè)分析液中的抗體或抗原。l高特異性高特異性 l高親和性高親和性 放免放免酶免酶免發(fā)光發(fā)光60年代年代70年代年代90年代年代免疫分析技術(shù)的發(fā)展免疫分析技術(shù)介紹l化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（CLIA）是將化

23、學(xué)發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測(cè)微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。l放射免疫分析技術(shù)（放射免疫分析技術(shù)（RIA）是將放射性同位素測(cè)量的高靈敏度、精確性和抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，在體外進(jìn)行微量分析的一種檢測(cè)技術(shù)。l酶聯(lián)免疫標(biāo)記分析技術(shù)（酶聯(lián)免疫標(biāo)記分析技術(shù)（EIA）是用酶標(biāo)記的抗體或抗原，將抗原-抗體反應(yīng)的特異性和酶催化底物反應(yīng)的高效性和專一性結(jié)合起來(lái)，并通過酶與底物產(chǎn)生顏色，測(cè)定光吸收的一種免疫檢測(cè)技術(shù)。l時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)（時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)（TRFIA）是目前最常用的免疫熒光分析方法。它是利用鑭系元素標(biāo)記抗原或抗體，根據(jù)鑭系元素的發(fā)光特點(diǎn)，用時(shí)間分辨技術(shù)測(cè)量熒光

24、，同時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)和時(shí)間兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行信號(hào)分辨，可有效地排除非特異熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。 l免疫膠體金分析技術(shù)免疫膠體金分析技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物或顯色劑，以膜為載體，利用抗體抗原免疫反應(yīng)，通過層析過程達(dá)到在體外進(jìn)行微量分析的一種技術(shù)。 l蛋白質(zhì)芯片技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是將多種抗體或抗原高密度排列在固定支持物表面上，使樣品中的目的蛋白（如抗原）特異性地與之結(jié)合，通過微加工技術(shù)和微電子技術(shù)在固體芯片表面構(gòu)建微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，對(duì)目的蛋白進(jìn)行定性、定量檢測(cè)。免疫分析技術(shù)介紹幾種標(biāo)記免疫技術(shù)靈敏度的比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光靈敏度(mol/L)10-1810-1510-1210-9幾種標(biāo)記免

25、疫技術(shù)線性范圍的比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光線性范圍105104103102幾種標(biāo)記免疫試劑的有效期比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光有效期（月）1815129630免疫分析技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光免疫分析（分析（CLIA）酶聯(lián)免疫標(biāo)記酶聯(lián)免疫標(biāo)記分析（分析（EIA）放射免疫分析（放射免疫分析（RIA）膠體金免疫膠體金免疫分析（試紙分析（試紙條）條）時(shí)間分辨熒光時(shí)間分辨熒光免疫分析（免疫分析（TRFIA）蛋白芯片技術(shù)蛋白芯片技術(shù)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 靈敏度高、測(cè)定范圍寬、穩(wěn)定性好，檢測(cè)快速、簡(jiǎn)便，無(wú)放射污染等。 技術(shù)成熟，操作簡(jiǎn)單，成本較低。靈敏度高、測(cè)量范圍較寬，試劑成本比較低?？焖伲僮骱?jiǎn)單方便，適合現(xiàn)場(chǎng)和急診檢測(cè)

26、。靈敏度高、檢測(cè)范圍寬，熒光測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng)。芯片技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是通量高，可以在一次檢測(cè)中實(shí)現(xiàn)多種標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)?？梢钥醋魇嵌鄠€(gè)化學(xué)發(fā)光免疫分析或熒光分析的集合。缺點(diǎn)缺點(diǎn) 目前試劑成本相對(duì)比較高。靈敏度較低，檢測(cè)范圍較窄，干擾因素多，容易出現(xiàn)Hook效應(yīng)，只能用于定性或半定量檢測(cè)。同位素標(biāo)記半衰期短，試劑盒穩(wěn)定差，保質(zhì)期短，具有放射性，對(duì)人體有一定的危害，需要嚴(yán)格的防護(hù)，對(duì)其廢棄物也應(yīng)需要按規(guī)定進(jìn)行處理。靈敏度不夠，只能用于定性檢測(cè)。環(huán)境中存在的稀土元素會(huì)對(duì)檢測(cè)造成較大干擾，尤其是中國(guó)為稀土大國(guó)，因而對(duì)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)環(huán)境清潔度要求很高。固相載體上同時(shí)包被多種抗體/抗原，容易產(chǎn)生交叉反應(yīng)，結(jié)果容易

27、互相產(chǎn)生光干擾，靈敏度和特異性容易受影響。同時(shí)這種技術(shù)比較新，臨床檢測(cè)項(xiàng)目比較少。l化學(xué)發(fā)光免疫分析因?yàn)榫哂徐`敏度高、測(cè)定范圍寬、使用范圍廣、檢測(cè)快速簡(jiǎn)便，易自動(dòng)化，并在測(cè)試中不使用有害試劑，無(wú)放射污染等特點(diǎn)，因此是目前最理想的體外診斷技術(shù)之一。l化學(xué)發(fā)光免疫分析1980s進(jìn)入體外診斷領(lǐng)域，第一臺(tái)全自動(dòng)檢測(cè)儀1993年誕生。化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)包被抗原包被抗原待測(cè)抗體待測(cè)抗體酶標(biāo)記的抗體酶標(biāo)記的抗體發(fā)光底物發(fā)光底物光子計(jì)數(shù)光子計(jì)數(shù)（酶免檢測(cè)顏色變（酶免檢測(cè)顏色變化，采用分光光度化，采用分光光度計(jì)計(jì)數(shù)）計(jì)計(jì)數(shù)）PMT高速放大信高速放大信號(hào)后讀數(shù)！號(hào)后讀數(shù)！化學(xué)發(fā)光免疫分析原理化學(xué)發(fā)光按化學(xué)反應(yīng)類

28、型分為：化學(xué)發(fā)光按化學(xué)反應(yīng)類型分為：u直接化學(xué)發(fā)光（非酶促化學(xué)發(fā)光）直接化學(xué)發(fā)光（非酶促化學(xué)發(fā)光）l吖啶酯系統(tǒng)l魯米諾系統(tǒng)u間接化學(xué)發(fā)光（酶促化學(xué)發(fā)光）間接化學(xué)發(fā)光（酶促化學(xué)發(fā)光）l辣根過氧化物酶魯米諾系統(tǒng)（HRP系統(tǒng)）l堿性磷酸酶金剛烷系統(tǒng)（AP系統(tǒng)）u其它其它l電化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)類型CH3C=OORN+OH-H+H2O2+ H2O+ROH光子 + CO2 +CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO吖啶酯化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)吖啶酯化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)吖啶酯化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)吖啶酯標(biāo)記吖啶酯標(biāo)記 : 西門子Siemens Centaur XP CP 雅培Abbott Arch

29、itect i2000 魯米諾及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)魯米諾及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)H2O2+NH2OONHNHN2OH-HRPNH2CO2-CO2-+Photon (425nm)ROHROH NSRBOHOH增強(qiáng)劑（Enhancer）魯米諾在免疫測(cè)定中既可用作標(biāo)記物，也可用作辣根過氧化物酶的底物 魯米諾化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)魯米諾直接標(biāo)記魯米諾直接標(biāo)記 ：索林DiaSoin Liaison 新產(chǎn)業(yè) HRP-魯米諾標(biāo)記：魯米諾標(biāo)記：源德、科美、安圖金剛烷作為堿性磷酸酶的底物+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3 金鋼烷（發(fā)光底物）及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)

30、光系統(tǒng)金鋼烷（發(fā)光底物）及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)堿性磷酸酶化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)堿性磷酸酶（堿性磷酸酶（AP）系統(tǒng)）系統(tǒng)：貝克曼：Access 1、Access 2，DXI600、DXI800 西門子：Immulite1000 , Immulite 2000 達(dá)成生物：AULIA200 第一代：第一代：魯米諾及其衍生物 第二代：第二代：l直接標(biāo)記：直接標(biāo)記：吖叮酯標(biāo)記l間接標(biāo)記：間接標(biāo)記：堿性磷酸酶-金剛烷系統(tǒng)l電化學(xué)發(fā)光：電化學(xué)發(fā)光：三聯(lián)砒啶釕化學(xué)發(fā)光的發(fā)展史國(guó)際主流免疫診斷公司均采用第二代化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物：國(guó)際主流免疫診斷公司均采用第二代化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物：吖啶酯（雅培、堿性磷酸酶吖啶酯（雅培、堿性磷

31、酸酶-金剛烷（貝克曼、西門子）、三金剛烷（貝克曼、西門子）、三聯(lián)砒啶釕（羅氏）聯(lián)砒啶釕（羅氏）化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方式l隨機(jī)處理模式 管式化學(xué)發(fā)光管式化學(xué)發(fā)光l批處理模式 板式化學(xué)發(fā)光板式化學(xué)發(fā)光l采用管式或微粒子發(fā)光，測(cè)定快速、準(zhǔn)確；l可以隨到隨測(cè)，適用于醫(yī)院急診；l定量檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線存儲(chǔ)在試劑條形碼中，可在2-4周內(nèi)直接使用。國(guó)外廠家是管式化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)管式化學(xué)發(fā)光l適合流行病調(diào)查、疾病預(yù)防與控制、體檢中心，以及醫(yī)院血站等大樣本檢測(cè)項(xiàng)目的使用（比如HIV、TP、HCV和乙肝兩對(duì)半等）；l通常采用96孔白色不透明微孔板進(jìn)行包被，不方便隨到隨測(cè)和醫(yī)院急診；l對(duì)于定量檢測(cè)需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線。國(guó)內(nèi)廠家主要是板式

32、化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)板式化學(xué)發(fā)光管式化學(xué)發(fā)光 vs 板式化學(xué)發(fā)光管式化學(xué)發(fā)光管式化學(xué)發(fā)光 板式化學(xué)發(fā)光板式化學(xué)發(fā)光 檢測(cè)方式檢測(cè)方式 管式測(cè)量，非批量隨機(jī)檢測(cè)，標(biāo)本隨到隨測(cè)，方便急診板式測(cè)量，批量檢測(cè)。需要將樣品收集集中檢測(cè)，適合大樣本量檢測(cè) 抗體抗體/抗原包被方式抗原包被方式 包被磁微粒，包被量更大，有效避免Hook效應(yīng)，提高檢測(cè)靈敏度，縮短反應(yīng)時(shí)間 包被微孔板，包被量有限 試劑盒變異系數(shù)（試劑盒變異系數(shù)（CV） Ab/Ag包被是通過化學(xué)共價(jià)耦合，試劑盒CV小 包被是通過非特異性吸附，試劑盒CV大 反應(yīng)過程反應(yīng)過程 磁微粒粒徑小，比表面積大，免疫反應(yīng)過程在近乎均相的條件下反應(yīng)，反應(yīng)更充分，更快速 免疫反應(yīng)過程為固液相反應(yīng)，反應(yīng)不充分，速度較慢 讀數(shù)干擾讀數(shù)干擾檢測(cè)管獨(dú)立讀數(shù)，不存在管間的讀數(shù)干擾微孔板整板讀數(shù)，微孔間存在讀數(shù)干擾自動(dòng)化自動(dòng)化 容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，通常與專門的自動(dòng)化檢測(cè)儀配套使用 半自動(dòng)化操作 結(jié) 論管式化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)管式化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)是理想的腫瘤標(biāo)志物體外診斷技術(shù)l高靈敏性、特異性和穩(wěn)定性高靈敏性、特異性和穩(wěn)定性l寬線性范圍寬線性范圍l使用范圍廣使用范圍廣 l高通量和高度自動(dòng)化高通量和高度自動(dòng)化l無(wú)放射性危險(xiǎn)無(wú)放射性危險(xiǎn)國(guó)際主流化學(xué)發(fā)光的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)l反應(yīng)方式反應(yīng)方式 免疫反應(yīng)l測(cè)量方式測(cè)量方式 光子計(jì)