《化妝品微生物標準檢驗方法》GB7918.1～5——87

1、WORD格式一、總那么General Principle1 X圍本標準規(guī)定了化裝品微生物學檢驗總那么。本標準適用于化裝品樣品的采集、保存、供檢樣品制備。2 儀器和設備2.1 天平。2.2 高壓滅菌器。2.3 振蕩器。2.4 三角瓶。2.5 玻璃珠。2.6 玻璃棒。2.7 刻度吸管。2.8 研缽。2.9 均質(zhì)器。2.10 恒溫水浴箱。2.11 采樣用具：不銹鋼勺，剪刀，開罐器等。3 培養(yǎng)基和試劑3.1生理鹽水成分：氯化鈉8.5g蒸餾水加至1000 mL溶解后，分裝到加玻璃珠的三角瓶內(nèi)，每瓶90mL ， 103.43kPa(15 lb)20min高壓滅菌。3.2SCDLP 液體培養(yǎng)基成分：酪蛋白胨

2、17g大豆蛋白胨3g氯化鈉5g磷酸氫二鉀2.5g葡萄糖2.5g卵磷脂1g吐溫 807g蒸餾水1000mL專業(yè)資料整理WORD格式制法：先將卵磷脂在少量蒸餾水中加溫溶解后，再與其它成分混合，加熱溶解，調(diào)7.2 7.3，分裝， 103.43kPa(15lb)20min 高壓滅菌。注意振蕩，使沉淀于底層的吐溫合，冷卻至25左右使用。pH 為80 充分混專業(yè)資料整理WORD格式注：如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。3.3滅菌液體石蠟。3.4滅菌吐溫80。專業(yè)資料整理WORD格式4 樣品的采集及本卷須知4.1所采集的樣品，應具有代表性，一般視每批化裝品數(shù)量大小，隨機抽取相應數(shù)量的包裝單位。檢驗時

3、，應分別從兩個包裝單位以上的樣品中共取10g 或 10mL 。包裝量小于20g 的樣品，采樣量應適量增加，其總量應大于16g。4.2 供檢驗樣品，應嚴格保持原有的包裝狀態(tài)，進口產(chǎn)品應為市售包裝。容器不應有破裂，在檢驗前不得翻開，防止樣品被污染。4.3 接到樣品后，應立即登記，編寫檢驗序號，并按檢驗要求盡快檢驗。如不能及時檢驗，樣品應放在室溫陰涼枯燥處，不要冷藏或冷凍。4.4 假設只有一份樣品而同時需做多種分析，如微生物、毒理、化學等，應先做微生物檢驗，再將剩余樣品做其它分析。4.5在檢驗過程中，從翻開包裝到全部檢驗操作完畢，均須防止微生物的再污染和擴散，所用采樣用具、器皿及材料均應事先滅菌，全

4、部操作應在無菌室內(nèi)進展，或在相應條件下，按無菌操作規(guī)定進展。5 供檢樣品的制備5.1 液體樣品5.1.1水溶性的液體樣品，量取10mL 加到 90mL滅菌生理鹽水中，混勻后，制成1:10 檢液。5.1.2油性液體樣品，取樣品10mL ，先加 5mL滅菌液體石蠟混勻，再加10mL 滅菌的吐溫80，在 40 44水浴中振蕩混合 10min ，參加滅菌的生理鹽水75mL( 在 40 44水浴中預溫 )，在 40 44水浴中乳化，制成1:10 的懸液。5.2膏、霜、乳劑半固體狀樣品5.2.1親水性的樣品，稱取10g，加到裝有玻璃珠及90mL 滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分振蕩混勻，靜置 15min 。取

5、其上清液作為1:10 的檢液。5.2.2疏水性樣品，稱取10g，放到滅菌的研缽中，加10mL 滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，再參加 10mL 滅菌吐溫80，研磨待溶解后，加70mL 滅菌生理鹽水，在40 44水浴中充分混合，制成 1:10 檢液。5.3固體樣品，稱取 10g，加到 90mL 滅菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，使其分散混懸，靜置后，取上清液作為 1:10的檢液。如有均質(zhì)器，上述水溶性膏、霜、粉劑等，可稱10g 樣品參加 90mL 滅菌生理鹽水，均質(zhì)1min 2min ；疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10g 樣品，加 10mL 滅菌液體石蠟， 10mL 滅菌吐溫 80， 70mL 滅菌生

6、理鹽水，均質(zhì)3min 5min 。專業(yè)資料整理WORD格式二、菌落總數(shù)Aerobic Bacterial Count1 X圍本標準規(guī)定了化裝品中菌落總數(shù)的檢驗方法。本標準適用于化裝品菌落總數(shù)的測定。2定義本標準采用以下定義菌落總數(shù) (aerobic bacterial count) 是指化裝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后(如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、pH 值、需氧性質(zhì)等)， 1g(1mL) 檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中溫的需氧性菌落總數(shù)。測定菌落總數(shù)便于判明樣品被細菌污染的程度，是對樣品進展衛(wèi)生學總評價的綜合依據(jù)。3 儀器和設備3.1三角瓶。3

7、.2量筒。3.3pH 計或精細 pH 試紙。3.4高壓滅茵器。3.5試管。3.6平皿： 直徑 9cm。3.7刻度吸管：10mL 、 2mL 、 1mL 。3.8酒精燈。3.9恒溫培養(yǎng)箱。3.10放大鏡。4 培養(yǎng)基和試劑4.1生理鹽水：見總那么中3.1。4.2卵磷脂、吐溫 80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基4.2.1成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂15g卵磷脂1g吐溫 807g蒸餾水1000mL4.2.2制法：先將卵磷脂加到少量蒸餾水中，加熱溶解，參加吐溫80，將其他成分 (除瓊脂外 )加到其余的蒸餾水中，溶解。參加已溶解的卵磷脂、吐溫80，混勻，調(diào) pH 值為 7.17.4，加入瓊脂， 103.43

8、kPa(15 lb)20min 高壓滅菌，儲存于冷暗處備用。4.30.5%氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl terazolium chloride,TTC)成分： TTC0.5g專業(yè)資料整理WORD格式蒸餾水溶解后過濾，103.43kPa(15 lb)20min100mL高壓滅菌，裝于棕色試劑瓶，置4冰箱備用。專業(yè)資料整理WORD格式5 操作步驟5.1 用滅菌吸管吸取 1:10 稀釋的檢液2mL ，分別注入到兩個滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL 。另取1mL 注入到 9mL 滅菌生理鹽水試管中(注意勿使吸管接觸液面)，更換一支吸管，并充分混勻，制成 1:100 檢液。吸取 2mL ，分別注

9、入到兩個滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL 。如樣品含菌量高，還可再稀釋成 1:1000， 1:10000，, 等，每種稀釋度應換1 支吸管。5.2 將融化并冷至 45 50的卵磷脂吐溫 80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注到平皿內(nèi)，每皿約 15mL ，隨即轉(zhuǎn)動平皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置37培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 48h。另取一個不加樣品的滅菌空平皿，參加約15mL 卵磷脂吐溫80 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置37培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h，為空白對照。5.3 為便于區(qū)別化裝品中的顆粒與菌落，可在每100mL 卵磷脂吐溫80 營養(yǎng)瓊脂中參加1mL0.5% 的 TTC 溶液，如有細菌存在，培

10、養(yǎng)后菌落呈紅色，而化裝品的顆粒顏色無變化。6菌落計數(shù)方法先用肉眼觀察，點數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5 10 倍的放大鏡檢查，以防遺漏。記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)。假設平皿中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時，該平皿不宜計數(shù)。假設片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，那么可將此半個平皿菌落計數(shù)后乘以2，以代表全皿菌落數(shù)。7 菌落計數(shù)及報告方法7.1首先選取平均菌落數(shù)在30 300 個之間的平皿，作為菌落總數(shù)測定的X圍。當只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此X圍時，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)(見表 1 中例 1)。專業(yè)資料整理WORD格式7.2 假

11、設有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在 30 300 定，假設其比值小于或等于 2，應報告其平均數(shù)，假設大于個之間，那么應求出兩菌落總數(shù)之比值來決 2 那么報告其中稀釋度較低的平皿的菌落專業(yè)資料整理WORD格式數(shù)(見表 1 中例 2 及例 3)。7.3 假設所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300 個，那么應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之 (見表 1 中例 4)。7.4假設所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30 個，那么應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之 (見表 1 例 5)。7.5假設所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30 300 個之間，其中一個稀釋度大于300個，而相鄰的另一稀釋度小于3

12、0 個時，那么以接近30 或 300 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表 1中例 6)。7.6假設所有的稀釋度均無菌生長，報告數(shù)為每g 或每 mL 小于 10CFU 。7.7菌落計數(shù)的報告，菌落數(shù)在10 以內(nèi)時，按實有數(shù)值報告之，大于100 時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應以四舍五入法計算。為了縮短數(shù)字后面零的個數(shù)，可用 10 的指數(shù)來表示 (見表 1 報告方式欄 )。在報告菌落數(shù)為“不可計時，應注明樣品的稀釋度。專業(yè)資料整理WORD格式表 1菌落計數(shù)結(jié)果及報告方式例 次不同稀釋度平均菌落數(shù)兩稀釋度菌落總數(shù)報告方式10-110-210-3菌數(shù)之比CFU/mLCFU/mL 或

13、 CFU/g或CFU/g411365164201640016000 或 1.6× 1022760295461.63800038000 或 3.8× 10432890271602.22710027000 或 2.7× 1044不可計 4650513513000510000 或 5.1× 105527115270270 或 2.7×1026不可計305123050031000 或 3.1× 1047000× 10 10 CFU：菌落形成單位。專業(yè)資料整理WORD格式三、糞大腸菌群Fecal Coliforms1X圍本標準規(guī)定了化

14、裝品中糞大腸菌群的檢驗方法。本標準適用于化裝品中糞大腸菌群的檢驗。2定義本標準采用以下定義糞大腸菌群 (Fecal coliforms) 系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在 44.5培養(yǎng)24h 48h 能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。該菌來自人和溫血動物糞便，是重要的衛(wèi)生指示菌。3 儀器3.1恒溫水浴箱或隔水式恒溫箱： 44± 0.5。3.2溫度計。3.3顯微鏡。3.4載玻片。3.5接種環(huán)。3.6電爐。3.7三角瓶。3.8試管。3.9小倒管。3.10pH 計或 pH 試紙。3.11高壓滅茵器。3.12刻度吸管： 10mL 、 2mL 、 1mL 。3.13平皿。4 培養(yǎng)基和試劑4.1

15、 雙倍乳糖膽鹽培養(yǎng)基成分：蛋白胨40g豬膽鹽10g乳糖10g0.4%溴甲酚紫水溶液5mL蒸餾水1000mL制法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH 到 7.4，參加0.4%溴甲酚紫水溶液5mL ，混勻，分裝試管 (每支試管中加一個小倒管)。 68.95kPa (10 lb)20min 滅菌。4.2 伊紅美蘭 (EMB) 瓊脂成分：蛋白胨10g乳糖10g磷酸氫二鉀2g專業(yè)資料整理WORD格式瓊脂20g2%伊紅水溶液20mL0.5%美藍水溶液13mL蒸餾水1000mL制法：先將瓊脂加到900mL 蒸餾水中，加熱溶解，然后參加磷酸氫二鉀、蛋白胨，混勻，使之溶解。 再以蒸餾水補足至1000mL

16、 。校正 pH 值為 7.27.4，分裝于三角瓶內(nèi)， 103.43kPa(15lb)15min 高壓滅菌備用。臨用時參加乳糖并加熱融化瓊脂。冷至60左右無菌操作參加滅菌的伊紅美藍溶液，搖勻。傾注平皿備用。4.3 蛋白胨水 (作靛基質(zhì)試驗用 )成分：蛋白胨 (或胰蛋白胨 )20g氯化鈉5g蒸餾水1000mL專業(yè)資料整理WORD格式制法：將上述成分加熱融化，調(diào)pH值為7.0 7.2，分裝小試管，103.43kPa(15 lb)15min專業(yè)資料整理WORD格式高壓滅菌。4.4靛基質(zhì)試劑專業(yè)資料整理WORD格式柯凡克試劑：將5g 對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后緩慢參加濃鹽酸25mL 。專

17、業(yè)資料整理WORD格式試驗方法：接種細菌于蛋白胨水中，于44± 0.5培養(yǎng)24h。沿管壁加柯凡克試劑0.3專業(yè)資料整理WORD格式0.5mL ，輕搖試管。陽性者于試劑層顯深玫瑰紅色。注：蛋白胨應含有豐富的色氨酸，每批蛋白胨買來后，應先用菌種鑒定前方可使用。4.5革蘭氏染色液：4.5.1染液制備4.5.1.1結(jié)晶紫染色液：結(jié)晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸銨水溶液80mL將結(jié)晶紫溶于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。4.5.1.2革蘭氏碘液：碘1g碘化鉀2g蒸餾水加至300mL將碘與碘化鉀先進展混合，參加蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300mL 。4.5.1.3脫色液：

18、 95%乙醇。4.5.1.4復染液：a.沙黃復染液：沙黃0.25g95%乙醇10mL蒸餾水90mL將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。b. 稀石碳酸復紅液：稱取堿性復紅10g，研細，加 95%乙醇 100mL ，放置過夜，濾紙過濾。取該液10mL ，加 5%石碳酸水溶液90mL 混合，即為石碳酸復紅液。再取此液10mL 加水 90mL ，即為稀石碳酸復紅液。專業(yè)資料整理WORD格式4.5.2染色法4.5.2.1將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，水洗。4.5.2.2滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。4.5.2.3滴加 95%乙醇脫色，約30s，或?qū)⒁掖嫉螡M整個涂片，立即傾去，

19、再用乙醇滴滿整個涂片，脫色10s，水洗。4.5.2.4滴加復染液，復染1min，水洗，待干，鏡檢。4.5.3染色結(jié)果革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。注：如用 1:10 稀釋石碳酸復紅染色液作復染，復染時間僅需10s。5 操作步驟5.1取 10mL 1:10 稀釋的檢液，加到 10mL 雙倍濃度的乳糖膽鹽培養(yǎng)基中，置44± 0.5培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 48h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，那么報告為糞大腸菌群陰性。5.2如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，劃線接種到伊紅美藍瓊脂平板上，置37培養(yǎng) 18 h 24 h。同時取該培養(yǎng)液 1 2 滴接種到蛋白胨水中，置44± 0.5培養(yǎng) 24h。經(jīng)培養(yǎng)后，在上

20、述平板上觀察有無典型菌落生長。糞大腸菌群在伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基上的典型菌落呈深紫黑色，圓形，邊緣整齊，外表光滑濕潤，常具有金屬光澤。也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紫色，中心較深的菌落，亦常為糞大腸菌群，應注意挑選。5.3挑取上述可疑菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢。5.4在蛋白胨水培養(yǎng)液中，參加靛基質(zhì)試劑約0.5mL ，觀察靛基質(zhì)反響。陽性者液面呈玫瑰紅色；陰性反響液面呈試劑本色。6 檢驗結(jié)果報告根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗陽性，那么可報告被檢樣品中檢出糞大腸菌群。專業(yè)資料整理WORD格式四、綠膿桿菌Pseudomonas Aeruginos

21、a1 X圍本標準規(guī)定了化裝品中綠膿桿菌的檢驗方法。本標準適用于化裝品中綠膿桿菌的檢驗。2 定義本標準采用以下定義。綠膿桿菌 (Pseudomonas aeruginosa)屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，復原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42條件下能生長。該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。3 儀器3.1恒溫培養(yǎng)箱： 37、 42。3.2三角瓶。3.3試管。3.4平皿。3.5刻度吸管： 10mL 、 2mL 、 1mL 。3.6顯微鏡。3.7載玻片。3.8接種針、接種環(huán)。3.9電爐。3.10高壓滅茵器。4 培養(yǎng)基和試劑4.1SCDLP 液體培養(yǎng)基

22、見總那么中 3.2。4.2十六烷基三甲基溴化銨培養(yǎng)基成分：牛肉膏3g蛋白胨10g氯化鈉5g十六烷基三甲基溴化銨0.3g瓊脂20g蒸餾水1000mL制法：除瓊脂外，將上述成分混合加熱溶解，調(diào)pH 為 7.4 7.6，參加瓊脂， 68.95kPa (10lb)20min 滅菌后，制成平板備用。4.3乙酰胺培養(yǎng)基成分：乙酰胺10g氯化鈉5g無水磷酸氫二鉀1.39g專業(yè)資料整理WORD格式無水磷酸二氫鉀0.73g硫酸鎂 (MgSO 4· 7H 2O)0.5g酚紅0.012g1.2%溶液 1mL 瓊脂20g蒸餾水1000mL制法：除瓊脂和酚紅外，將其它成分加到蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH 為 7

23、.2，參加瓊脂、酚紅， 103.43kPa(15 lb)20min 高壓滅菌后，制成平板備用。4.4綠膿菌素測定用培養(yǎng)基成分： 蛋白胨20g氯化鎂1.4g硫酸鉀10g瓊脂18g甘油 (化學純 )10g蒸餾水1000mL制法：將蛋白胨、氯化鎂和硫酸鉀加到蒸餾水中，加溫使其溶解，調(diào)pH 至 7.4，參加瓊脂和甘油，加熱溶解，分裝于試管內(nèi)，68.95kPa(10 lb)20min 高壓滅菌后，制成斜面?zhèn)溆谩?.5明膠培養(yǎng)基成分： 牛肉膏3g蛋白胨5g明膠120g蒸餾水1000mL制法：取各成分加到蒸餾水中浸泡20min ，隨時攪拌加溫使之溶解，調(diào)pH 至 7.4，分裝于試管內(nèi)，經(jīng) 68.95kPa(

24、10 lb)20min 滅菌后，直立制成高層備用。4.6硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基成分： 蛋白胨10g酵母浸膏3g硝酸鉀2g亞硝酸鈉0.5g蒸餾水1000mL制法：將蛋白胨和酵母浸膏加到蒸餾水中，加熱使之溶解，調(diào)pH 為 7.2，煮沸過濾后補足液量，參加硝酸鉀和亞硝酸鈉， 溶解混勻， 分裝到加有小倒管的試管中， 68.95kPa(10 lb)20min 滅菌后備用。4.7 普通瓊脂斜面培養(yǎng)基成分： 蛋白胨10g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂15g蒸餾水1000mL制法：除瓊脂外，將其余成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH 為 7.27.4，參加瓊脂，加熱溶解，分裝試管， 103.43kPa(15 lb)20min高

25、壓滅菌后，制成斜面?zhèn)溆?。專業(yè)資料整理WORD格式5 操作步驟專業(yè)資料整理WORD格式5.1增菌培養(yǎng)：取 1:10 樣品稀釋液10mL 加到 90mL SCDLP 液體培養(yǎng)基中， 置 37培養(yǎng) 18h24h。如有綠膿桿菌生長，培養(yǎng)液外表多有一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍綠色。5.2 別離培養(yǎng)：從培養(yǎng)液的薄膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種在十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平板上，置 37培養(yǎng) 18h 24h。凡綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上，其菌落扁平無定型，向周邊擴散或略有蔓延，外表濕潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養(yǎng)基常擴散有水溶性色素，此培養(yǎng)基選擇性強，大腸艾希氏菌不能生長，革蘭氏陽性菌生長較差。在缺乏十六烷基三甲基溴

26、化銨培養(yǎng)基時也可用乙酰胺培養(yǎng)基進展別離，將菌液劃線接種于平板上，放37培養(yǎng)24h，綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其它菌不生長。5.3 染色鏡檢：挑取可疑的菌落，涂片，革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性者應進展氧化酶試驗。5.4氧化酶試驗：取一小塊干凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無菌玻璃棒挑取綠膿桿菌可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試液，在15s 30s之內(nèi)，出現(xiàn)粉紅色或紫紅色時，為氧化酶試驗陽性；假設培養(yǎng)物不變色，為氧化酶試驗陰性。專業(yè)資料整理WORD格式5.5綠膿菌素試驗：取可疑菌落2 3個，分別接種在綠膿菌素測定培

27、養(yǎng)基上，置37培養(yǎng)專業(yè)資料整理WORD格式24h，參加氯仿3mL 5mL ，充分振蕩使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解于氯仿液內(nèi)，待氯仿提取液呈藍色時， 用吸管將氯仿移到另一試管中并參加1mol/L 的鹽酸 1mL 左右，振蕩后，靜置片刻。專業(yè)資料整理WORD格式如上層鹽酸液內(nèi)出現(xiàn)粉紅色到紫紅色時為陽性，表示被檢物中有綠膿菌素存在。5.6硝酸鹽復原產(chǎn)氣試驗：挑取可疑的綠膿桿菌純培養(yǎng)物，接種在硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基中，置 37培養(yǎng) 24h，觀察結(jié)果。凡在硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)的小倒管中有氣體者，即為陽性，說明該菌能復原硝酸鹽，并將亞硝酸鹽分解產(chǎn)生氮氣。5.7 明膠液化試驗，取綠膿桿菌可疑菌落的純培養(yǎng)物，穿刺

28、接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)，置37培養(yǎng) 24h，取出放冰箱 10min 30min ，如仍呈溶解狀時即為明膠液化試驗陽性；如凝固不溶者為陰性。5.8 42生長試驗：挑取可疑的綠膿桿菌純培養(yǎng)物， 接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上， 放在 4142培養(yǎng)箱中，培養(yǎng) 24h 48h，綠膿桿菌能生長，為陽性，而近似的熒光假單胞菌那么不能生長。6 檢驗結(jié)果報告被檢樣品經(jīng)增菌別離培養(yǎng)后，在別離平板上有典型或可疑菌落生長，經(jīng)證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌；如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽復原產(chǎn)氣和 42生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。專業(yè)資料

29、整理WORD格式五、金黃色葡萄球菌Staphylococcus Aureus1 X圍本標準規(guī)定了化裝品中金黃金色葡萄球菌的檢驗方法。本標準適用于化裝品中金黃色葡萄球菌的檢驗。2 定義本標準采用以下定義金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血癥。3 儀器和設備3.1顯微鏡。3.2恒溫培養(yǎng)箱。3.3離心機。3.4刻度吸管：1mL 、 5mL 、 10mL 。3.5試管。3.6載玻片。3.7酒精燈。4 培養(yǎng)基和試劑4.1

30、SCDLP 液體培養(yǎng)基見總那么中3.2。4.2Baird Parker 氏培養(yǎng)基成分：胰蛋白胨10g牛肉膏5g酵母浸膏1g丙酮酸鈉10g甘氨酸12g氯化鋰 (LiCl 6H·2O)5g瓊脂20g蒸餾水950mLpH 7.0 ± 0.2增菌劑的配制： 30%卵黃鹽水 50mL 與除菌過濾的 1%亞碲酸鉀溶液 10mL 混合，保存于冰箱內(nèi)。制法： 將各成分加到蒸餾水中， 加熱煮沸完全溶解， 校正 pH。分裝每瓶 95mL ，103.43kPa高壓滅菌 15min 。臨用時加熱溶化瓊脂培養(yǎng)基，每 95mL 參加預熱至 50的卵黃亞碲酸鉀增菌專業(yè)資料整理WORD格式劑 5mL ，搖

31、勻后制成平板。培養(yǎng)基應是致密不透明的。使用前在冰箱貯存不得超過48h。4.3血瓊脂培養(yǎng)基成分： 營養(yǎng)瓊脂100mL脫纖維羊血 (或兔血 )10mL制法：將營養(yǎng)瓊脂加熱融化，待冷至50左右無菌操作參加脫纖維羊血，搖勻，制成平板，置冰箱內(nèi)備用。4.4甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基成分： 蛋白胨10g氯化鈉5g甘露醇10g牛肉膏5g0.2%麝香草酚藍溶液12mL蒸餾水1000mL制法： 將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加到蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH7.4，參加甘露醇和指示劑，混勻后分裝試管中，68.95kPa(10 lb) 20min 滅菌備用。4.5兔 (人 )血漿制備取 3.8% 檸檬酸鈉溶液， 103.43kPa(

32、15 lb) 30min 高壓滅菌， 1 份加兔 (人 )全血 4 份，混勻靜置； 2000rpm 3000 rpm 離心 3min 5min。血球下沉，取上面血漿。4.6無菌液體石蠟。5 操作步驟5.1 增菌：取 1:10 稀釋的樣品 10mL 接種到 90mL SCDLP 液體培養(yǎng)基中，置 37培養(yǎng)箱，培養(yǎng) 24h。專業(yè)資料整理WORD格式5.2 別離：自上述增菌培養(yǎng)液中，取養(yǎng)基也可劃線接種到血瓊脂平板，置1 2 接種環(huán)，劃線接種在Baird Parker 平板，如無此培37培養(yǎng) 24h 48h。在血瓊脂平板上菌落呈金黃色，大專業(yè)資料整理WORD格式而突起，圓形，不透明，外表光滑，周圍有溶

33、血圈。在Baird Parker平板上為圓形，光滑，凸專業(yè)資料整理WORD格式起，濕潤，直徑為 2mm 3mm ，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明帶。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的軟度。偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無混濁帶及透明帶。挑取單個菌落分純在血瓊脂平板上，置37培養(yǎng) 24h。5.3染色鏡檢：挑取分純菌落，涂片，進展革蘭氏染色，鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌，排列成葡萄狀，無芽胞，無夾膜，致病性葡萄球菌，菌體較小，直徑約為0.5m 1 m。5.4 甘露醇發(fā)酵試驗：取上述分純菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基液面上參加 2mm 3mm 的滅菌液體石蠟，置 37培養(yǎng) 24h，金黃色葡萄球菌應能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。專業(yè)資料整理WORD格式5.5血漿凝固酶試驗：吸取 1:4 新鮮血漿0.5mL ，放入滅菌小試管中，養(yǎng)物 0.5mL ?；靹颍?7恒溫箱或恒溫水浴中，每半小時觀察一次，為陽性。 同時以血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物及肉湯培養(yǎng)基各滅菌 1:4 血漿 0.5mL ，混勻，作為對照。參加待檢菌24h 肉湯培6h 之內(nèi)如呈現(xiàn)凝塊即0.5mL ，分別參加專業(yè)資料整