臨床專用生化分析儀分析技術(shù)

1、第七章 臨床專用生化分析儀分析技術(shù)教學(xué)要求和目標(biāo)v掌握 各分析技術(shù)的基本原理和分析方法v熟悉 各分析技術(shù)儀的結(jié)構(gòu)組成特點，儀器的維護保養(yǎng)，質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用v了解 各分析技術(shù)儀的分類第一節(jié) 濁度自動化分析技術(shù)一、濁度分析的基本原理v在一定條件下，可溶性抗原與抗體在液相中特異結(jié)合，形成有一定大小的抗原顆粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度v當(dāng)光線通過介質(zhì)中的復(fù)合物顆粒時吸收、透射、散射和折射v通過測量透射光或散射光信號強弱被測物的量。v濁度分析方法的分類v檢測器的位置及接收光信號的性質(zhì)分v透射免疫濁度法（turbidimetry immunoassayv散射免疫濁度法（nephelometry immunoas

2、sayv測定方式分：v終點濁度法與速率濁度法v濁度形成原理分：v沉淀反應(yīng)濁度法與膠乳凝集比濁（粒子增強免疫濁度法）v終點散射濁度法v檢測反應(yīng)終點與起始點之間信號變化的方法v速率散射濁度法v速率是指在單位時間內(nèi)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)形成復(fù)合物的量。是在抗原與抗體反應(yīng)的最高峰測定其復(fù)合物形成的量，該峰值的高低與抗原的量成正比。v粒子增強免疫濁度法v選擇大小適中、均勻一致的膠乳顆粒吸附或交聯(lián)抗體；當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時，則發(fā)生聚集。單個膠乳顆粒在入射光波長之內(nèi)，光線可透過。當(dāng)兩個或更多膠乳顆粒凝聚時，透過光減少，光減少的程度與膠乳凝集量成正比。v靈敏感度較高。二、濁度分析儀的分類和基本結(jié)構(gòu)v自動生化分析儀v散射

3、濁度分析儀v應(yīng)用較為普遍的有固定時間散射分析儀、速率散射分析儀和雙光路自動免疫濁度分析儀自動散射濁度分析儀的組成v分析系統(tǒng)：用于加樣、稀釋、保溫和測試等。 包括散射測濁儀、加液系統(tǒng)、試劑轉(zhuǎn)盤、樣品轉(zhuǎn)盤、卡片閱讀器等v計算機系統(tǒng)：用于輸入病人數(shù)據(jù)、選擇程序菜單、計算參考曲線和儲存測試結(jié)果散射濁度分析儀光路示意圖三、濁度分析儀的保養(yǎng)v常規(guī)保養(yǎng)v日保養(yǎng)v關(guān)機前沖洗管道，以防止管道阻塞v開機前應(yīng)檢查注射器，防止漏液v檢查D、B、A、W液面高度v光路校正v周保養(yǎng)v更換流動比色杯和小磁棒v清潔探針的外部v檢查蠕動泵和鉗制閥控制著管路中液體的流動情況v月保養(yǎng)v更換注射器插桿頂端v空氣過濾網(wǎng)沖洗v疏通標(biāo)本和抗

4、體探針的內(nèi)部v半年保養(yǎng)v更換管道v機械潤滑四、濁度分析的質(zhì)量控制（一）抗原過剩校正 檢測方法：v連續(xù)監(jiān)測抗原抗體反應(yīng)曲線，呈現(xiàn)異常v追加抗體，濁度繼續(xù)增大v標(biāo)本兩種稀釋度測定，濃度高的濁度反而低（二）減少偽濁度 偽濁度： 除待測抗原抗體復(fù)合物產(chǎn)生的濁度外，其它可引起透射光或散射光變化的濁度都稱為偽濁度 減少偽濁度的方法：采用新鮮、合格標(biāo)本保持比色杯和稀釋杯清潔使用合格的抗體試劑嚴(yán)格控制增濁劑的濃度（三）選擇合適的入射光波長 入射光波長的選擇原則： 除了抗原抗體免疫復(fù)合物外，反應(yīng)體系中的其他成分對入射光的干擾應(yīng)為最小，因為其他成分吸收了部分入射光，透射比濁法測定結(jié)果將使抗原濃度偏高，而散射比濁法

5、測定將使抗原濃度偏低。（四）儀器校正 選擇合適的校準(zhǔn)品 校準(zhǔn)曲線的繪制 校準(zhǔn)曲線的形狀取決于抗血清和促聚劑的濃度的選擇，也與免疫濁度法類型、校正方法及校準(zhǔn)品的質(zhì)量有關(guān)。 多推薦5點或6點定標(biāo)。 適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)方法進行曲線擬合五、特定蛋白濁度分析的臨床應(yīng)用特定蛋白臨床常規(guī)項目免疫功能監(jiān)測免疫球蛋白：IgG、IgM、IgA、 C3、C4臨床意義：IgG、IgA、IgM檢測有助于了解機體抗感染能力，有助于疾病的正確診斷和有效治療。在免疫復(fù)合物疾病中，C3、 C4檢測可以了解其消耗程度。適應(yīng)癥：免疫力低，反復(fù)感染病人； 自身免疫性疾病；多發(fā)性骨髓瘤；慢性肝??；非何杰金氏淋巴瘤；白血??；良性單克隆免疫球蛋白

6、?。幌忍煨曰颢@得性低免疫球蛋白血癥；對白、球蛋白比例異常者的隨訪術(shù)后感染、移植排斥反應(yīng)第二節(jié) 電解質(zhì)自動化分析技術(shù)一、電解質(zhì)分析的原理和方法離子選擇性電極（ion selective electrodeelectrode，ISE）是一類用特殊敏感膜制成，對溶液中某種特定離子具有選擇性響應(yīng)的電化學(xué)傳感器。常用于測量離子的活度或濃度。ISE基 本結(jié)構(gòu)通常由電極管、內(nèi)電極、電極內(nèi)充溶液和電極膜（或稱敏感膜）四個部分組成。電極電位產(chǎn)生基于膜材料與溶液界面發(fā)生的離子交換反應(yīng)當(dāng)電極置于溶液中時，由于離子交換和擴散作用，改變了二相中原有的電荷分布，因而形成雙電層，其間產(chǎn)生一定的電位差即膜電位ISE的電位與溶

7、液中特定離子活度的對數(shù)呈線性關(guān)系，即符合Nernst方程3. 電極電位測量ISE的E ISE 值不能直接測定必須將ISE與參比電極共同浸入待測樣品中組成一個原電池，通過測量E電池 來測定E ISE 值。在一定條件下，原電池的電動勢與被測離子活度的對數(shù)呈線性關(guān)系。（二） ISE 電位分析方法標(biāo)準(zhǔn)比較法（或直讀法）：指在pH計或離子計上直接讀出數(shù)值的方法，適用于少量樣本的分析標(biāo)準(zhǔn)曲線法：適用于大批量的試樣分析標(biāo)準(zhǔn)加入法：當(dāng)待測溶液組分較復(fù)雜，很難控制相同的離子強度時，選用標(biāo)準(zhǔn)加入法（二） ISE 樣本測定方式直接法：指樣本不經(jīng)稀釋直接測量離子活度。全血測定，迅速方便、結(jié)果準(zhǔn)確，不會因血清中水體積所

8、占比例改變而影響結(jié)果間接法：樣本經(jīng)緩沖液稀釋后由電極測量離子活度。樣品用量少，不易堵塞管道，電極壽命長直接法比間接法測定結(jié)果高35 ，因為血脂及蛋白質(zhì)等不包含有K 、Na 二、電解質(zhì)分析儀分類和結(jié)構(gòu)（一）電解質(zhì)分析儀的分類 半自動和全自動電解質(zhì)分析儀 濕式和干式電解質(zhì)分析儀 電解質(zhì)分析儀、含電解質(zhì)分析的血氣分析儀、含電解質(zhì)分析的自動生化分析儀離子選擇性電極組： 包括指示電極和參比電極通常采用流動式毛細(xì)管結(jié)構(gòu)，即在毛細(xì)管的側(cè)臂開多個小孔，孔里插入各種離子選擇性電極負(fù)壓吸樣多參數(shù)同時測量鈉、鉀、氯電極鈉電極：鉛硅酸鈉的玻璃膜電極鉀電極：纈氨霉素和聚氯乙烯（PVC）膜電極氯電極：銀氯化銀電極液路系統(tǒng)

9、常由標(biāo)本盤、溶液瓶、驅(qū)動電機、采樣針、電極系統(tǒng)、蠕動泵、三通閥、管道等組成。用于將樣品、定標(biāo)液和稀釋液等吸取和輸送至電極管道中，并完成電極、管道沖洗與廢液排除電路系統(tǒng)微處理器、信號放大及數(shù)據(jù)采集、蠕動泵和三通閥控制、輸入輸出、電源電路等五大模塊組成。共同完成對儀器各部件的動作控制，對電極mV值進行處理和計算，并顯示或打印輸出結(jié)果。程序控制系統(tǒng)包括儀器微處理系統(tǒng)、儀器設(shè)定與測定和自動清洗程序等。顯示操作系統(tǒng)鍵盤、液晶顯示、觸摸屏等三、電解質(zhì)分析儀的維護和保養(yǎng)每日維護檢查試劑量，清潔儀器表面及吸樣探針，棄去瓶中的廢液每周維護清洗液路，除去蛋白質(zhì)、脂類沉積和鹽類結(jié)晶。每月維護用酒精棉球清潔泵管和不銹

10、鋼轉(zhuǎn)軸，在泵管的彎處涂硅油或白色凡士林等潤滑劑。每季度進行MV值試驗檢查電極的MV值是否符合說明書要求。電極系統(tǒng)的保養(yǎng)定期更換電極膜和電極內(nèi)充液定期進行去蛋白清洗及電極的活化液路系統(tǒng)的保養(yǎng)保證液路無蛋白質(zhì)、脂類沉積和鹽類結(jié)晶每天關(guān)機前均進行管路的清洗沖洗完畢重新定標(biāo)v儀器的保養(yǎng)四、電解質(zhì)分析的質(zhì)量控制分析前質(zhì)量控制樣本的采集與處理采血器具干燥、清潔減少輸液對結(jié)果的影響。采血中應(yīng)避免溶血。盡快送檢，勿劇烈振蕩，避日光照射；不能立即測定應(yīng)分離血清，置于4冰箱中保存。與空氣接觸時，CO 2 ，pH抗凝劑的影響抗凝劑：不能用EDTA、檸檬酸鹽或草酸鹽等抗凝劑。肝素常不超過20U/ml血樣。藥物的影響藥

11、物或其代謝產(chǎn)物引起患者體內(nèi)被測物的濃度發(fā)生改變。如利尿劑促進K + 、Na + 、Cl 從尿中排出。藥物直接對ISE的響應(yīng)產(chǎn)生影響：如水楊酸鹽對抗凝劑的影響Cl 電極、維生素C對K + 電極響應(yīng)有干擾等分析中質(zhì)量控制定標(biāo)校正液各廠家的定標(biāo)校正液不能互換使用電極保養(yǎng)使用一段時間后就需要保養(yǎng)質(zhì)控品選用質(zhì)量好、性能穩(wěn)定和對離子選擇性電極響應(yīng)沒有干擾的質(zhì)控血清分析后的質(zhì)量控制異常結(jié)果的分析取舍：如Glu 、HCO 3 、K +過高：血樣放置過長多項檢測結(jié)果過低：樣品稀釋比例不對、有纖維蛋白凝塊或吸樣針部分堵塞對某些急診檢驗項目特別異常的結(jié)果，應(yīng)及時與臨床聯(lián)系，以便緊急處置五、電解質(zhì)分析技術(shù)的臨床應(yīng)用

12、低鈉血癥和高鈉血癥 血清鉀增高和血清鉀降低 低氯血癥和高氯血癥電泳自動化分析技術(shù)一、影響電泳的因素待分離物質(zhì)的性質(zhì)粒子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快。緩沖液的性質(zhì)溶液的pH值影響其帶電性質(zhì)、凈電荷量。緩沖液離子強度一般在0.02 0.20molkg之間。電場強度電壓越高，電場強度越大，遷移率越大，帶電粒子移動越快支持介質(zhì)的性質(zhì)包括黏性吸附對泳動的阻礙作用，支持介質(zhì)的分子篩和電滲作用溫度升高時，介質(zhì)黏度下降，分子運動加劇，引起自由擴散加快、區(qū)帶變寬和分辨率下降二、電泳儀的分類和基本結(jié)構(gòu)電泳技術(shù)的分類 工作原理的不同分為：移動界面電泳、區(qū)帶電泳、穩(wěn)態(tài)電泳或稱置換電泳

13、 有無支持物分為：自由電泳和支持物電泳（區(qū)帶電泳）。 電源控制的不同分為：恒壓電泳、恒流電泳、恒功率電泳。自動化程度的不同分為： 手工操作、半自動電泳、全自動電泳、全自動電泳分析系統(tǒng) 其他分類方式： 支持載體的裝置形式，區(qū)帶電泳可分成水平平板電泳、垂直板狀電泳、垂直柱狀電泳、U型管電泳、倒V字形電泳、毛細(xì)管電泳等。電泳儀的基本結(jié)構(gòu)手工電泳儀電源、電泳槽、電泳條帶分析裝備(或掃描儀)三部分的結(jié)構(gòu)分離，加樣、電泳、電泳后的染色和脫色等均需手工操作，人工設(shè)置參數(shù)完成電泳。 自動電泳分析儀 將電源、電泳槽、烘箱、染色缸等組合在一起，采用計算機對電泳過程進行控制，部分乃至全部操作由電泳儀完成；分為半自動

14、或全自動電泳儀。三、自動電泳儀的使用和保養(yǎng)每天保養(yǎng)重點是電極的維護，每天電泳后，應(yīng)當(dāng)用干濾紙擦凈電極，避免緩沖鹽沉積于電極上或酸堿對電極的腐蝕。每月保養(yǎng)重點是掃描系統(tǒng)的比色濾鏡及光源。四、電泳分析的質(zhì)量控制電泳分析前質(zhì)量控制電泳分析方法的選擇 加強實驗室與臨床醫(yī)生的溝通，宣傳實驗室所開展的電泳技術(shù)及應(yīng)用；全面了解電泳儀的結(jié)構(gòu)和原理、電泳結(jié)果的意義，合理使用電泳分析方法。v標(biāo)本采集： 宜采 用 新鮮 血清， 避免標(biāo)本溶血。腦脊液 ( CSF) 標(biāo)本新鮮 最 佳； CSF免 疫固定電泳必須對同一病人同時采集CSF和血清標(biāo)本。尿液標(biāo)本以新鮮的晨尿為佳。v標(biāo)本保存： 不能立即電泳的 血樣， 應(yīng)先分離血

15、清再保存。血清、腦脊液和尿液標(biāo)本，在 2 8 冷藏保存可穩(wěn)定 1 周， - 20 至少可保存 1 個月， - 40 保存可長達5 年。如血清標(biāo)本加入 0.2g L 的疊氮鈉，冷凍保存的穩(wěn)定性更好電泳試劑的保存應(yīng)遵照試劑使用說明書的要求保存大多數(shù)廠家的電泳載體是瓊脂糖凝膠，其保存期至少在半年以上。凝膠片在干燥的室溫條件下保存，具有生物活性的試劑(如抗體、酶等)需嚴(yán)格按要求保存，其他配套保存試劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用電泳分析中的質(zhì)量控制標(biāo)本準(zhǔn)備和使用標(biāo)本是否需要稀釋或濃縮，根據(jù)需要而定冷凍后的血清標(biāo)本有時會變得黏稠或混濁，在電泳分析前要置室溫平衡冷凍標(biāo)本-脂蛋白可向陰極漂移；越陳舊的血清標(biāo)本漂移越明顯標(biāo)本量的要求盡可能做到嚴(yán)格和精確電泳操作應(yīng)注意加樣、電泳、染色等因素對電泳結(jié)果的干擾，如樣品是否同時“點”在凝膠片上，電泳方式的選擇是否正確，染色液是否足夠，掃描膠片是否“對號入座”等。質(zhì)控物正確應(yīng)用較成熟的商業(yè)性控物主要用于血清蛋白電泳分析在無合適商品化質(zhì)控物的情況下，可以考慮用正常人血清電泳分析后的質(zhì)量控制 主要包括對分析結(jié)果的正確解釋和應(yīng)用、電泳結(jié)果的及時發(fā)送以及自動電泳儀的維護和保養(yǎng)等。五、電泳分析技術(shù)的臨床應(yīng)用蛋白質(zhì)電泳血清蛋白電泳 許多疾病具有一定特征的血清蛋白電泳圖譜。免疫固定電泳 可對各類Ig及其輕鏈進行分型，最常用于臨床常規(guī)M蛋