抗生素類藥物質(zhì)量分析新進(jìn)展

1、抗生素類藥物質(zhì)量分析新進(jìn)展一一 內(nèi)酰胺類藥物內(nèi)酰胺類藥物 二二 大環(huán)內(nèi)酯類藥物大環(huán)內(nèi)酯類藥物 3 3四環(huán)素類藥物四環(huán)素類藥物 4其他類藥物其他類藥物一 內(nèi)酰胺類藥物內(nèi)酰胺類藥物 w 柱切換柱切換HPLCHPLC技術(shù)技術(shù) w 近紅外反射光譜分析技術(shù)近紅外反射光譜分析技術(shù)w 毛細(xì)管區(qū)帶電泳技術(shù)毛細(xì)管區(qū)帶電泳技術(shù) w 流動注射化學(xué)發(fā)光法流動注射化學(xué)發(fā)光法 柱切換柱切換HPLCHPLC技術(shù)技術(shù)基本原理：基本原理： 首先在預(yù)柱上實(shí)現(xiàn)生物體液中干擾首先在預(yù)柱上實(shí)現(xiàn)生物體液中干擾大分子與待測藥物的分離，然后用柱大分子與待測藥物的分離，然后用柱切換將待測藥物從預(yù)柱轉(zhuǎn)移至分析柱切換將待測藥物從預(yù)柱轉(zhuǎn)移至分析柱上

2、完成色譜分析。上完成色譜分析。 柱切換柱切換HPLCHPLC技術(shù)技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 柱切換柱切換HPLCHPLC具有樣品制備和測定具有樣品制備和測定雙重功能，全過程在密閉的條件下進(jìn)雙重功能，全過程在密閉的條件下進(jìn)行，有利于不穩(wěn)定的藥物分析，而它行，有利于不穩(wěn)定的藥物分析，而它的富集作用提高了靈敏度的富集作用提高了靈敏度 近紅外反射光譜分析技術(shù)基本原理基本原理: : 利用漫反射近紅外光譜結(jié)合統(tǒng)計利用漫反射近紅外光譜結(jié)合統(tǒng)計分析技術(shù)建立物質(zhì)組分的定標(biāo)模型，分析技術(shù)建立物質(zhì)組分的定標(biāo)模型，再根據(jù)待測樣品的光譜特征，利用相再根據(jù)待測樣品的光譜特征，利用相應(yīng)的定標(biāo)模型實(shí)現(xiàn)樣品定量。應(yīng)的定標(biāo)模型實(shí)現(xiàn)樣品定量

3、。 近紅外反射光譜分析技術(shù)近紅外反射光譜分析技術(shù)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): : 樣品可以是經(jīng)過處理的，也可以是樣品可以是經(jīng)過處理的，也可以是未處理原狀樣未處理原狀樣, ,分析速度快，可實(shí)現(xiàn)分析速度快，可實(shí)現(xiàn)在線或?qū)崟r分析在線或?qū)崟r分析, ,同時能分析多種組同時能分析多種組分分, ,被稱之為被稱之為“巨人巨人”分析法分析法 毛細(xì)管區(qū)帶電泳技術(shù)毛細(xì)管區(qū)帶電泳技術(shù)基本原理基本原理: : 是高效毛細(xì)管電泳的其中一種，是基于是高效毛細(xì)管電泳的其中一種，是基于帶電的溶質(zhì)在電場中遷核行為的差異而進(jìn)帶電的溶質(zhì)在電場中遷核行為的差異而進(jìn)行分離分折的方法行分離分折的方法, ,電泳條件為：電壓：電泳條件為：電壓：1616kvkv，

4、pH 7.98pH 7.98以及緩沖液濃度以及緩沖液濃度25m mol/L25m mol/L為條件進(jìn)行測定。為條件進(jìn)行測定。 毛細(xì)管區(qū)帶電泳技術(shù)毛細(xì)管區(qū)帶電泳技術(shù)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): : 快速、簡便、低耗、抗污染及抗干擾能快速、簡便、低耗、抗污染及抗干擾能力強(qiáng)力強(qiáng). .同時同時CECE的方法已被稱為的方法已被稱為20002000年版中年版中國藥典收載，成為藥物分析的法定方法，國藥典收載，成為藥物分析的法定方法，因此因此CZECZE在藥品的質(zhì)量控制中將得到更為在藥品的質(zhì)量控制中將得到更為廣泛的應(yīng)用廣泛的應(yīng)用. .流動注射化學(xué)發(fā)光法流動注射化學(xué)發(fā)光法基本原理基本原理: : 頭孢氨芐抗生素對魯米諾高錳酸鉀化頭

5、孢氨芐抗生素對魯米諾高錳酸鉀化學(xué)發(fā)光反應(yīng)有很強(qiáng)的增敏作用，魯米諾學(xué)發(fā)光反應(yīng)有很強(qiáng)的增敏作用，魯米諾- -高錳酸鉀溶液和藥物混合后流入光度測量高錳酸鉀溶液和藥物混合后流入光度測量儀，繪制發(fā)光曲線，記錄發(fā)光響應(yīng)信號，儀，繪制發(fā)光曲線，記錄發(fā)光響應(yīng)信號，以峰高進(jìn)行定量。以峰高進(jìn)行定量。 流動注射化學(xué)發(fā)光法流動注射化學(xué)發(fā)光法二二 大環(huán)內(nèi)酯類藥物大環(huán)內(nèi)酯類藥物中國藥典中國藥典20002000年版方法年版方法: :w 效價測定效價測定: :采用微生物檢定法采用微生物檢定法w 有關(guān)物質(zhì)檢查有關(guān)物質(zhì)檢查:TLC:TLC法法 二二 大環(huán)內(nèi)酯類藥物大環(huán)內(nèi)酯類藥物快速快速HPLCHPLC分析法分析法 : : 一般采

6、用短粗尺寸色譜柱來提高洗脫速度一般采用短粗尺寸色譜柱來提高洗脫速度. . 快速快速AlltimaAlltima C C1818柱柱(33mm(33mm7mm,3um7mm,3um或或53mm53mm7mm,3um),7mm,3um),而常規(guī)而常規(guī)AlltimaAlltima C C1818柱柱（250250mmmm4.6mm,5um4.6mm,5um） 二二 大環(huán)內(nèi)酯類藥物大環(huán)內(nèi)酯類藥物快速快速HPLCHPLC分析法優(yōu)點(diǎn)分析法優(yōu)點(diǎn): : 與常規(guī)色譜系統(tǒng)相比較與常規(guī)色譜系統(tǒng)相比較, , 快速分析柱具快速分析柱具有分析時間短，最低檢測限與最低定量限有分析時間短，最低檢測限與最低定量限更低等優(yōu)點(diǎn)。其

7、柱效雖然較常規(guī)色譜柱低，更低等優(yōu)點(diǎn)。其柱效雖然較常規(guī)色譜柱低，但仍可滿足藥物及其雜質(zhì)的分離要求但仍可滿足藥物及其雜質(zhì)的分離要求, ,且且較常規(guī)色譜柱對雜質(zhì)具有高的靈敏度較常規(guī)色譜柱對雜質(zhì)具有高的靈敏度, ,并并可極大地節(jié)約分析時間可極大地節(jié)約分析時間. .三三 四環(huán)素類藥物四環(huán)素類藥物w電分析化學(xué)方法電分析化學(xué)方法w光纖傳感器測定法光纖傳感器測定法w光譜法光譜法 電分析化學(xué)方法電分析化學(xué)方法w 極譜脈沖法測定四環(huán)素含量極譜脈沖法測定四環(huán)素含量 : : 四環(huán)素為四并苯衍生物，分子中含有酮基四環(huán)素為四并苯衍生物，分子中含有酮基和烯醇的共扼雙鍵系統(tǒng)，因此可在電極上和烯醇的共扼雙鍵系統(tǒng)，因此可在電極上

8、發(fā)生極譜還原。發(fā)生極譜還原。 電分析化學(xué)方法電分析化學(xué)方法w 離子選擇電極法測定四環(huán)素含量離子選擇電極法測定四環(huán)素含量: 由于四環(huán)素分子中含有二甲胺基，易溶由于四環(huán)素分子中含有二甲胺基，易溶于鹽酸生成溶解度較大的鹽酸四環(huán)素，其于鹽酸生成溶解度較大的鹽酸四環(huán)素，其二甲銨陽離子易與陰離子載體離子形成締二甲銨陽離子易與陰離子載體離子形成締合物沉淀，因此可制成聚氯乙烯合物沉淀，因此可制成聚氯乙烯(PVC)(PVC)膜膜電極。電極。 光纖傳感器測定法光纖傳感器測定法基本原理基本原理: : 四環(huán)素對四環(huán)素對PAMB(PAMB(蒽甲基酯共聚物蒽甲基酯共聚物) )膜熒光有強(qiáng)膜熒光有強(qiáng)烈淬滅作用烈淬滅作用, ,

9、將附著敏感膜的石英玻片裝入微將附著敏感膜的石英玻片裝入微型流通池中型流通池中, ,流通池與熒光分光光度計連接，流通池與熒光分光光度計連接，微量泵以一定的速度將樣品輸人流通池微量泵以一定的速度將樣品輸人流通池, ,記錄記錄膜與樣品溶液達(dá)到平衡時的熒光強(qiáng)度，膜與樣品溶液達(dá)到平衡時的熒光強(qiáng)度， 光纖傳感器測定法優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): : 此傳感器靈敏度高，響應(yīng)迅速，同時具此傳感器靈敏度高，響應(yīng)迅速，同時具有較好的選擇性，常見藥物及堿金屬、堿有較好的選擇性，常見藥物及堿金屬、堿土金屬離子對四環(huán)素的測定不產(chǎn)生干擾，土金屬離子對四環(huán)素的測定不產(chǎn)生干擾，已成功應(yīng)用于四環(huán)素藥物樣品的測定。已成功應(yīng)用于四環(huán)素藥物樣品的測定

10、。 光譜法w 流動注射化學(xué)發(fā)光法流動注射化學(xué)發(fā)光法: : 在堿性介質(zhì)下，四環(huán)素對在堿性介質(zhì)下，四環(huán)素對LuminolLuminolKmnOKmnO4 4化學(xué)發(fā)光體系具有強(qiáng)烈的抑制作用，化學(xué)發(fā)光體系具有強(qiáng)烈的抑制作用，因此可以結(jié)合流動注射技術(shù)因此可以結(jié)合流動注射技術(shù), ,用于四環(huán)素用于四環(huán)素的含量測定的含量測定, ,與與內(nèi)酰胺類藥物恰好相內(nèi)酰胺類藥物恰好相反反. . 光譜法w 釷與四環(huán)素類抗生素的顯色分析釷與四環(huán)素類抗生素的顯色分析 在在PH7.2PH7.2的緩沖溶液存在下的緩沖溶液存在下, ,四環(huán)素類藥四環(huán)素類藥物與釷物與釷(1V)(1V)形成配合物后形成配合物后, ,可發(fā)生紅移可發(fā)生紅移,

11、,因因此能可見分光光度計測量此能可見分光光度計測量 發(fā)酵液中林可霉素含量測定發(fā)酵液中林可霉素含量測定 林可霉素與林可霉素與PdClPdCl2 2在酸性條件下可以形成有色的在酸性條件下可以形成有色的絡(luò)合物，而發(fā)酵液中其他組分不與絡(luò)合物，而發(fā)酵液中其他組分不與PdClPdCl2 2形成絡(luò)合物形成絡(luò)合物, ,有色的絡(luò)合物隨林可霉素的濃度增大顏色加深有色的絡(luò)合物隨林可霉素的濃度增大顏色加深, ,但但是發(fā)酵液中色素在紫外及可見光范圍內(nèi)均有吸收，是發(fā)酵液中色素在紫外及可見光范圍內(nèi)均有吸收，利用利用Y Y參比法可以有效的排除發(fā)酵液中其他組分參比法可以有效的排除發(fā)酵液中其他組分對林可霉素濃度測定的干擾。對林可

12、霉素濃度測定的干擾。發(fā)酵液中林可霉素含量測定發(fā)酵液中林可霉素含量測定Y Y參比法原理：參比法原理： 林可霉素林可霉素PdClPdCl2 2絡(luò)合物作為絡(luò)合物作為X X組分，將除林組分，將除林可霉素可霉素PdClPdCl2 2配合物以外的發(fā)酵液作為配合物以外的發(fā)酵液作為Y Y組分。組分。分別在分別在376nm376nm和和380nm380nm兩波長下進(jìn)行測定。兩波長下進(jìn)行測定。 高分子雜質(zhì)檢查高分子雜質(zhì)檢查 抗生素所致的速發(fā)型過敏反應(yīng)主要和藥抗生素所致的速發(fā)型過敏反應(yīng)主要和藥物中存在的高分子雜質(zhì)有關(guān)，抗生素中高物中存在的高分子雜質(zhì)有關(guān)，抗生素中高分子雜質(zhì)的分離分析方法主要是色譜法。分子雜質(zhì)的分離分析方法主要是色譜法。分離模式有凝膠過濾色譜法、離子交換色分離模式有凝膠過濾色譜法、離子交換色譜法、反相色譜法、譜法、反相色譜法、 毛細(xì)管電泳法和薄毛細(xì)管電泳法和薄層色譜法，其中以凝膠過濾色譜法占主要。層色譜法，其中以凝膠過濾色譜法占主要。 高分子雜質(zhì)檢查高分子雜質(zhì)檢查凝膠過濾色譜法凝膠過濾色譜法: :