單衛(wèi)民凝血培訓(xùn)ppt課件

1、From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O出凝血根底知識(shí)培訓(xùn)出凝血根底知識(shí)培訓(xùn);概述概述 血液止血過(guò)程涉及到血管、血小板、凝固系統(tǒng)、抗凝系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)。此外還與機(jī)體本身的防護(hù)，如免疫應(yīng)對(duì)、細(xì)胞的吞噬作用、激肽生成過(guò)程有關(guān)。 簡(jiǎn)單的說(shuō)，當(dāng)血管破損，血小板聚集，凝血酶生成，交聯(lián)纖維蛋白在聚集血小板的根底上構(gòu)成，穩(wěn)定用于堵住傷口的塞子。繼而激活纖溶系統(tǒng)，溶解多余的纖維蛋白，防止構(gòu)成血栓栓塞，最終修復(fù)破損的血管，以維持血管的完好和通暢。From the desk of K .S .H OF

2、rom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;出凝血的過(guò)程出凝血的過(guò)程血小板RBC出血出血黏附黏附聚集聚集凝固反響凝固反響初級(jí)血栓二級(jí)血栓內(nèi)皮層血管內(nèi)皮受損纖維蛋白凝塊From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;出凝血的過(guò)程出凝血的過(guò)程凝血酶黏附和聚集纖維蛋白止血塊血小板的黏附和聚集0 min10 min5 min二級(jí)止血初級(jí)止血凝固From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .

3、S .H OFrom the desk of K .S .H O;Activated plateletsActivated plateletsResting plateletsResting platelets血小板的構(gòu)造血小板的構(gòu)造From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;血小板的生理功能血小板的生理功能 血小板是一個(gè)多功能的無(wú)核細(xì)胞，其主要生理作用是參與正常的血栓與止血。血小板的功能主要包括粘附(adhesion)、聚集(aggregation)、釋放(release)反響以

4、及其他凝血功能。此外，血小板還參與各種炎性、免疫反響及堅(jiān)持血管完好性的功能。血小板粘附：是指血小板粘著在受損血管內(nèi)皮膠原上的過(guò)程。這是血小板參與止血反響的第一步，此過(guò)程需求有vWF和血小板膜GPIb受體參與。血小板聚集：是指血小板之間相互粘附的過(guò)程。此過(guò)程需求有纖維蛋白原和血小板膜GPIIb/IIIa受體參與。血小板釋放:是指在誘導(dǎo)劑的作用下儲(chǔ)存在血小板內(nèi)的顆粒包括-顆粒、致密顆?；蛉苊阁w顆粒中的許多物質(zhì)釋放到血小板外的過(guò)程。From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;一期止血一期

5、止血 最先是由血管受損后引起血小板的的生理反響以阻止出血 機(jī)制 -血小板經(jīng)凝血酶等刺激而活化 -血小板經(jīng) GPIb 和 von Willebrand 因子 (VWF)之間的交互 作用黏附變形 -血小板顆粒物質(zhì)的釋放以補(bǔ)充更多血小板到受損部位 -血小板的聚集在GPIIb/IIIa和纖維蛋白原交互作用下以構(gòu)成 最初的栓子 引發(fā)二期止血 (凝固蛋白)From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;一期止血的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)一期止血的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)出血時(shí)間 - Assesses all components

6、 of Virchows triad -體內(nèi)測(cè)試 直接在患者身上執(zhí)行 -運(yùn)用替代的工具進(jìn)展“體外出血時(shí)間的檢測(cè)血小板聚集 -檢測(cè)血小板聚集的才干，經(jīng)過(guò)體外添加不同的誘導(dǎo)劑 -主要用于評(píng)價(jià)血小板糖蛋白 IIb/IIIa 受體的功能 Von Willebrand 因子 (VWF) 測(cè)試 -測(cè)定VWF的數(shù)量和功能, 協(xié)同血小板在受損部位發(fā)揚(yáng)黏附的作用 -評(píng)價(jià)VWF 與血小板糖蛋白 Ib 受體交互作用的功能From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;二期止血二期止血血液凝固過(guò)程機(jī)制 -凝血

7、因子相繼激活構(gòu)成凝血酶 -凝血酶使纖維蛋白原構(gòu)成纖維蛋白 -纖維蛋白加固在一級(jí)止血中構(gòu)成的血小板栓子成為更穩(wěn)定的 血栓塊 (二級(jí)止血栓子) 防止受損部位進(jìn)一步的血液流失From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O; 血液凝固簡(jiǎn)稱(chēng)凝血，是血液由液體形狀轉(zhuǎn)變?yōu)槟z 形狀的過(guò)程。此過(guò)程是由多種酶和輔助因子參與的復(fù) 雜過(guò)程。其中心是生成凝血酶，后者將纖維蛋白原轉(zhuǎn) 變成纖維蛋白。 當(dāng)凝血活動(dòng)到達(dá)止血目的時(shí)，機(jī)體迅速啟動(dòng)抗凝系 統(tǒng)阻止凝血繼續(xù)下去，防止呵斥血管阻塞。 凝血和抗凝兩者間的動(dòng)態(tài)平衡是

8、正常機(jī)體維持體內(nèi) 血液液體流動(dòng)形狀和防止血液?jiǎn)适У年P(guān)鍵。 凝血機(jī)制凝血機(jī)制From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;血液中的凝血因子血液中的凝血因子From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O; 凝血因子l 組織因子組織因子(TF)：凝血過(guò)程中的啟動(dòng)因子。血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)：凝血過(guò)程中的啟動(dòng)因子。血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng) l 膠質(zhì)、血管平滑肌和上皮細(xì)胞都能表達(dá)膠質(zhì)、血管平滑肌

9、和上皮細(xì)胞都能表達(dá)TF。因此能在血管和器。因此能在血管和器l 官外圍構(gòu)成維護(hù)，只需血液漏出血管，官外圍構(gòu)成維護(hù)，只需血液漏出血管，TF就會(huì)啟動(dòng)凝血過(guò)程。就會(huì)啟動(dòng)凝血過(guò)程。lVII因子因子(F-VII)：在血管損傷時(shí)，：在血管損傷時(shí)，VII因子與因子與TF結(jié)合啟動(dòng)凝血過(guò)程。結(jié)合啟動(dòng)凝血過(guò)程。l 也許是由于在血漿中沒(méi)有有效的抑制物中和游離的也許是由于在血漿中沒(méi)有有效的抑制物中和游離的F-VIIa，所，所l 以近些年來(lái)，基因重組的以近些年來(lái)，基因重組的F-VIIa被導(dǎo)入臨床作為一種治療手段，被導(dǎo)入臨床作為一種治療手段，l 1，用于血友病治療，血友病患者有針對(duì)外源性，用于血友病治療，血友病患者有針對(duì)外

10、源性F-VIII的抑制物的抑制物l 時(shí)；時(shí)；2，更為廣泛的出血問(wèn)題和普通外科干涉治療。，更為廣泛的出血問(wèn)題和普通外科干涉治療。l凝血酶原凝血酶原(F-II)：凝血酶原被：凝血酶原被F-X-F-V復(fù)合物激活后，可以激活很復(fù)合物激活后，可以激活很l 多蛋白酶。包括：促凝因子多蛋白酶。包括：促凝因子F-V、F-VIII、F-XI，抗凝因子，抗凝因子PC，一，一l 系列跨膜激活蛋白酶受體系列跨膜激活蛋白酶受體PARs，凝血酶激活纖溶抑制物，凝血酶激活纖溶抑制物TAFI。; 凝血因子lVIII因子因子(F-VIII)：VIII因子是因子是F-IXa激活激活F-X的必要輔助因子，由凝血的必要輔助因子，由凝

11、血l 酶或酶或F-Xa激活，由激活，由APC滅活，缺乏滅活，缺乏VIII因子導(dǎo)致血友病因子導(dǎo)致血友病A。lIX因子因子(F-IX)：缺乏：缺乏IX因子會(huì)導(dǎo)致血友病因子會(huì)導(dǎo)致血友病B，由于，由于F-IX的主要功的主要功 l 能是參與能是參與F-X的激活，的激活，TF-F-VIIa或或F-XIa能激活能激活F-IX。lXI因子因子(F-XI)：XI因子由凝血酶激活，以前以為因子由凝血酶激活，以前以為XI因子由接觸因子由接觸l 因子因子X(jué)II因子激活。但如今的觀念是因子激活。但如今的觀念是XI因子由凝血酶反響激活，因子由凝血酶反響激活， l 繼而激活繼而激活I(lǐng)X因子、因子、X因子，從而大量激活凝血酶

12、，使凝血過(guò)程進(jìn)因子，從而大量激活凝血酶，使凝血過(guò)程進(jìn) l 入放大期。入放大期。l血管性血友病因子血管性血友病因子(vWF)：vWF由內(nèi)皮細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板合由內(nèi)皮細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板合l 成，并在各種刺激成，并在各種刺激(包括凝血酶的刺激包括凝血酶的刺激)下釋放入血。血液循環(huán)中下釋放入血。血液循環(huán)中l(wèi) 也有一定量的也有一定量的vWF(由內(nèi)皮細(xì)胞釋放由內(nèi)皮細(xì)胞釋放)。vWF的兩個(gè)主要功能：的兩個(gè)主要功能：l 1，作為，作為VIII 因子的載體并穩(wěn)定因子的載體并穩(wěn)定VIII 因子；因子；2，誘導(dǎo)血小板，誘導(dǎo)血小板GPIbl 粘附在膠原纖維上。粘附在膠原纖維上。;經(jīng)典的凝血機(jī)制經(jīng)典的凝血機(jī)制;

13、血凝瀑布學(xué)說(shuō)血凝瀑布學(xué)說(shuō); 當(dāng)缺乏F-XII、激肽釋放酶原、高分子量激肽原時(shí)，體外實(shí)驗(yàn)會(huì)顯示凝血時(shí)間延伸，但機(jī)體為什么沒(méi)有出現(xiàn)出血傾向？ 為什么缺乏F-VIII或F-IX時(shí)，機(jī)領(lǐng)會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的出血，而外源凝血途徑不能阻止出血？ 為什么缺乏F-XI引起的出血程度要比F-VIII或F-IX因子缺乏輕得多？體外實(shí)驗(yàn)時(shí)，為什么凝血酶迸發(fā)性生成前有一個(gè)延緩期？From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O經(jīng)典實(shí)際產(chǎn)生的幾個(gè)問(wèn)題經(jīng)典實(shí)際產(chǎn)生的幾個(gè)問(wèn)題;組織因子途經(jīng)組織因子途經(jīng) 血管血管損傷TFTF/

14、aaa凝血酶原凝血酶原aa凝血酶凝血酶纖維蛋白原纖維蛋白原纖維蛋白纖維蛋白XIXIaTFPI(-)Vaaa;u外源性的因子在組織因子的結(jié)合下既可激活因子，又可激活內(nèi)源性的第因子，從而突破了內(nèi)源與外源的界限。u因子缺乏時(shí)并不引起出血，這闡明第因子并不一定只被因子激活，現(xiàn)已證明本身具有本身激活作用。u凝血酶因子也可激活因子，原來(lái)以為只需因子才干激活因子。uTF被激活并與因子結(jié)合后會(huì)被組織因子途徑抑制物TFPI所抑制；后者已成為一種新型抗凝劑。是組織因子、 、因子的天然抑制物。傳統(tǒng)的凝血途徑的修正傳統(tǒng)的凝血途徑的修正; 組織因子結(jié)合FVIIa 在創(chuàng)傷處啟動(dòng)凝固 少量構(gòu)成的凝血酶激活血小板 凝血因子在

15、血小板外表構(gòu)成復(fù)合物 大量構(gòu)成的凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白 纖維蛋白加固了血小板栓子 (一期止血) 并使止凝血完成更新的二期止血更新的二期止血From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;內(nèi)源途徑XIIXIIXVIII共同XVII途徑APTT內(nèi)源+共同纖維蛋白原纖維蛋白凝塊VII外源途徑組織因子PT外源+共同F(xiàn)rom th

16、e desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查T(mén)TFbg;p 血液搜集于枸櫞酸鈉抗凝的試 p 管中p 由于枸櫞酸鈉結(jié)合了鈣使血液p 堅(jiān)持流動(dòng)，可用于檢測(cè)凝固功p 能。p 將試管經(jīng)過(guò)離心分別血漿層 (白細(xì)胞 & 血小板) 和紅細(xì)胞p 用于測(cè)試的血漿p - 血漿含有纖維蛋白原p - 血清不含有纖維蛋白原p 血漿是“乏血小板的 血小板層留p 在淡黃色層里p 血漿淡黃色層紅細(xì)胞層樣樣 本本From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .

17、S .H OFrom the desk of K .S .H O;PT的的檢測(cè)檢測(cè)原理原理 in Blood in PlasmaPT 試劑試劑FibrinIIIExtrinsic System丈量凝血丈量凝血時(shí)間時(shí)間without組織組織因子因子Calcium (Ca2+)without正常范正常范圍圍10-14 secIX37癈癈Ca2+, PLCa2+, PLXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIVIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIVIIIIIXVIIIBloodSamplingTrisodiumCitrateFrom the desk of K .S

18、 .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;演算纖維蛋白原演算纖維蛋白原DODDOD1DOD2DOD3500mg/dl250mg/dl125mg/dlDOD3DOD2DOD10125 250500Mg/dlFIB時(shí)間DODFIBFIBFIBDOD x FIBFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;PTPT單位的表達(dá)方式單位的表達(dá)方式1、以秒(s)表示:參考值為11-14s。待測(cè)者的結(jié)果超越正常對(duì)照3s以上有

19、臨床意義。2、凝血酶原時(shí)間比值(PTR)：待測(cè)血漿的凝血酶原時(shí)間與正常血漿凝血酶原時(shí)間的比值。參考值為0.82-1.15。3.國(guó)際規(guī)范化比值(INR):即PTRISI。參考值為0.8-1.5。ISI為國(guó)際敏感度指數(shù)。指數(shù)越大，組織凝血活酶的敏感性越低。4.活性%From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;APTT的的檢測(cè)檢測(cè)原

20、理原理 in Blood in PlasmawithoutwithoutwithoutIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIAPTT ReagentActivatorPLIntrinsic SystemMeasure Clotting TimeEllagic acid, silica etc.Calcium (Ca2+)Normal Range20-40 secCaCl2IVPhospholipidFibrin37癈癈XIIIXXIVIIIXVIIICa2+, PLCa2+, PLBloodSamplingTrisodi

21、umCitrateFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;p 假設(shè)僅 APTT 延伸，最能夠的缺乏 是 Factors XII, XI, IX 或 VIIIp 假設(shè)僅 PT 延伸，最能夠是 Factor VII 缺乏 p 當(dāng)兩種初篩實(shí)驗(yàn)均延伸時(shí)，缺乏 的是共同途徑的 Factors X, V, II和 I.凝血疾病的篩查凝

22、血疾病的篩查APTTPTXIIXIIXVIIIXVIIIVIIFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;延伸的延伸的 PT / APTT PT / APTT PT PT延長(zhǎng)延長(zhǎng) APTTAPTT正常正常 PT PT正常正常 APTTAPTT延長(zhǎng)延長(zhǎng) PT PT延長(zhǎng)延長(zhǎng) APTTAPTT延長(zhǎng)延長(zhǎng)缺乏缺乏VIIVIIVIIIVIIIX XVitamin KVitamin KIXIXV VXIXIII IIXIIXIII I接觸因子接觸因子Vitamin KVitamin K延長(zhǎng)由于延

23、長(zhǎng)由于Warfarin Warfarin 治療治療肝素肝素Warfarin Warfarin 治療治療抑制物抑制物 ( (特異的或特異的或 LA)LA) 肝臟疾病肝臟疾病From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;Fbg的的檢測(cè)檢測(cè)原理原理 (Clauss方法方法) in Blood in PlasmawithoutwithoutwithoutIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIThrombin Reage

24、ntFibrinMeasureClotting TimeThrombinNormal Range180-360 mg/dLCalculated forFibrinogen concentration37癈癈IIIBloodSamplingTrisodiumCitrateFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O;From the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H OFrom the desk of K .S .H O; in Blo

25、od in PlasmawithoutwithoutwithoutIXXIIIXVIIIVIIIIIIIIIXXIIXIXVIIVIVIIIIThrombin ReagentFibrinThrombin37癈癈IIIBloodSamplingTrisodiumCitrate凝血酶時(shí)間凝血酶時(shí)間(TT)(TT)測(cè)定測(cè)定Measure Clotting TimeNormal Range16-18 sec凝血酶時(shí)間 (TT) 評(píng)價(jià)血漿中纖維蛋白原的功能 TT 凝固時(shí)間延伸 - HEPARIN - 直接凝血酶抑制劑 - 低纖維蛋白原血癥 - 纖維蛋白原構(gòu)造異常 - 纖維蛋白降解產(chǎn)物升高;凝固與抗凝凝固

26、與抗凝: : 一種平衡的行為一種平衡的行為產(chǎn)生凝血酶抑制凝血酶構(gòu)成From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;凝固抑制凝固抑制外源途徑XII組織因子纖維蛋白原纖維蛋白凝塊內(nèi)源途徑XIIXVIIIXIIVII抗凝血酶蛋白 C 系統(tǒng)V;抗凝系統(tǒng)抗凝系統(tǒng)IIIIIIIVVVIIVIIIIXXXITFPIPSPCAT-IIIPLAPAXIIIFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;抑制

27、物抑制物p 天然抑制物p - 蛋白 C (活化的) 和蛋白 Sp 抑制凝血因子 FVIIIa 和 FVap - 抗凝血酶(AT)p 抑制 FXIa, FIXa, FXa, FVIIa/TF, 和凝血酶 (IIa)p 病理抑制物p - 獲得或自體免疫抗體對(duì)應(yīng)特異性凝固因子p 藥物抑制劑 p - 肝素和低分子量肝素p - Warfarinp - 直接凝血酶抑制劑From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;抗凝血酶抗凝血酶(AT)(AT) 抗凝血酶(antithrombin，AT )由肝臟、血

28、管內(nèi)皮 細(xì)胞、巨核細(xì)胞合成，是依賴(lài)肝素的絲氨酸蛋白酶抑 制劑，是人體內(nèi)主要的血漿抗凝物質(zhì)，尤其對(duì)凝血酶 的滅活才干占一切抗凝蛋白的70%80%。 AT與絲氨酸蛋白酶作用的活性位點(diǎn)位Arg393, ser394處,蛋白酶攻擊該鍵使其裂解并引起AT變構(gòu)， 從而構(gòu)成AT與酶1：1復(fù)合物,這種共價(jià)結(jié)合是不可逆 的,肝素作用于AT的賴(lài)氨酸殘基從而大大加強(qiáng)AT的抗 凝酶活性2000倍以上。From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;肝素和抗凝血酶的抑酶作用肝素和抗凝血酶的抑酶作用Antithromb

29、in ThrombinFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OHeparin; Heparin 蛋白蛋白C C系統(tǒng)是人體內(nèi)另一重要的抗凝系統(tǒng)，它是經(jīng)過(guò)一組蛋系統(tǒng)是人體內(nèi)另一重要的抗凝系統(tǒng)，它是經(jīng)過(guò)一組蛋 白的相互作用，最終使因子白的相互作用，最終使因子V V和和滅活，從而起到抗凝作用。滅活，從而起到抗凝作用。 蛋白蛋白C C系統(tǒng)除蛋白系統(tǒng)除蛋白C Cprotein Cprotein C，PCPC外，還包括：外，還包括： 蛋白蛋白S Sprotein Sprotein S，PSPS、 血

30、栓調(diào)理蛋白血栓調(diào)理蛋白thrombomodulinthrombomodulin，TMTM、 活化蛋白活化蛋白C C抑制物抑制物(activated protein inhibitor(activated protein inhibitor APCI) APCI) 內(nèi)皮細(xì)胞蛋白內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C C受體受體endothelial protein C receptorendothelial protein C receptor， EPCR EPCR。 蛋白蛋白C C系統(tǒng)系統(tǒng)From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk o

31、f K .S.H O;蛋白蛋白C C系統(tǒng)系統(tǒng) PC是由肝細(xì)胞合成的依賴(lài)維生素K的糖蛋白，是PC抗凝系統(tǒng)中的中心物質(zhì)。 在血漿中PC為無(wú)活性的絲氨酸蛋白酶原，它必需轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂薪z氨酸蛋白酶活性的活性蛋白C，才干發(fā)揚(yáng)抗凝作用，凝血酶-TM復(fù)合物是其生理激活劑。 PS也是由肝細(xì)胞合成的依賴(lài)維生素K的蛋白質(zhì)，但不具有蛋白酶活性，在血漿中以游離方式和與4b結(jié)合的方式存在，發(fā)揚(yáng)抗凝輔助作用的是游離方式。 TM是一種單鏈糖蛋白，知TM存在于除腦血管外的一切血管內(nèi)皮細(xì)胞中。TM主要是與凝血酶結(jié)合成復(fù)合物，激活PC。From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H

32、OFrom the desk of K .S.H O;蛋白蛋白C C的抗凝途徑的抗凝途徑From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OBlood FlowThrombomodulinThrombinEPCRProtein CThrombinAPC損傷處下游的抗凝作用損傷處下游的抗凝作用Thrombus血管損傷處發(fā)生的血栓血管損傷處發(fā)生的血栓;蛋白蛋白C C的主要抗凝作用的主要抗凝作用Blood FlowVIIIaVaThrombusPSPSAPCAPCVaiVIIIaiFrom the de

33、sk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;抗凝血酶抗凝血酶(AT)(AT)檢測(cè)檢測(cè)抗凝血酶活性測(cè)定抗凝血酶活性測(cè)定( (發(fā)色底物法發(fā)色底物法) )原理：原理： 在待測(cè)血漿中參與過(guò)量的凝血酶，凝血酶與血漿中的在待測(cè)血漿中參與過(guò)量的凝血酶，凝血酶與血漿中的ATAT構(gòu)成構(gòu)成1:11:1的復(fù)合物，剩余的凝血酶作用于顯色肽，裂的復(fù)合物，剩余的凝血酶作用于顯色肽，裂解出顯色基團(tuán)，顯色程度與剩余凝血酶的量呈正相關(guān)，解出顯色基團(tuán)，顯色程度與剩余凝血酶的量呈正相關(guān)，而與血漿而與血漿AT:AgAT:Ag呈負(fù)相關(guān)。呈負(fù)相關(guān)。參考

34、值：參考值： 108.5 108.55.3%5.3%From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;抗凝血酶抗凝血酶(AT)(AT)檢測(cè)檢測(cè) AT:Ag AT:Ag含量測(cè)定含量測(cè)定(ELISA(ELISA法法) ) 原理：原理： 將抗將抗ATAT抗體包被在固相板，標(biāo)本中的抗體包被在固相板，標(biāo)本中的ATAT與固相的抗與固相的抗ATAT抗體相結(jié)合，再參與酶標(biāo)志的抗抗體相結(jié)合，再參與酶標(biāo)志的抗ATAT抗體，構(gòu)成抗體抗體，構(gòu)成抗體- -抗抗原原- -酶標(biāo)志抗體的復(fù)合物，參與顯色劑后，根據(jù)顯色的酶標(biāo)志

35、抗體的復(fù)合物，參與顯色劑后，根據(jù)顯色的深淺來(lái)判別標(biāo)本中深淺來(lái)判別標(biāo)本中ATAT的含量。的含量。 參考值：參考值： 290 29030.2mg/L30.2mg/LFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;抗凝血酶檢測(cè)的臨床意義抗凝血酶檢測(cè)的臨床意義 AT缺乏是發(fā)生靜脈血栓與肺栓塞的常見(jiàn)緣由之一，但與動(dòng) 脈血栓構(gòu)成關(guān)系不大。 一.遺傳性AT缺乏： 遺傳性AT缺乏是一種常染色體顯性遺傳性疾病，患病率約1/5000,發(fā)病多在19-25歲，患者常在手術(shù)、創(chuàng)傷、感染、妊娠 或產(chǎn)后發(fā)生靜脈血栓，并可

36、在多出反復(fù)發(fā)生血栓。此病可分為 兩型：1.交叉反響物(cross reaction material)陰性型(CRM，即抗原與活性均下降； 2. (CRM 型，即抗原正常，活性下降。 共同表現(xiàn)是對(duì)肝素的親和力降低，從而對(duì)凝血酶的滅活才干明顯減弱。From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O; 二二. .獲得性獲得性ATAT缺乏：缺乏： 1. 1.合成降低，主要見(jiàn)于肝硬化、重癥肝炎、肝合成降低，主要見(jiàn)于肝硬化、重癥肝炎、肝 癌晚期等。癌晚期等。 2. 2.喪失添加，見(jiàn)于腎病綜合征。喪失添加，

37、見(jiàn)于腎病綜合征。 3. 3.耗費(fèi)添加，見(jiàn)于血栓前期和血栓性疾病，如心腦血管疾病、耗費(fèi)添加，見(jiàn)于血栓前期和血栓性疾病，如心腦血管疾病、 DIC DIC、外科手術(shù)后、深靜脈血栓構(gòu)成、外科手術(shù)后、深靜脈血栓構(gòu)成 、肺梗死、妊高癥等。、肺梗死、妊高癥等。 三三.AT.AT程度增高：程度增高： 在血友病、口服抗凝藥物、運(yùn)用黃體酮類(lèi)藥物時(shí)，在血友病、口服抗凝藥物、運(yùn)用黃體酮類(lèi)藥物時(shí)，ATAT程度增高。程度增高。 From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;蛋白蛋白C C的檢測(cè)的檢測(cè) 蛋白蛋白C C活

38、性測(cè)定活性測(cè)定(PC:A,(PC:A,發(fā)色底物法發(fā)色底物法):): 原理：原理： 從蛇毒中提取的從蛇毒中提取的ProtacProtac作為作為PCPC的激活劑的激活劑, ,可特異性可特異性 激活激活PC,PC,生成的活性生成的活性PCPCAPCAPC作用于特異發(fā)色底物作用于特異發(fā)色底物Chromozym-APC ),Chromozym-APC ),并釋放出產(chǎn)色基團(tuán)對(duì)硝基苯胺并釋放出產(chǎn)色基團(tuán)對(duì)硝基苯胺, , 顏色的深淺與顏色的深淺與PC:APC:A的相對(duì)活性的相對(duì)活性% %呈正相關(guān)。呈正相關(guān)。 參考值：參考值： 100.24 100.2413.18%13.18%From the desk of

39、K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O; 蛋白蛋白C:AgC:Ag含量測(cè)定含量測(cè)定PC:Ag,PC:Ag,免疫火箭電泳法免疫火箭電泳法 原理：原理： 在電場(chǎng)的作用下，一定量的待測(cè)血漿含有在電場(chǎng)的作用下，一定量的待測(cè)血漿含有PCPC抗原抗原在含有抗人在含有抗人PCPC抗體的瓊脂糖凝膠中電泳，分散一定時(shí)間，抗體的瓊脂糖凝膠中電泳，分散一定時(shí)間，抗原與相應(yīng)抗體反響構(gòu)成不可見(jiàn)的沉淀。電泳后在抗原與相應(yīng)抗體反響構(gòu)成不可見(jiàn)的沉淀。電泳后在1%1%磷磷鉬酸溶液中顯色構(gòu)成有色的火箭免疫沉淀峰，該峰的高鉬酸溶液中顯色構(gòu)成有色的火箭免疫

40、沉淀峰，該峰的高度與度與PCPC抗原濃度呈正相關(guān)，由此計(jì)算抗原濃度呈正相關(guān)，由此計(jì)算PC:AgPC:Ag的含量。的含量。 參考值：參考值： 102.5 102.520.1%20.1%From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;蛋白蛋白C C檢測(cè)的臨床意義檢測(cè)的臨床意義 一一. .遺傳性遺傳性PCPC缺乏：主要見(jiàn)于反復(fù)不明緣由的血缺乏：主要見(jiàn)于反復(fù)不明緣由的血 栓構(gòu)成。栓構(gòu)成。 二二. .獲得性獲得性PCPC缺乏：常見(jiàn)于缺乏：常見(jiàn)于DICDIC、肝功能不全、大、肝功能不全、大 手術(shù)后、長(zhǎng)期

41、制動(dòng)、口服抗凝劑患者。手術(shù)后、長(zhǎng)期制動(dòng)、口服抗凝劑患者。 三三.PC.PC抗原或活性增高：主要見(jiàn)于代償性添加如抗原或活性增高：主要見(jiàn)于代償性添加如 冠心病、糖尿病、腎病綜合征、妊娠后期等。冠心病、糖尿病、腎病綜合征、妊娠后期等。From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;蛋白蛋白C GlobalC Global實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法：檢測(cè)方法： 在待測(cè)血漿中參與蛇毒溫育，蛇毒可直接激活在待測(cè)血漿中參與蛇毒溫育，蛇毒可直接激活PC轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 變?yōu)樽優(yōu)锳PC。隨后參與。隨后參與APTT試劑以檢測(cè)依賴(lài)試劑

42、以檢測(cè)依賴(lài)PC活性的血漿凝活性的血漿凝固時(shí)間固時(shí)間Protein C activity-dependent clotting time，PCAT。假設(shè)待測(cè)血漿中的。假設(shè)待測(cè)血漿中的PC系統(tǒng)正常，那么參與系統(tǒng)正常，那么參與Ca2+后后 血漿凝固時(shí)間顯著延伸。為了防止諸多要素的影響血漿凝固時(shí)間顯著延伸。為了防止諸多要素的影響,本本 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了對(duì)照組，即在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以緩沖液替代實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了對(duì)照組，即在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以緩沖液替代PC 激活劑，血漿不依賴(lài)激活劑，血漿不依賴(lài)PC活性的血漿凝固時(shí)間活性的血漿凝固時(shí)間(PCAT/O) 其結(jié)果應(yīng)短于其結(jié)果應(yīng)短于60秒。秒。From the desk of K .S.H

43、 OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;參考值：參考值： PCAT為為85200秒，秒，PCAT/O為為3355秒秒n234，PCAT:PCAT/0 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)以正常化比率本實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)以正?；嚷?Normalized Ratio,NR) 來(lái)表示。來(lái)表示。 NR(PCAT:PCAT/0)樣本樣本CF CFSV/(PCAT:PCAT/0)正常人血漿正常人血漿 CF：校準(zhǔn)系數(shù)，：校準(zhǔn)系數(shù)，SV：試劑對(duì)正常人血漿的敏感值。：試劑對(duì)正常人血漿的敏感值。 NR:0.69-1.56From the desk of K .S.H OFrom

44、 the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;臨床意義：臨床意義： PCAT:PCAT/0小于小于0.8，闡明蛋白，闡明蛋白C系統(tǒng)有缺陷。系統(tǒng)有缺陷。 本實(shí)驗(yàn)多用于蛋白本實(shí)驗(yàn)多用于蛋白C、蛋白、蛋白S、FV Leiden突變和突變和 FII 20210 GA突變的檢測(cè)，起到蛋白突變的檢測(cè)，起到蛋白C系統(tǒng)挑選系統(tǒng)挑選 檢測(cè)作用。檢測(cè)作用。 本實(shí)驗(yàn)也有假陽(yáng)性，見(jiàn)于凝血因子本實(shí)驗(yàn)也有假陽(yáng)性，見(jiàn)于凝血因子V、VIII活性升活性升 高，口服抗凝劑和狼瘡抗凝物等。高，口服抗凝劑和狼瘡抗凝物等。 From the desk of K .S.H OFrom th

45、e desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;凝固與纖溶凝固與纖溶: : 一種精細(xì)的平衡一種精細(xì)的平衡構(gòu)成血栓溶解血栓產(chǎn)生凝血酶產(chǎn)生凝血酶產(chǎn)生纖溶酶產(chǎn)生纖溶酶From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;纖溶的降解產(chǎn)物纖溶的降解產(chǎn)物纖溶酶纖溶酶纖維蛋白原纖維蛋白原凝血酶凝血酶纖溶酶纖溶酶纖維蛋白纖維蛋白纖維蛋白原纖維蛋白原降解產(chǎn)物降解產(chǎn)物FibrinogenolysisFibrinogenolysisprimaryprimaryactivation

46、activation纖維蛋白纖維蛋白降解產(chǎn)物降解產(chǎn)物FibrinolysisFibrinolysissecondarysecondaryactivationactivationFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;纖維蛋白纖維蛋白( (原原) )的降解的降解纖維蛋白原纖維蛋白原碎片 XDYEDDEE纖維蛋白單體纖維蛋白聚合體D-dimerFXIIIFXIIIa纖維蛋白凝塊DDDDFPBFPA & B纖溶酶EEDDDD凝血酶 DFXIIIaFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O;纖維蛋白降解產(chǎn)物纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP)(FDP)的測(cè)定的測(cè)定From the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H OFrom the desk of K .S.H O免疫比濁法免疫比濁法 原理：原理： 在待測(cè)血漿中參與包被了單克隆抗體的聚苯乙烯顆在待測(cè)血漿中參與包被了單克隆抗體的聚苯乙烯顆粒，此抗粒，此抗 體