同濟考博-分子生物學真題-答案(共17頁)

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上同濟醫(yī)科大學2001年分子生物學（博士）一、英漢互譯下列名詞，并加以解釋(30分)1、transposable element 轉座子：基因組中可移動的DNA分子，在真核生物的基因和基因組進化中起著重要的作用。2、restriction enzyme 能夠特異性識別dsDNA序列，并且能夠在識別位點及其周圍切斷DNA的核酸內(nèi)切酶3、derepression 去阻扼：阻遏蛋白從啟動子，操縱子區(qū)脫離，解除抑制。染色質去阻扼后出現(xiàn)的開放構象，能促進基因轉錄。例如，乳糖操縱子中，乳糖與阻遏蛋白結合，改變阻遏蛋白的構象，使之不再與操縱基因結合，RNA-pol II就與啟動子結合

2、，開始轉錄翻譯出三種酶，乳糖就是阻遏蛋白與操縱子分離的誘導物。4、gene therapy 基因治療：是以改變?nèi)说倪z傳物質為基礎的生物醫(yī)學治療，用一定方法(病毒載體，非病毒載體)將正常人野生型基因或有治療作用的基因導入患者靶細胞內(nèi)，從而置換或者矯正致病基因的一種治療方法。5、calmodulin 鈣調蛋白：鈣調蛋白是真核生物細胞胞質溶膠蛋白，由148個氨基酸組成單條多肽，16.7kDa。一種能與鈣離子可逆結合的蛋白質。鈣離子被稱為細胞內(nèi)的第二信使，其濃度變化可調節(jié)細胞的功能，這種調節(jié)作用主要是通過鈣調蛋白而實現(xiàn)的。6、操縱子 ：指包含結構基因、操縱基因以及啟動基因的一些相 操縱子鄰基因組成的D

3、NA片段，其中結構基因的表達受到操縱基因的調控。主要見于原核生物，但在真核生物中也存在。7、反式作用因子： 一些細胞核內(nèi)蛋白質可以與順式作用原件和RNA-pol相互作用，來調控基因轉錄。Cis-acting element: 真核基因非編碼區(qū)中能夠調控基因轉錄的DNA序列，包括啟動子，增強子，沉默子。8、基因組 一個細胞，或生物體內(nèi)的全部基因，全部遺傳信息。9、原癌基因 細胞癌基因，正常情況下靜止或極少表達，其表達產(chǎn)物對于細胞生長、分化、增殖有重要作用。一旦激活可以導致細胞惡變，誘發(fā)腫瘤的基因。激活方式有：點突變、獲得啟動子、基因擴增、染色體易位或重排。10、多克隆位點：載體中有多個限制性內(nèi)切

4、酶的識別位點，能夠插入多個外源基因并且能否復制的位點。二、試述反式作用因子的結構特征及作用方式(20分)Trans-acting factor是一類細胞核內(nèi)的蛋白質因子，能夠與順式作用元件和RNA-pol相互作用，調節(jié)基因轉錄活性。一般含有DNA結合結構域和轉錄活化結構域。DNA結合結構域：（1） Helix-turn-helix 含有3個helix，其中helix3與DNA識別結合，helix1和helix2與其它蛋白質結合。（2）Zenic finger鋅指結構：由相對保守的一段氨基酸序列和鋅離子結合，形成相對獨立的功能域，像一根手指插入DNA的大溝。兩種類型的DNA結合蛋白有這樣的模序，

5、一是鋅指蛋白，另一個是甾體受體。（3）Leucine Zipper：亮氨酸拉鏈，兩個蛋白質之間相互作用，共同建立一個轉錄復合體。是一種富含亮氨酸的蛋白質形成的二聚體motif。這種motif可以識別特殊的DNA序列。兩個亮氨酸拉鏈區(qū)的反式作用因子依靠疏水力量相互結合，N-端有堿性氨基酸構成的a-helix能夠與DNA結合。Eg: AP1與SV40增強子的結合（4）helix-loop-helix: 兼性a-helix具有疏水面和親水面，兩個具有這種的motif反式因子可以形成dimer。僅靠helix的N-端有一段富含堿性氨基酸的序列可以與DNA結合。HLH以同二聚體或者異二聚體作用于順式作用

6、元件。（5）同源異形結構域homeodomain, 同源異性盒是一種編碼60aa的序列，長180bp，幾乎存在于所有真核生物中。轉錄激活域：與其他轉錄因子相互作用的結構成分。常見的轉錄激活結構域有富含谷氨酰胺結構域，富含脯氨酸結構域及酸性螺旋結構域。三、試述2型限制酶的功能與特性(20分) 型酶相對來說最簡單，它們識別回文對稱序列，在回文序列內(nèi)部或附近切割 DNA ，產(chǎn)生帶 3'- 羥基和 5'- 磷酸基團的 DNA 產(chǎn)物，需 Mg2+ 的存在才能發(fā)揮活性，相應的修飾酶只需 SAM 。識別序列主要為 4-6bp ，或更長且呈二重對稱的特殊序列，但有少數(shù)酶識別更長的序列或簡并序列

7、，切割位置因酶而異，有些是隔開的。 有特異識別和切割的序列部位 DNA分子上兩個單鏈斷裂的部位通常不是直接相對的 斷裂所形成的DNA片段常具有堿基互補的單鏈尾巴（粘性末端） 內(nèi)切酶的切割和修飾功能由兩個不同的酶催化所完成，即內(nèi)切酶活性和甲基化作用活性是分開的四、試述影響原核基因轉錄的因素(20分)原核基因表達調控與真核存在很多共同之處，但因原核生物沒有細胞核和亞細胞結構，其基因組結構要比真核生物簡單，基因表達的調控因此而比較簡單。雖然原核基因的表達也受轉錄起始、轉錄終止、翻譯調控及RNA、蛋白質的穩(wěn)定性等多級調控，但其表達開、關的關鍵機制主要發(fā)生在轉錄起始。其特點包括以下3方面：（1）因子決定

8、RNA聚合酶的識別特異性：原核生物只有一種RNA聚合酶，核心酶催化轉錄的延長， 亞基識別特異啟動序列，即不同的 因子協(xié)助啟動不同基因的轉錄。（2）操縱子模型的普遍性：除個別基因外，原核生物絕大數(shù)基因按功能相關性成簇地連續(xù)排列在染色體上，共同組成一個轉錄單位即操縱子，如乳糖操縱子等。一個操縱子含一個啟動序列及數(shù)個編碼基因。在同一個啟動序列控制下，轉錄出多順反子mRNA。（3）阻遏蛋白與阻遏機制的普遍性：在很多原核操縱子系統(tǒng)，特異的阻遏蛋白是控制啟動序列活性的重要因素。當阻遏蛋白與操縱基因結合或解離時，結構基因的轉錄被阻遏或去阻遏。原核生物在細胞質內(nèi)轉錄，轉錄和翻譯同時進行。五、試述病毒核酸的結構

9、特點(10分) （1）病毒內(nèi)的核酸結構相對簡單，其遺傳物質可以是DNA或者RNA，也有阮粒病毒以蛋白質作為遺傳物質，成熟的病毒內(nèi)只有一種遺傳物質，要么是DNA，要么是RNA。（2）病毒基因可以連續(xù)也可以中斷，很少有重復序列。病毒基因組大部分是用來編碼蛋白質的，其編碼區(qū)大于901%。非編碼區(qū)較少。非編碼區(qū)通常是基因表達的調控區(qū)（3）有重疊基因存在，使得較小的基因片段可以攜帶較多的遺傳信息。（4）病毒基因組是單倍體，功能相關的蛋白質基因常常叢集于基因組的一個或者多個特定部位，形成一個功能單元或者轉錄單元。華中科技大學同濟醫(yī)學院2002年攻讀博士學位研究生入學考試試題考試科目：分子生物學（基礎課）科

10、目代碼：811一名詞解釋并寫出對應的英文名詞（共10小題，每小題5分，共50分）1.克隆載體 2.表達載體 3.假基因 4.微衛(wèi)星序列 5.回文結構 6.啟動子7.癌基因 8.多克隆位點 9.增強子 10. 開放閱讀框架1.克隆載體：為“攜帶”感興趣的外源DNA、實現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些DNA分子。一般為質?；蛘呤删w。2.表達載體：為使插入的外源DNA序列可轉錄、進而翻譯成多肽鏈而設計的克隆載體3. 假基因：多基因家族中，某些成員不產(chǎn)生有功能的基因產(chǎn)物，這些基因叫假基因?？梢宰鳛檗D座子的一部分。4. 微衛(wèi)星序列：真核基因中2-6bp的短串聯(lián)重復序列，數(shù)目非常多

11、，分散于基因組中。衛(wèi)星DNA構成著絲粒，端粒，Y染色體異染色質區(qū)。可以作為第二代遺傳標記，用于連鎖分析，親子鑒定，個體識別。5. 回文結構：兩個序列相同的DNA單鏈反向堿基互補，串聯(lián)重復，又叫反向重復序列，是限制性內(nèi)切酶II的識別位點，也是轉錄終止的識別區(qū)?？梢詷嫵墒譅罱Y構。雙鏈DNA中含有的二個結構相同、方向相反的序列稱為反向重復序列，也稱為回文結構。6.啟動子：真核基因轉錄起始點上游，能夠與RNA聚合酶結合，啟動基因轉錄的一段特異性核苷酸序列。7. 癌基因：能夠導致細胞惡性轉化的基因，分為病毒癌基因和細胞癌基因。8.多克隆位點：有個限制性內(nèi)切酶的識別位點，可以讓多個外源基因插入的載體位點

12、。二問答題（共3小題，每小題10分，共30分）1.若要獲得IL-2的基因工程產(chǎn)品，你應該怎么做？基因工程是在分子水平上對基因進行操作的復雜技術，是將外源基因通過體外重組后導入受體細胞內(nèi)，使這個基因能在受體細胞內(nèi)復制、轉錄、翻譯表達的操作，又叫分子克隆，DNA重組技術。1. 在GENBANK中檢索IL-2的mRNA序列；在genecard里檢索IL-2高表達的組織；同時檢索一下有關文獻；2. 如果考慮使用原核表達系統(tǒng)（通常是大腸桿菌表達系統(tǒng)），將IL-2的成熟肽的基因序列找出（呵呵，我沒有檢索，不清楚是否有信號肽）進行分析；3. 根據(jù)表達載體，設計含有合適酶切位點的、對應成熟肽編碼區(qū)的引物；4.

13、 提取IL-2高表達的組織的mRNA，RT-PCR，T載體克隆或直接酶切克隆至表達載體中、測序。2.真核細胞中基因表達的特異性轉錄調控因子是指什么？根據(jù)它們的結構特征可以分為哪些類型？它們和DNA相互識別的原理是什么？特異性轉錄調控因子是指是除基本轉錄因子之外，與轉錄核心區(qū)以外的順式作用元件相結合，影響基因轉錄的因子，分為DNA結合結構域和轉錄激活結構域。與GGGCGG結合的特異性轉錄調控因子叫Sp1。與CCAAT結合的轉錄因子叫CBF。大多數(shù)類固醇激素與受體結合之后，構成特異性轉錄因子，與順式作用元件結合，激活基因轉錄。也有轉錄調控抑制因子，可以覆蓋轉錄活化區(qū)，覆蓋轉錄起始區(qū)。還有HSP。與

14、DNA的識別模式有：(1)螺旋-轉角-螺旋，helix3識別結合DNA，helix1,helix2結合其它蛋白質因子。(2)Zenic finger與DNA大溝相結合，可以與RNA-pol3及其它轉錄因子相互作用。(3)亮氨酸拉鏈： N-末端由堿性氨基酸構成的a-helix可以與DNA相結合. (4)helix-loop-helix 兼性a-helix具有疏水側面和親水側面，兩個具有這種motif的反式因子可以形成dimer。緊靠helix N-末端的堿性氨基酸組成的序列可以結合DNA。轉錄因子的DNA結合區(qū)都有特定的空間構型和帶電性質。可以和結構和電荷量相匹配的DNA結合。3.簡述細胞內(nèi)癌基

15、因激活的方式？(1) 點突變：基因中單個堿基替換，引起表達的蛋白質氨基酸序列改變。例如，結腸癌中常有k-ras基因的點突變。(2) 插入啟動子：多見于癌癥的起始階段。某些病毒(ALV)的長末端重復序列(LTR)含有啟動子，轉染宿主細胞之后，插入到原癌基因周圍或內(nèi)部，啟動基因轉錄，活化。例如ALV的LTR插入到c-myc周圍，可以使其表達水平提高20-76倍。(3)基因擴增：見于癌癥進展期。癌基因不斷復制，拷貝數(shù)增多。在染色質中有淺染區(qū)，均質染色質。其不斷復制擴增，可以脫離染色體，形成雙微體。例如，在小細胞肺癌中，c-myc擴增，膠質瘤中ERBB1擴增，神經(jīng)纖維瘤中，n-myc擴增。(4) 染色

16、體易位和重排：染色體易位時，如果斷裂點發(fā)生在原癌基因周圍，可以改變癌基因的結構和轉錄調控系統(tǒng)，使之激活。例如，在Burkitt淋巴瘤中，有t(8;14),(q24;q32)易位。慢性粒細胞白血病中有BCL/ABL融合基因，使絡氨酸蛋白激酶激活，不受生長因子/受體的調控，使c-ABL活化，導致CML。三選答題（任選2小題，每小題10分，共20分）1.簡述基因治療中轉移外源基因至體內(nèi)的非病毒和病毒途徑的主要原理 非病毒途徑有(1)直接注射法：將含有裸DNA的溶液直接對患者肌肉注射，DNA轉入肌組織，并向全身表達目的基因的產(chǎn)物?？梢猿掷m(xù)幾個月到1年多。但是，轉入效率很低。僅限于肌肉組織。(2)電穿孔

17、法：在高壓電脈沖作用下，使細胞膜打孔，讓外源DNA迅速導入宿主細胞。主要與電壓和脈沖時間有關。(3) 脂質體轉移法：用磷脂雙分子層包裹目的基因，與細胞膜有類似的結構，通過內(nèi)吞作用，進入細胞，可以防止細胞內(nèi)核酸酶的降解目的基因。(4)陽離子多聚體：陽離子聚胺與陰離子DNA形成復合物，與細胞表面帶負電的受體結合，通過內(nèi)吞作用進入細胞。沒有細胞特異性，沒有靶向性，基因轉移效率低。(5) 同源重組法：外源基因專一的整合到受體細胞的特定部位，基因修正。 病毒途徑：病毒載體的要求：可以有效地進入靶細胞，具有可插入治療基因的較大空間和篩選標記，具有控制治療基因表達的順式作用元件。(1) 逆轉錄病毒：反轉錄病

18、毒雖是RNA病毒，但有，可使RNA轉錄為DNA，再整合到宿主細胞基因組。具有穿透細胞的能力，可使近100%的受體細胞被感染，轉化細胞效率高。無嚴格的組織特異性，隨機整合的病毒可長期存留，對細胞無害。這種載體只能把其DNA整合到能旺盛分裂細胞的染色體，而不適合于那些不能正常分裂的細胞，如。由于病毒自身含有病毒癌基因，就有使宿主細胞感染病毒和致癌的危險性。人們有目的地將病毒基因及其癌基因除去，僅留它們的外殼蛋白，以保留其穿透細胞的功能，試圖避免上述缺點。這種改造后的病毒稱為缺陷型病毒（defective virus）。這樣的中的反轉錄酶可將RNA轉化為DNA，有助于該DNA順利進入宿主細胞的基因組

19、，而該病毒則死亡。(2) 介導載體（DNA viral mediated vector）：DNA病毒包括、SV40、牛乳頭瘤病毒、等，一般認為這類病毒難于改造成缺陷型病毒。牛乳頭瘤病毒重組后，可不插入染色體中引起插入突變，又可在宿主外獨立復制，并表達出基因產(chǎn)物。設計了一個新的腺病癥，它是用一個化學連接器即賴氨酸鏈（lysine chain）將DNA栓在病毒外殼上，這樣組成的運輸器，通過一個表面抗體而進入，使宿主基因與治療基因共同表達。這個新病毒載體稱為腺病毒多賴氨酸DNA復合體（adeno virus-polylysine DNA-complex）?；蛑委煹幕境绦颍阂?治療的獲得(二)的選

20、擇(三)靶細胞的選擇(四)基因轉移方法(五)轉導細胞的選擇鑒定(六)回輸體內(nèi)2.請你評價一下人類基因組計劃（HGMP）完成的意義(1)對人類疾病基因研究的貢獻人類疾病相關的基因是人類基因組中結構和功能完整性至關重要的信息。對于單基因病，采用“定位克隆”和“定位候選克隆”的全新思路，導致了亨廷頓氏舞蹈癥、遺傳性結腸癌和乳腺癌等一大批單基因遺傳病致病基因的發(fā)現(xiàn)，為這些疾病的基因診斷和基因治療奠定了基礎。對于心血管疾病、腫瘤、糖尿病、神經(jīng)精神類疾?。ɡ夏晷园V呆、精神分裂癥）、自身免疫性疾病等多基因疾病是目前疾病基因研究的重點。健康相關研究是HGP的重要組成部分，1997年相繼提出：“腫瘤基因組解剖計

21、劃”“環(huán)境基因組學計劃”。(2)對醫(yī)學的貢獻:基因診斷、基因治療和基于基因組知識的治療、基于基因組信息的疾病預防、疾病易感基因的識別、風險人群生活方式、環(huán)境因子的干預對生物技術的貢獻 胚胎細胞克隆羊多利基因工程藥物分泌蛋白（多肽激素，生長因子，趨化因子，凝血和抗凝血因子等）及其受體。診斷和研究試劑產(chǎn)業(yè)基因和抗體試劑盒、診斷和研究用生物芯片、疾病和篩藥模型。對細胞、胚胎、組織工程的推動胚胎和成年期干細胞、克隆技術、器官再造。(3)對制藥工業(yè)的貢獻篩選藥物的靶點：與組合化學和天然化合物分離技術結合，建立高通量的受體、酶結合試驗以知識為基礎的藥物設計：基因蛋白產(chǎn)物的高級結構分析、預測、模擬藥物作用“

22、口袋”。個體化的藥物治療：藥物基因組學。(4)對社會經(jīng)濟的重要影響生物產(chǎn)業(yè)與信息產(chǎn)業(yè)是一個國家的兩大經(jīng)濟支柱；發(fā)現(xiàn)新功能基因的社會和經(jīng)濟效益；轉基因食品；轉基因藥物（如減肥藥，增高藥）(5)對生物進化研究的影響生物的進化史，都刻寫在各基因組的“天書”上；草履蟲是人的親戚13億年；人是由300400萬年前的一種猴子進化來的；人類第一次“走出非洲”200萬年的古猿；人類的“夏娃”來自于非洲，距今20萬年第二次“走出非洲”？(6)帶來的負面作用侏羅紀公園不只是科幻故事；種族選擇性滅絕性生物武器；基因專利戰(zhàn)；基因資源的掠奪戰(zhàn)；基因與個人隱私。3.分子生物學實驗中所涉及的引物有哪幾種，各有什么用途和特點

23、？1）純粹的用于擴增目的基因片段的引物，這種引物一般都是成對出現(xiàn)。2）用于基因測序用的引物，一般如果所測的片段長度短的話（小于800bp），可以用一條，當然兩條正反通測也可以。3）用于篩選的引物，比如平時常見的SSP，RFLP等引物，這種引物也是成對出現(xiàn)的，但主要用于基因多態(tài)性篩選的，針對單位點多態(tài)性來說。4.簡述34種PCR衍生技術及其應用(1) Anchored PCR:用酶法在一通用引物反轉錄cDNA 3末端加上一段已知序列，然后以此序列為引物結合位點，對該cDNA進行擴增。應用：擴增未知或全知序列，如未知cDNA的制備，低豐度cDNA文庫的構建。(2) 不對稱PCR：兩種引物濃度比例相

24、差較大的PCR技術。在擴增循環(huán)中引入不同的引物濃度，常用50-100：1的比例。最初10-15個循環(huán)主要產(chǎn)物是dsDNA，但是，低濃度引物被耗盡之后，高濃度引物介導的PCR反應會產(chǎn)生大量單鏈DNA。應用：制備ssDNA片段，用于序列分析或者核酸雜交的探針。(3) RT-PCR 當擴增模板為RNA時，需要先通過反轉錄酶將其反轉錄為cDNA才能擴增。RT-PCR應用非常廣泛，無論是分子生物學還是臨床檢驗都經(jīng)常用。(4) 修飾引物PCR 為達到某些特殊的應用目的，如定向克隆，定點突變，體外轉錄及序列分析等，可在引物5端加上酶切位點，突變序列，轉錄啟動子，序列分析結合位點等。ASO-PCR, SSCP

25、-PCR,real-time PCR, Taqman-PCR,同濟醫(yī)科大學2003年分子生物學（博士）811一名詞解釋并寫出對應的英文名詞（共10小題，每小題5分，共50分）1.克隆載體 2.表達載體 3.斷裂基因 4.雙脫氧核苷酸（簡單）5.多克隆位點6.啟動子 7.癌基因 8.核糖體結合位點（簡單） 9.增強子 10.開放閱讀框架1.克隆載體：為“攜帶”感興趣的外源DNA、實現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些DNA分子。一般為質?；蛘呤删w。2.表達載體：為使插入的外源DNA序列可轉錄、進而翻譯成多肽鏈而設計的克隆載體3. 斷裂基因：真核生物結構基因，由若干個編碼區(qū)和非

26、編碼區(qū)互相間隔開但又連續(xù)鑲嵌而成，去除非編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質，這些基因稱為斷裂基因。4. 雙脫氧核苷酸: 3-雙脫氧核糖通過糖苷鍵連接而成的化合物，主要用于Sanger法測序。雙脫氧核苷酸終止子是指在脫氧核苷酸的3號碳上面連接的一個可逆阻斷的熒光基團，使之無法直接與下一個脫氧核苷酸生成磷酸二酯鍵，DNA鏈暫時被終止。8. 核糖體結合位點是mRNA上的特異性序列，核糖體可以識別并結合這一序列來啟動翻譯過程。在原核生物中該序列稱為SD序列，在真核生物中則稱為Kozak序列10.開放閱讀框open reading frame，ORF 是結構基因的正常核苷酸序列，從起始

27、密碼子到終止密碼子的閱讀框可編碼完整的多肽鏈，其間不存在使翻譯中斷的終止密碼子二問答題（共3小題，每小題10分，共30分）1.什么是分子克隆技術？它的主要步驟是什么？在分子水平上提供一種純化和擴增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過轉化與轉導的方式，引入適合的寄主體內(nèi)得到復制與擴增，然后再從篩選的寄主細胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴增。2.真核細胞和原核細胞基因表達在轉錄水平上調控的特點。原核細胞： 1.轉錄起始調控：(1) 因子與啟動子的作用模式 原核細胞的RNA-pol只有一種，組成成

28、分為2bb 因子與啟動子結合。在原核生物分化發(fā)育過程中，不同基因有序表達也是不同因子在不同時間產(chǎn)生并發(fā)揮作用引起的。(2) 轉錄起始的負調控 最典型的是乳糖操縱子的調節(jié)(3) 轉錄起始的正調控 典型例子是阿拉伯糖操縱子，ara C基因產(chǎn)物Ara C起著關鍵作用，當環(huán)境中有阿拉伯糖時，Ara C形成dimer與I1、I2結合，激活BAD基因轉錄。(4) 轉錄起始的復合調控 葡萄糖代謝產(chǎn)物的分解阻遏負調控和CAP-cAMP復合物的正調控。2. 轉錄終止調控：(1) 依賴于因子的轉錄終止，色氨酸操縱子中有衰減子(2) 不依賴于因子的轉錄終止，識別發(fā)夾結構，使轉錄停止。真核細胞：1.轉錄前調控：(1)

29、染色體結構對轉錄的影響： 疏松的染色質轉錄活躍(2)DNA的修飾：真核基因CpG island中的C通常被甲基化，阻礙某些基因轉錄。2. 順式作用元件：真核基因非編碼區(qū)中調控基因轉錄的DNA序列，包括啟動子、增強子、沉默子。3.反式作用因子：一類細胞核內(nèi)的蛋白質因子，可以與RNA-pol和順式作用元件相互作用，調節(jié)基因轉錄。(1)基本轉錄因子：在真核基因啟動子上，參與組裝轉錄起始復合物的蛋白質因子。TFII有6種。(2)特異性轉錄因子：結合在核心轉錄原件以外的其它上游順式作用元件的蛋白質因子，通過DNA-蛋白質相互作用，調節(jié)基因轉錄，可以對環(huán)境變化迅速作出反應。與GGGCGG box結合的激活

30、蛋白稱為SP1;與CCAAT box結合的轉錄因子稱為CBF。SP1和CBF都能夠與特異性的DNA序列結合，啟動轉錄。多種類固醇激素也是特異轉錄因子，與相應受體結合后，作用于激素應答序列，促進轉錄。此外，在真核基因中也存在轉錄抑制因子，可以覆蓋轉錄活化區(qū)，或者覆蓋轉錄起始點，與基礎轉錄因子相互作用，抑制轉錄。2. 反式作用因子與DNA相互作用的模式：helix-turn-helix, Zenic finger, leucine zipper, helix-loop-helix.3. 就你所知RNA研究領域中，理論和技術方面的進展有哪些。RNA具有生物功能多樣性，在遺傳信息的翻譯中起決定作用，m

31、RNA有信使和模板的作用，轉運RNA可以轉運氨基酸和信息交換，rRNA有裝配和催化作用。1992年Holler等證明轉肽反應有核糖體大亞基催化。核酶的發(fā)現(xiàn)RNA具有催化功能和持家功能。RNA編輯：RNA編碼序列的改變稱為RNA編輯。hnRNA snRNA戴帽加尾防止降解。反義RNA：與mRNA序列互補的一段RNA，可以沉默mRNA的翻譯。(1). RNA剪切是真核生物基因表達過程中一個非常重要的機制，經(jīng)過RNA的剪切、連接以后即可產(chǎn)生具有編碼信息功能的mRNA。RNA剪切機制在生物的生長發(fā)育過程中至關重要。RNA剪切就是將基因組中轉錄出來的RNA前體中的內(nèi)含子剪切出去，然后再在相應酶的作用下將

32、剪切后的RNA重新連接起來. RNA的剪切位置主要依賴于剪切位點的判定，剪切位點一般都具有其專屬特定的序列。麻省理工學院的研究人員開發(fā)出一種新的計算方法來預測遺傳材料中的哪些序列轉錄為RNA時會象電影剪接室中被剪掉的膠片一樣被剪切掉，哪些會最終幸運地成為生命的藍圖。(2) RNA測序分析中的最新進展使用一種叫做RNA-seq的技術，最新的高通量DNA測序技術現(xiàn)在能夠被大規(guī)模地應用于捕獲一個細胞中整套的mRNA轉錄本。盡管RNA-seq才僅僅兩歲，但是它已經(jīng)迅速蔓延到基因組學領域，并且它現(xiàn)在正在被用于分析從細菌到靈長類生物的轉錄組。測序的深度允許研究者定量基因表達水平，以在真核生物物種中發(fā)現(xiàn)選擇

33、性異構體，甚至描述細菌基因組的操縱子結構(3) RNA干擾技術研究新進展RNA干擾( RNA interfer ence, RNAi)是由雙鏈 RNA 介導的序列特異的基因沉默現(xiàn)象, 它在轉錄水平、 轉錄后水平和翻譯水平上阻斷基因的表達,具有高效性和高特異性的特點。小干擾 RNA ( small interfer ing RNA 或 shor t inter fering RNA, siRNA) 是 RNAi作用中的效應分子,作為引導序列, 按照堿基互補原則識別靶基因轉錄出的信使 RNA( mRNA) , 并引導沉默復合物( RNAinduced silencing complex , RIS

34、C) 復合體結合mRNA。隨后 siRNA 與 mRNA 在復合體中換位, 核酸酶 Dicer 將 mRNA 切割成 21 23 核苷酸的片段, 從而可以破壞特定目的基因轉錄產(chǎn)生的 mRNA, 使其功能沉默。應用于基礎醫(yī)學，腫瘤治療，白血病治療，抗病毒。4. 簡述PCR技術中引物設計的要點。首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結構，再次引物不能在模板的非目的位點引發(fā)DNA 聚合反應。（1）原則：用于PCR反應的引物需要有兩條被擴增目的基因的兩端，并分別與模板正負鏈序列互補；引物長度一般以18-25個核苷酸為宜；兩條引物之間（尤其在3端）的序列不能有互補，

35、以免形成引物二聚體；引物的堿基組成應平衡，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積。PCR擴增中得退火溫度是根據(jù)引物的Tm值決定的，兩條引物的Tm值不能差別太大；根據(jù)需要，可以在合成引物時于其5端加修飾成分。1、長度：1530bp，其有效長度Ln=2(G十C)十(A十T)一般不大于38，否則PCR的最適延伸溫度會超過Taq酶的最佳作用溫度(74度)，從而降低產(chǎn)物的特異性。2、G十c含量：應在45%一55%之間，PCR擴增中的復性溫度一般是較低Tm值引物的Tm值減去510度。引物長度小于20時，其Tm恒等于4×(G十C)十2×(A十T)。3、堿基分布的隨機性：應避免連續(xù)出現(xiàn)4個以上的單一堿

36、基。尤其是不應在其3端出現(xiàn)超過3個的連續(xù)G或C，否則會使引物在G十C富集序列區(qū)錯誤引發(fā)。4、引物自身：不能含有自身互補序列，否則會形成發(fā)夾樣二級結構。5、引物之間：兩個引物之間不應有多于4個的互補或同源堿基，不然會形成引物二聚體，尤應避免3端的互補重疊。同濟醫(yī)科大學2003年分子生物學（專業(yè)）（博士） 考試科目：分子生物學（專業(yè)課）科目代碼：949一、將下列名詞譯成英文并解釋（20分）1、基因組2、操縱子3、反式作用因子4、癌基因5、鋅指結構6、聚合酶鏈反應一種在體外擴增DNA片段的重要技術。當存在模板DNA、底物、上下游引物和耐熱的DNA聚合酶時，經(jīng)過多次“變性-復性-延伸反應”的循環(huán)過程，

37、模板DNA可擴增至幾百萬倍。7、限制酶8、多克隆位點9、基因治療10、質粒二、試述真核基因組結構的基本特點。（20分）1.真核生物基因組DNA與結合形成染色體，儲存于內(nèi)，除配子細胞外，體細胞內(nèi)的基因的基因組是雙份的（即雙倍體,diploid），即有兩份同源的基因組。2.真核細胞基因轉錄產(chǎn)物為單順反子。一個結構基因經(jīng)過轉錄和翻譯生成一個mRNA分子和一條多肽鏈。3.存在重復序列，重復次數(shù)可達百萬次以上。4.基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域。5.大部分基因含有內(nèi)含子，因此，基因是不連續(xù)的。6.基因組遠遠大于的基因組，具有許多復制起點，而每個復制子的長度較小。原核生物基因組特點1. 基因組多數(shù)由環(huán)狀

38、雙鏈DNA分子組成2.具有類核結構3.操縱子結構(operon):功能上相關的幾個結構基因往往串聯(lián)排列在一起,受上游共同的調控區(qū)和下游轉錄終止信號所構成的基因表達單位.轉錄時,幾個基因轉錄在一條mRNA鏈上,再分別翻譯成各自不同的蛋白質.4.結構基因中無內(nèi)含子,與真核細胞的主要區(qū)別.編碼區(qū)基因占基因組比例約50%左右,存在間隔區(qū).5.DNA絕大部分用于編碼蛋白質,結構基因多為單拷貝,6.結構基因中無重疊現(xiàn)象(一段DNA序列編碼幾種蛋白質多肽鏈)7.基因組中存在重復序列8.基因組中存在可移動的DNA序列,如轉座子和質粒等三、試述重組DNA的基本過程。（20分）DNA重組（DNA recombin

39、ation）指分子內(nèi)或分子間發(fā)生的的重新共價組合過程。包括同源重組、特異位點重組和轉座重組等類型，廣泛存在于各類生物。體外通過人工DNA重組可獲得重組體DNA，是基因工程中的.四、真核生物基因表達在轉錄水平上是如何調控的？（20分）五、試述基因治療研究的主要內(nèi)容或策略。（20分）基因治療（gene therapy）是指將外源正常基因導入靶細胞，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療目的。也就是將外源基因通過基因轉移技術將其插入病人的適當?shù)募毎校雇庠椿蛑圃斓漠a(chǎn)物能治療某種疾病。包括體細胞治療和生殖細胞治療。一般程序：1.治療基因的選擇：正常基因代替致病基因，在細胞內(nèi)產(chǎn)生有正常功

40、能的蛋白質。2. 治療基因導入宿主細胞內(nèi)： 非病毒導入和病毒導入3. 靶細胞的選擇：一般為體細胞，病變細胞或者正常免疫細胞。禁用生殖細胞。成功的有造血干細胞，皮膚成纖維細胞，肝細胞，肌細胞。策略有基因矯正，基因置換，基因增補，基因沉默基因治療的策略(一)基因矯正 糾正致病基因中的異常堿基，而正常部分予以保留。(二)基因置換 指用正?；蛲ㄟ^同源重組技術，原位替換致病基因，使細胞內(nèi)的DNA 完全恢復正常狀態(tài)。(三)基因增補 把正?；驅塍w細胞，通過基因的非定點整合使其表達，以補償缺陷基因的功能，或使原有基因的功能得到增強，但致病基因本身并未除去(四)基因失活 將特定的（、)和核酶導入細胞，在轉

41、錄和翻譯水平阻斷某些基因的異常表達，而實現(xiàn)治療的目的。(五)“自殺基因” 在某些病毒或細菌中的某基因可產(chǎn)生一種酶，它可將原無細胞毒或低毒藥物前體轉化為細胞毒物質，將細胞本身殺死，此種基因稱為“自殺基因”。(六)免疫基因治療 免疫基因治療是把產(chǎn)生抗病毒或免疫力的對應與抗原決定族基因導入機體細胞，以達到治療目的。如(cytokine)和表達等。(七)耐藥基因治療 耐藥基因治療是在腫瘤治療時，為提高機體耐受的能力，把產(chǎn)生抗藥物的基因導入人體細胞，以使機體耐受更大的化療。如向骨髓干細胞導入多藥中的mdr-1。同濟醫(yī)科大學2004年分子生物學（博士）一、名詞解釋 2.5分×20個，中英文各10

42、假基因，包裝細胞，等包裝細胞（pakaging cell）：包裝細胞是通過基因工程技術對細胞進行修飾，使其產(chǎn)生病毒結構基因gag、pol、env所編碼的蛋白，為載體包裝成為重組病毒提供全面的病毒蛋白，同時，該包裝細胞并不能轉錄產(chǎn)生編碼完整病毒的基因組RNA，一句話，包裝細胞本身不能產(chǎn)生任何形式的病毒顆粒。二、簡答題（10分題）1.如何得到IL-2的基因工程產(chǎn)物2.癌基因在信號傳導中的分類1.表達生長因子樣物質：某些癌基因可以編碼生長因子樣的活性物質，例如，sis癌基因的表達產(chǎn)物與PDGF鏈高度同源，int-2癌基因蛋白與成纖維細胞生長因子結構相似。此類癌基因激活可使生長因子樣物質生成增多，以自

43、分泌或旁分泌方式刺激細胞增殖。在人神經(jīng)膠質母細胞瘤、骨肉瘤和纖維肉瘤中均可見sis基因異常表達。2.表達生長因子受體類蛋白 某些癌基因可以表達生長因子受體的類似物，通過模擬生長因子的功能受體起到促增殖的作用。例如，erb-B癌基因編碼的變異型EGF受體，缺乏與配體結合的膜外區(qū)，但在沒有EGF存在的條件下，就可持續(xù)激活下游的增殖信號。在人乳腺癌、肺癌、胰腺癌和卵巢腫瘤中已發(fā)現(xiàn)EGF受體的過度表達；在卵巢腫瘤亦可見PDGF受體高表達，且這些受體的表達與預后呈負相關。 3.表達蛋白激酶類 某些癌基因可通過編碼非受體TPK或絲/蘇氨酸激酶類影響細胞信號轉導過程。例如，src癌基因產(chǎn)物具有較高的TPK活

44、性，在某些腫瘤中其表達增加，可催化下游信號轉導分子的酪氨酸磷酸化，促進細胞異常增殖。此外，還使糖酵解酶磷酸化，糖酵解酶活性增加，糖酵解增強是腫瘤細胞的代謝特點之一。mos、raf癌基因編碼絲/蘇氨酸蛋白激酶類產(chǎn)物，其可促進MAPK磷酸化，進而促進核內(nèi)癌基因表達。 4.表達信號轉導分子類 ras癌基因編碼的21kD小分子G蛋白Ras，可在Sos催化下通過與GTP結合而激活下游信號轉導分子。在30%的人腫瘤組織已發(fā)現(xiàn)有不同性質的ras基因突變，其中突變率較高的是甘氨酸12、甘氨酸13或谷氨酰胺61為其他氨基酸殘基所取代。變異的Ras與GDP解離速率增加或GTP酶活性降低，均可導致Ras持續(xù)活化，促

45、增殖信號增強而發(fā)生腫瘤。例如，人膀胱癌細胞ras基因編碼序列第35位核苷酸由正常G突變?yōu)镃，相應的Ras蛋白甘氨酸12突變?yōu)槔i氨酸，使其處于持續(xù)激活狀態(tài)。 5.表達核內(nèi)蛋白類 某些癌基因如myc、fos、jun的表達產(chǎn)物位于核內(nèi)，能與DNA結合，具有直接調節(jié)轉錄活性的轉錄因子樣作用。過度表達的癌基因可引起腫瘤發(fā)生，如高表達的jun蛋白與fos蛋白與DNA上的AP-1位點結合，激活基因轉錄，促進腫瘤發(fā)生。綜上所述，細胞信號轉導障礙對疾病的發(fā)生發(fā)展具有多方面的影響，其發(fā)生原因是多種多樣的，基因突變、細菌毒素、細胞因子、自身抗體和應激等均可以造成細胞信號轉導過程的原發(fā)性損傷，或可引起它們的繼發(fā)性改變

46、。3.原核基因組與真核基因組的區(qū)別1、真核生物基因組指一個物種的單倍體染色體組(1n)所含有的一整套基因。還包括葉綠體、線粒體的基因組。 原核生物一般只有一個環(huán)狀的DNA分子，其上所含有的基因為一個基因組。2、原核生物的染色體分子量較小，基因組含有大量單一順序（unique-sequences），DNA僅有少量的重復順序和基因。真核生物基因組存在大量的非編碼序列。包括：.內(nèi)含子和外顯子、.基因家族和假基因、重復DNA序列。真核生物的基因組的重復順序不但大量，而且存在復雜譜系。3、原核生物的細胞中除了主染色體以外，還含有各種質粒和轉座因子。質粒常為雙鏈環(huán)狀DNA，可獨立復制，有的既可以游離于細胞

47、質中，也可以整合到染色體上。轉座因子一般都是整合在基因組中。真核生物除了核染色體以外，還存在細胞器DNA，如線粒體和葉綠體的DNA，為雙鏈環(huán)狀，可自主復制。有的真核細胞中也存在質粒，如酵母和植物。4、原核生物的DNA位于細胞的中央，稱為類核（nucleoid）。真核生物有細胞核，DNA序列壓縮為染色體存在于細胞核中。5、真核基因組都是由DNA序列組成，原核基因組還有可能由RNA組成，如RNA病毒。三、選做題（10分題）1.PCR基本原理，主要特點，及兩個衍生的PCR技術原理一種在體外擴增DNA片段的重要技術。當存在模板DNA、底物、上下游引物和耐熱的DNA聚合酶時，經(jīng)過多次“變性-復性-延伸反

48、應”的循環(huán)過程，模板DNA可擴增至幾百萬倍。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點；能在一個試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時內(nèi)擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；2.基因治療的策略或主要內(nèi)容，并舉例說明?；境绦?(一)治療性基因的獲得(二)基因載體的選擇(三)靶細胞的選擇(四)基因轉移方法(五)轉導細胞的選擇鑒定(六)回輸體內(nèi)利用DNA重組技術修復患者體內(nèi)有缺陷的基因，恢復細胞的正常功能，達到治療的目的。(一)基因矯正 糾正致病基因中的異常堿基，而正常部分予以保留。鐮刀狀貧血，糾正點突變(二)基因置換 指用正?；蛲ㄟ^同源重組技術，原

49、位替換致病基因，使細胞內(nèi)的DNA 完全恢復正常狀態(tài)。目前還不夠理想。(三)基因增補 把正常基因導入體細胞，通過基因的非定點整合使其表達，以補償缺陷基因的功能，或使原有基因的功能得到增強，但致病基因本身并未除去。免疫缺陷病?？贵w，細胞因子的基因導入腫瘤細胞，激活免疫應答，提高機體免疫力。(四)基因失活 將特定的（、)和核酶導入細胞，在轉錄和翻譯水平阻斷某些基因的異常表達，而實現(xiàn)治療的目的?？鼓[瘤。(五)“自殺基因” 在某些病毒或細菌中的某基因可產(chǎn)生一種酶，它可將原無細胞毒或低毒藥物前體轉化為細胞毒物質，將細胞本身殺死，此種基因稱為“自殺基因”。Fas/Fas/L(六)免疫基因治療 免疫基因治療是

50、把產(chǎn)生抗病毒或免疫力的對應與抗原決定族基因導入機體細胞，以達到治療目的。如(cytokine)和表達等。(七)耐藥基因治療 耐藥基因治療是在腫瘤治療時，為提高機體耐受的能力，把產(chǎn)生抗藥物的基因導入人體細胞，以使機體耐受更大的化療。如向骨髓干細胞導入多藥中的mdr-1。細胞凋亡是細胞在一定條件下接受刺激信號并受基因調控的一種自主性、程序性死亡過程?？梢园l(fā)生在生理和病理條件下。關于細胞凋亡的機制，在哺乳動物細胞中主要有以下幾條通路：死亡受體介導的細胞凋亡途徑，線粒體介導的凋亡途徑，內(nèi)質網(wǎng)介導的細胞凋亡途徑，粒酶介導的細胞凋亡途徑，Anoiki介導的細胞凋亡途徑。另外，這幾條通路后期的共同途徑是胱天

51、蛋白酶家族激活。1  凋亡受體介導的細胞凋亡途經(jīng) (外部途徑)1.1 受體Fas為代表介導的信號轉導途徑 該途徑由死亡受體Fas為代表介導啟動，死亡信號誘導復合體（deathinducing signal complex，DISC）的形成是級聯(lián)反應的關鍵步驟1.2 腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis facter receptor ，TNFR）為代表介導的信號轉導途徑 。該途徑由死亡受體TNFR為代表介導啟動。腫瘤壞死因子受體(TNFRs) 是具有代表性的最大的死亡受體家族，胞內(nèi)區(qū)都具有轉導細胞死亡信號所必需的一段高度同源性的氨基酸序列，即DD。TNF主要是由感染而活化的

52、巨噬細胞和T細胞產(chǎn)生，通過其細胞表面受體TNFR和TNFR介導細胞凋亡。下游caspase的級聯(lián)反應導致細胞凋亡。線粒體裂解。1.3  TRAIL信號轉導通路  目前已發(fā)現(xiàn)了兩類TNF相關凋亡誘導配體(TNF related apoptosis induced ligand，TRAIL)受體。含有死亡結構域2. 線粒體介導的細胞凋亡途徑JNK信號轉導通路。在細胞凋亡過程中cyt c的釋放是線粒體外膜通透性增高的結果。JNKP38和細胞外信號調節(jié)激酶（extracellular signalregulated kinase，ERK）的動態(tài)平衡決定了細胞的存活與凋亡。前者主要促

53、細胞凋亡，后者主要促細胞存活。3. 內(nèi)質網(wǎng)介導細胞凋亡的途徑 鈣離子在內(nèi)質網(wǎng)介導細胞凋亡途徑中起主要作用包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質譜分析及非凝膠技術。雙向凝膠電泳雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離，把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。由于雙向電泳技術在蛋白質組與醫(yī)學研究中所處的重要位置，它可用于蛋白質轉錄及轉錄后修飾研究，蛋白質組的比較和蛋白質間的相互作用，細胞分化凋亡研究，致病機制及耐藥機制的研究，療效監(jiān)測，新藥開發(fā)，癌癥研究，蛋白純度檢查，小量蛋白純化，新替代疫苗的研制等許多方面。近年來經(jīng)過多方面改進

54、已成為研究蛋白質組的最有使用價值的核心方法。等電聚焦等電聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期問世的一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場中移動；當?shù)鞍踪|遷移至其等電點位置時，其靜電荷數(shù)為零，在電場中不再移動，據(jù)此將蛋白質分離。生物質譜生物質譜技術是蛋白質組學

55、研究中最重要的鑒定技術，其基本原理是樣品分子離子化后，根據(jù)不同離子之間的荷質比（M/E）的差異來分離并確定分子量。對于經(jīng)過雙向電泳分離的目標蛋白質用胰蛋白酶酶解（水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵）成肽段，對這些肽段用質譜進行鑒定與分析。目前常用的質譜包括兩種：基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜（MALDI-TOF-MS）和電噴霧質譜（ESI- MS）。飛行時間質譜MALDI 的電離方式是 Karas和Hillenkamp于1988年提出。MALDI的基本原理是將分析物分散在基質分子（尼古丁酸及其同系物）中并形成晶體，當用激光（337nm的氮激光）照射晶體時，基質分子吸收激光能量，樣品解吸附

56、，基質-樣品之間發(fā)生電荷轉移使樣品分子電離。它從固相標本中產(chǎn)生離子，并在飛行管中測定其分子量，MALDI-TOF-MS一般用于肽質量指紋圖譜，非?？焖伲看畏治鲋恍?5min），靈敏（達到fmol水平），可以精確測量肽段質量，但是如果在分析前不修飾肽段，MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。電噴霧質譜（ESI-MS）ESI- MS是利用高電場使質譜進樣端的毛細管柱流出的液滴帶電，在N2氣流的作用下，液滴溶劑蒸發(fā)，表面積縮小，表面電荷密度不斷增加，直至產(chǎn)生的庫侖力與液滴表面張力達到雷利極限，液滴爆裂為帶電的子液滴，這一過程不斷重復使最終的液滴非常細小呈噴霧狀，這時液滴表面的電場非常強大，

57、使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進入質量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子，一般說來，肽段的混合物經(jīng)過液相色譜分離后，經(jīng)過偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質譜分析，給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是 分析時間一般較長。目前，許多實驗室兩種質譜方法連用，獲得有意義的蛋白質的肽段序列，設計探針或引物來獲得有意義的基因。隨著蛋白質組研究的深入，又有多種新型質譜儀出現(xiàn)，主要是在上述質譜儀的基礎上進行改進與重新組合克隆載體（Cloning Vector）：通常采用從病毒、質?；蚋叩壬锛毎蝎@取的DNA作為克隆載體，在載體上插入合適大小的外源DNA片段，并注意不能破壞載體的自我復制性質。將重組后的

58、載體引入到宿主細胞中，并在宿主細胞中大量繁殖。常見的載體有質粒，噬菌粒，酵母人工染色體。 對載體的要求：能在宿主細胞中復制繁殖，而且最好要有較高的自主復制能力。 容易進入宿主細胞，而且進入效率越高越好。 容易插入外來核酸片段，插入后不影響其進入宿主細胞和在細胞中的復制。這就要求載體DNA上要有合適的限制性核酸內(nèi)切酶位點。 容易從宿主細胞中分離純化出來， 這才便于重組操作。 有容易被識別篩選的標志，當其進入宿主細胞、或攜帶著外來的核酸序列進入宿主細胞都能容易被辨認和分離出來。這才介于克隆操作真核載體：能攜帶插入的外源核酸序列進入真核細胞中復制的載體。原核表達一般周期短，但蛋白的活性不能確定。真核表達經(jīng)過糖基化，磷酸化，和目的蛋白相似性高，周期要長，往往有的還有養(yǎng)細胞，主要是因為原核和真核表達系統(tǒng)所需的表達元件不同。比如說