藥物分析課件第11章A-抗生素類藥物的分析hao

1、第十一章第十一章基本要求基本要求一、掌握抗生素類藥物的結(jié)構(gòu)特點與分析方法一、掌握抗生素類藥物的結(jié)構(gòu)特點與分析方法之間的關(guān)系。之間的關(guān)系。二、掌握抗生素類藥物的鑒別原理與方法。二、掌握抗生素類藥物的鑒別原理與方法。三、掌握抗生素類藥物法定含量測定方法的原三、掌握抗生素類藥物法定含量測定方法的原理、測定方法與計算。理、測定方法與計算。四、熟悉抗生素類藥物雜質(zhì)檢查的方法。四、熟悉抗生素類藥物雜質(zhì)檢查的方法。五、了解抗生素類藥物中高分子聚合物檢查。五、了解抗生素類藥物中高分子聚合物檢查。第一節(jié)第一節(jié) 概述概述1. 抗生素藥物的特點抗生素藥物的特點化學(xué)純度較低化學(xué)純度較低活性組分易發(fā)生變異活性組分易發(fā)生

2、變異穩(wěn)定性差穩(wěn)定性差2. 微生物學(xué)法與理化法的比較微生物學(xué)法與理化法的比較微生物檢定法微生物檢定法理化法理化法以抗生素對微生物的殺傷或抑制程以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指標(biāo)衡量抗生素的生物效價度為指標(biāo)衡量抗生素的生物效價 根據(jù)抗生素結(jié)構(gòu)特點，利用其根據(jù)抗生素結(jié)構(gòu)特點，利用其特有的理化性質(zhì)測定其含量特有的理化性質(zhì)測定其含量已知或新發(fā)現(xiàn)的抗生素、精制品或已知或新發(fā)現(xiàn)的抗生素、精制品或粗制品均能測定粗制品均能測定 測定化學(xué)結(jié)構(gòu)已知、已提純的測定化學(xué)結(jié)構(gòu)已知、已提純的抗生素抗生素靈敏度高、樣品需用量小、反映抗靈敏度高、樣品需用量小、反映抗生素的醫(yī)療價值，但操作步驟多、生素的醫(yī)療價值，但操作步驟多

3、、費時、費時、誤差大誤差大 迅速、準(zhǔn)確、專屬性高、樣品迅速、準(zhǔn)確、專屬性高、樣品需用量小、操作簡單、省時需用量小、操作簡單、省時3.3.抗生素的活性以效價單位來表示：抗生素的活性以效價單位來表示： 每每mlml或每或每mgmg中含有某種抗生素的有效成中含有某種抗生素的有效成分的多少，用單位（分的多少，用單位（u u）或）或g g 表示。表示。 1 1mgmg青霉素青霉素G G鈉鹽定為鈉鹽定為16671667單位單位 1 1mgmg青霉素青霉素G G鉀鹽的單位（鉀鹽的單位（u u） =1667=1667356.4/372.5=1595u/mg356.4/372.5=1595u/mg分類分類（按結(jié)

4、構(gòu)與性質(zhì)）：（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）： 內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、 四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、 氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類 林可霉素類、其他抗生素類林可霉素類、其他抗生素類第二節(jié)第二節(jié) 內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 青霉素類青霉素類NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（母核（6-6-氨基青霉烷酸）氨基青霉烷酸）AB頭孢菌素類頭孢菌素類7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基頭孢菌烷酸）RCOABCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素（青霉素鉀、鈉）（青霉素鉀、鈉）NH2CONSOHNCOOHC

5、H3CH3CH2氨芐西林氨芐西林（氨芐青霉素）（氨芐青霉素）阿莫西林阿莫西林（羥氨芐青霉素）（羥氨芐青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素頭孢氨芐頭孢氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2頭孢拉啶頭孢拉啶CH2NH2CONONHSCH3COOH頭孢羥氨芐頭孢羥氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性結(jié)構(gòu)特點與性質(zhì)結(jié)構(gòu)特點與性質(zhì)一、一、NaN

6、a與堿金屬與堿金屬(Na(Na+ +、K K+ +) )成鹽成鹽 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 與有機堿與有機堿( (普魯卡因普魯卡因) )成鹽成鹽 難溶于水難溶于水普魯卡因普魯卡因青霉素青霉素C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）（二）手性手性C C 87654321NOS頭孢菌素類頭孢菌素類 C6 C7青霉素類青霉素類 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共軛體系（三）共軛體系 NSO頭孢菌素類頭孢菌素類 母核有共軛體系母核有共軛體系 青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯UVUV 多數(shù)有苯環(huán)取代基多數(shù)有苯環(huán)取代

7、基 NOS UVUV（四）（四）內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán) 水溶液水溶液 不穩(wěn)定不穩(wěn)定 干燥純凈干燥純凈 穩(wěn)定穩(wěn)定 不穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素性因素四元環(huán)張力大四元環(huán)張力大 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解 青霉素類青霉素類 某些氧化劑某些氧化劑酸、堿、青霉素酶酸、堿、青霉素酶（某些金屬離子）（某些金屬離子） （溫度）（溫度）降解降解失效失效例例青霉素的降解反應(yīng)青霉素的降解反應(yīng)青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑?；u胺酸?；u胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2頭孢菌素類頭孢菌素類酸、堿、胺類酸、堿、胺類 -

8、內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶降解降解失效失效（一）呈色反應(yīng)（一）呈色反應(yīng)1. 1. 羥肟酸鐵反應(yīng)羥肟酸鐵反應(yīng)-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類呈色呈色羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物Fe3+/3H+鑒別試驗鑒別試驗 二、二、NaOH2 2HClNOHH- - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 （紅、棕、褐）（紅、棕、褐）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng) - -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 藍(lán)紫色藍(lán)紫色3. 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)- - - CONH（開環(huán)分解）（開環(huán)分解） - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅紫紫

9、4. 與重氮苯磺酸反應(yīng)與重氮苯磺酸反應(yīng)橙黃色橙黃色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- - -5 56 6OHHC（偶合）（偶合）酚羥基酚羥基頭孢哌酮頭孢哌酮5. 與變色酸與變色酸- -硫酸反應(yīng)硫酸反應(yīng)活潑活潑“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨芐西林氨芐西林HCHOCHSOH- - - 2 22 2”羰羰基基側(cè)側(cè)鏈鏈含含“（分解分解）變色酸變色酸顯色顯色1. K+、Na+的火焰反應(yīng)的火焰反應(yīng)（二）各種鹽的反應(yīng)（二）各種鹽的反應(yīng) 焰色焰色鮮黃色鮮黃色 + 醋酸氧鈾鋅醋酸氧鈾鋅黃黃 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼鈉四苯硼鈉 + Ac白白 K+2. 沉淀反應(yīng)（青霉素鹽）沉淀反應(yīng)（青霉素鹽）

10、遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素鈉青霉素鈉青霉素鉀青霉素鉀緘緘+ +H3. 重氮化重氮化 - - 偶合反應(yīng)偶合反應(yīng) 青霉素青霉素普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素+ + + +H重氮化重氮化-偶合反應(yīng)偶合反應(yīng)紅紅 芳伯氨基芳伯氨基4. 與三硝基苯酚反應(yīng)與三硝基苯酚反應(yīng) 三三硝硝基基苯苯酚酚二二芐芐基基乙乙二二胺胺芐芐星星青青霉霉素素NaOH二芐基乙二胺二芐基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光譜法光譜法（三）（三）1、 UV法法樣品、分解產(chǎn)物樣品、分解產(chǎn)物n

11、m339HA + +苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素Cu2+A,Emin,max,%1cm1 光光譜譜圖圖頭孢氨芐頭孢氨芐 max = 262nm青霉素青霉素V鈉鈉 A280nm/A264nm = 1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHpH3.8分子重排分子重排2、IR法法3180cm-1 N-H內(nèi)酰胺內(nèi)酰胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林為例以阿莫西林為例色譜法色譜法（四）（四）1、 TLC法法對照品對照法對

12、照品對照法和和斑斑點點顏顏色色比比較較供供試試品品對對照照品品相相同同條條件件fR2、 HPLC法法Rt比較比較供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件三、雜質(zhì)檢查三、雜質(zhì)檢查 藥物藥物 檢查項目檢查項目 檢查方法檢查方法 頭孢他啶頭孢他啶 聚合物聚合物 HPLCHPLC法法 頭孢曲松鈉頭孢曲松鈉 頭孢哌酮鈉頭孢哌酮鈉 頭孢噻肟鈉頭孢噻肟鈉 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯 有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體 HPLCHPLC法法 頭孢氨芐頭孢氨芐 有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì) 反相反相TLCTLC法法 青霉素鉀（鈉）青霉素鉀（鈉） 吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 1. 1.頭孢他啶聚合物的測定頭孢他啶聚合

13、物的測定 固定相：葡聚糖凝膠固定相：葡聚糖凝膠G-10G-10（ 4012040120m m ） 流動相流動相A A：3.5%3.5%硫酸銨的硫酸銨的0.01mol/L0.01mol/L磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液 流動相流動相B B：0.01%0.01%十二烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉 對照品溶液：頭孢他啶對照品對照品溶液：頭孢他啶對照品 100100g/mlg/ml1 1）系統(tǒng)適用性試驗：理論塔板數(shù)和拖尾因子）系統(tǒng)適用性試驗：理論塔板數(shù)和拖尾因子用用1mg/ml1mg/ml藍(lán)色葡聚糖藍(lán)色葡聚糖20002000、流動相、流動相A A測定；重測定；重復(fù)性用對照品溶液、流動相復(fù)性用對照品溶液、流動相B

14、B測定。測定。 N N不低于不低于900900，拖尾因子，拖尾因子0.0.751.5.5，峰面積的，峰面積的RSDRSD應(yīng)小于應(yīng)小于5.0%5.0%。2 2）測定方法）測定方法 進樣供試液，用流動相進樣供試液，用流動相A A；進樣對照液，；進樣對照液，用流動相用流動相B B。以外標(biāo)法計算，含頭孢他啶聚合。以外標(biāo)法計算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過物以頭孢他啶計不得超過0.3%0.3%。2.2.頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查 固定相：固定相：ODSODS 流動相：流動相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氫銨磷酸二氫銨- -甲醇（甲醇（62:38

15、62:38） 1 1）頭孢呋辛酯）頭孢呋辛酯2 2- -異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛酯對異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛酯對 照品照品+ +流動相流動相 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯2 2- -異構(gòu)體。異構(gòu)體。2 2）系統(tǒng)適用性試驗：各異構(gòu)體之間的）系統(tǒng)適用性試驗：各異構(gòu)體之間的R1.5R1.5，以，以 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯A A異構(gòu)體計算異構(gòu)體計算n1500n1500。 3 3）異構(gòu)體：）異構(gòu)體： ttR1R1 相對保留時間相對保留時間 r r1212=- 1-=- 1-被測物被測物 ttR2 R2 2-2-標(biāo)準(zhǔn)物標(biāo)準(zhǔn)物異構(gòu)體異構(gòu)體 相對保留時間相對保留時間 判斷判斷B B異構(gòu)體異構(gòu)體 0.85 0.85 供試液譜

16、圖中供試液譜圖中A A異構(gòu)體的峰面積異構(gòu)體的峰面積A A異構(gòu)體異構(gòu)體 1.0 1.0 與與A A、B B異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng)異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng) 為為0.0.480.55.55。 3.3.頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查-反相反相TLCTLC法法 固定相：活化后的硅膠固定相：活化后的硅膠G G板置板置5%5%（V/VV/V）正十四）正十四 烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干 展開劑：展開劑：0.1mol/L0.1mol/L枸櫞酸枸櫞酸-0.2mol/L-0.2mol/L磷酸氫二磷酸氫二 鈉鈉- -丙酮（丙酮（120120：8080：3 3） 供試液：本品供試液：本品 50mg/ml 50mg/ml 對照液（對照液（1 1）：本品）：本品 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 對照液（對照液（