植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物器官的培養(yǎng)

1、 第三章 培養(yǎng)物的脫分化與再分化 理論根底：1、植物細胞的全能性：2、植物細胞的全能性應(yīng)用：用人為的方法創(chuàng)造出一個適合于生長發(fā)育的理想條件無菌條件、碳源、無機營養(yǎng)、有機營養(yǎng)、植物生長調(diào)節(jié)劑、ph、溫度光照等，使細胞的全能性得到充分發(fā)揮。一般情況處于無菌條件，靠人工的營養(yǎng)及激素條件進行代謝，使細胞處于異樣狀態(tài)，一個分生組織可通過三個途徑實現(xiàn)細胞的全能性。1由分生組織直接分生芽而到達快速繁殖的目的，這種情況極少發(fā)生細胞無性變異；2由分生組織形成愈傷組織，經(jīng)過分化實現(xiàn)細胞全能性；3游離細胞或原生質(zhì)體形成胚狀體，又胚狀體直接重建完整植株。2022/7/21在植物組織培養(yǎng)中，主要目標(biāo)是誘導(dǎo)愈傷組織的形成

2、和形態(tài)的發(fā)生，使一個離體的細胞、一塊組織或一個器官的細胞，通過脫分化形成愈傷組織，并由愈傷組織再分化形成植物體。因此，脫分化、再分化是植物組織培養(yǎng)中必不可少的兩個根本過程。脫分化：指已分化的外植體細胞組織、器官，在切割損傷和培養(yǎng)物內(nèi)外因素的共同作用下，逐漸喪失其原有的分化結(jié)構(gòu)和功能，最后形成細胞團或愈傷組織的過程。再分化那么是指離體培養(yǎng)物由脫分化狀態(tài)再度分化的過程。2022/7/223、外植體的脫分化：外植體細胞應(yīng)激于損傷和離體培養(yǎng)而出現(xiàn)的脫分化，使培養(yǎng)物細胞在結(jié)構(gòu)上可見到的第一個變化。脫分化的細胞在一定條件下可進行不斷分裂和生長，也可不經(jīng)分裂而直接在分化為其他類型的細胞或胚狀體。與脫分化 有

3、關(guān)的因子及其作用：1損傷刺激，損傷首先導(dǎo)致外植體產(chǎn)生生化反響，其次導(dǎo)致呼吸活性的變化，還會導(dǎo)致很多酶活性的增加。2培養(yǎng)細胞的異質(zhì)性，異質(zhì)性細胞對培養(yǎng)條件刺激有不同的敏感性，能脫分化以至分裂 3生長物質(zhì)的影響，參加一些植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，可導(dǎo)致外植體細胞在細胞生物學(xué)上與細胞分裂有關(guān)的一些強烈變化 4光線的影響2022/7/234、愈傷組織的形成與調(diào)控：1愈傷組織的形成過程，外植體中已分化的活細胞，在外源激素的誘導(dǎo)下通過脫分化后形成愈傷組織，這一過程可分為3個時期a誘導(dǎo)期，使外植體細胞進行分裂準(zhǔn)備的時期，這一時期外植體細胞大小沒有多大變化，但細胞內(nèi)合成代謝活潑，細胞核體積明顯增大。誘導(dǎo)期的長短有一系

4、列內(nèi)外因素決定b分裂期，經(jīng)誘導(dǎo)期之后，外植體外層細胞開始迅速分裂，但外植體中間局部的細胞不分裂，這一時期由于細胞分裂的速度大大超過了細胞伸展的速率，細胞體積迅速變小，逐漸回復(fù)到分生狀態(tài)，這個過程即為脫分化。脫分化細胞不斷分裂，從而形成了愈傷組織。愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)的枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累必須轉(zhuǎn)到新鮮的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，這個過程叫做繼代。通過繼代培養(yǎng)，可是愈傷組織無限期的保持在局部化的增殖狀態(tài)，假設(shè)讓愈傷組織留在原來的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)而不繼代，他們那么會不可防止的發(fā)生分化處于分裂期的愈傷組織的特點：細胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，顏色淺而透明c形成期，細胞分裂由原來的

5、局限在組織外緣的平周分裂轉(zhuǎn)為組織內(nèi)部較深層局部細胞的分裂，結(jié)果形成了瘤狀或片狀的擬分生組織，稱為分生組織結(jié)節(jié)，分生組織結(jié)節(jié)可以成為遇上組織的生長中心，或進一步分化為維管組織結(jié)節(jié)2022/7/245、愈傷組織的生長于調(diào)控：試驗說明愈傷組織的生長發(fā)生在不與培養(yǎng)基接觸的外表。優(yōu)良的愈傷組織至少具備以下特征：1有旺盛的自我增殖能力2容易散碎3具有高度的胚性或再分化能力4經(jīng)過長期保存而不喪失胚性。為到達上述目的，在誘導(dǎo)愈傷組織時通常采取以下措施：1選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w2選擇正確的培養(yǎng)基3采取特殊的物理或化學(xué)因素來改變愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件2022/7/256、培養(yǎng)物的再分化：有兩種途徑1胚胎的發(fā)生2直

6、接分化器官，再形成植株。大多為 第二種情況，即先出現(xiàn)細胞分化和組織分化，進而分化器官，形成植株。細胞分化和組織分化，細胞分化是指導(dǎo)致細胞形成不同結(jié)構(gòu)、引起功能改變或潛在發(fā)育方式改變的過程。組織分化指在細胞分化的根底上，進一步分化出各種各樣的組織2022/7/267、器官分化和植株的形成，器官分化的結(jié)果是導(dǎo)致器官原基的形成，不同的器官原基那么會分化成不同的器官，分化的器官中最主要是莖和根，它們分化的結(jié)果常導(dǎo)致完整植株的形成。在組織培養(yǎng)中通過芽或根形成植株的方式有三種：1先產(chǎn)生芽，芽伸長后再在莖的基部長根形成完整的植株2先長根，再長芽3在愈傷組織的不同部位形成根和芽2022/7/27 第四章 植物

7、器官的培養(yǎng) 器官培養(yǎng) 包括離體的根、莖、葉、花器和果實的培養(yǎng)。以器官作為外植體進行離體培養(yǎng)，是植物組織培養(yǎng)中最主要的一個方面，進行的植物種類最多，應(yīng)用的范圍也最廣。2022/7/28植物器官的培養(yǎng) 器官培養(yǎng)的意義： 1. 器官培養(yǎng)是研究器官生長、營養(yǎng)代謝、生理生化、組織分化和形態(tài)建成的最好材料和方法； 2.器官培養(yǎng)在生產(chǎn)實踐上具有重要的應(yīng)用價值. 2022/7/29植物器官的培養(yǎng) 如利用莖、葉和花器培養(yǎng)建立的試管苗，可在短期內(nèi)提高繁殖速率，進行名貴品種的快速繁殖； 利用莖尖培養(yǎng)可得到脫毒試管苗，解決品種的退化問題，提高產(chǎn)量和質(zhì)量； 將植物器官作誘變處理，用器官培養(yǎng)可得到突變株，進行細胞突變育種

8、。2022/7/210植物器官的培養(yǎng)植 物 器 官 培 養(yǎng)營養(yǎng)器官培養(yǎng)生殖器官培養(yǎng)根培養(yǎng)莖培養(yǎng)（ 包括莖尖、莖段）葉培養(yǎng)（包括葉原基、葉柄、 葉 鞘、葉片、子葉）花培養(yǎng) （包括花托、花瓣、花絲、 花柄、子房、花藥）種子培養(yǎng)（包括成熟與未成熟）胚胎培養(yǎng)（包括幼胚、成熟胚、 胚珠、 子房、胚乳培養(yǎng) ）2022/7/211植物器官的培養(yǎng)第一節(jié) 營養(yǎng)器官的培養(yǎng)一、離體根的培養(yǎng)二、莖尖的培養(yǎng)三、莖段的培養(yǎng)四、離體葉的培養(yǎng)2022/7/212植物器官的培養(yǎng)第一節(jié) 營養(yǎng)器官的培養(yǎng) 一、離體根的培養(yǎng) 一 意義： 生理代謝研究的優(yōu)良實驗體系 研究器官分化形態(tài)建成的良好體系 建立快速生長的根無性系 進行誘變育種2

9、022/7/213營養(yǎng)器官的培養(yǎng)根的培養(yǎng) 二 培養(yǎng)方法 1. 培養(yǎng)基選擇 White培養(yǎng)基；2/3或1/2 MS 和 B5培養(yǎng)基注：離體根生長要求 提供全部必需元素，蔗糖、硝態(tài)氮效果好，參加B1、B6最重要，生長素對離體根影響不一致。培養(yǎng)溫度2527，暗光培養(yǎng)。2022/7/214營養(yǎng)器官的培養(yǎng)根的培養(yǎng)2. 無性繁殖系的建立 種子消毒 接種待根伸長后從根尖一端切取長1.2cm的根尖接種于培養(yǎng)基發(fā)育出側(cè)根待側(cè)根生長約1周后切取側(cè)根的根尖進行擴大培養(yǎng)又迅速生長并長出側(cè)根切下進行培養(yǎng)，如此反復(fù)得到從單個根尖衍生而來的離體根的無性系。 3. 培養(yǎng)條件 暗光和溫度25-27。2022/7/215根無性繁

10、殖系的建立根無性繁殖系無菌種子1.2cm接后1周側(cè)根反復(fù)轉(zhuǎn)接2022/7/216營養(yǎng)器官的培養(yǎng)根的培養(yǎng) 4. 植株再生培養(yǎng) 根段的離體培養(yǎng)也可以用來再生植株。 第一步誘導(dǎo)形成愈傷組織。 第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽的分化、在愈傷組織上分化成小植株。 離體根愈傷組織分化芽再生植株再分化培養(yǎng)基脫分化培養(yǎng)基2022/7/217植物器官的培養(yǎng)二、莖尖的培養(yǎng)2022/7/218營養(yǎng)器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng) 一莖尖培養(yǎng)概念及類型 莖尖培養(yǎng)：切取莖的先端局部或莖尖分生組織局部，進行無菌培養(yǎng)。 莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小可分為： 微莖尖培養(yǎng): 帶有1-2個葉原基的生長錐, 其長度不超過 普通莖尖培養(yǎng)：較大的莖

11、尖(如幾mm到幾十mm)、芽尖及側(cè)芽 這里主要講普通莖尖培養(yǎng)。這種培養(yǎng)技術(shù)簡單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時間短 2022/7/219營養(yǎng)器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)的意義： 普通莖尖培養(yǎng)技術(shù)簡單，操作方便，易成活，成苗時間短，加快繁殖。 微莖尖培養(yǎng)可獲得脫毒苗；2022/7/220營養(yǎng)器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)二莖尖培養(yǎng)方法及步驟取材材料處理及消毒培 養(yǎng)接種馴化移栽2022/7/221營養(yǎng)器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)直接取材：在生長旺盛、枝條健壯、無病的母株上選生長不久、雜菌污染少的頂梢12cm取前可噴殺菌藥，可頂芽或側(cè)芽。從試管苗獲取。1、 取材取1-2頂梢2022/7/222營養(yǎng)器官的培養(yǎng)莖尖的

12、培養(yǎng)2、材料處理及消毒 將采集到的莖尖切成長去葉休眠芽預(yù)先剝除鱗片 流水沖洗2-4h 75的酒精中處理30s 稀釋20倍的次氯酸鈉中浸5-8min(取自老枝條上的可適當(dāng)延長時間 用無菌水沖洗數(shù)次，準(zhǔn)備接種。 2022/7/223植物器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng) 3、接種 接種前再剝掉一些葉片，使莖尖0.5cm 接種 要求：隨切隨接，動作迅速。 亦可將切下莖尖材料在15% VC液中浸一下。2022/7/224植物器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)4、 培養(yǎng)的方法和程序1培養(yǎng)基 根本培養(yǎng)基 MS、White、 B5、 Heller培養(yǎng)基。 蔗糖作碳源效果好，濃度23%。 激素 2，4-D，IAA， NAA 和有機添加m

13、g/L為宜， 不要太高。2022/7/225植物器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)生長太慢：莖尖不增大變綠細胞逐漸老化休眠 原因: 生長素濃度太低；溫度過低或過高；生長太快：莖尖迅速增大愈傷組織喪失成苗能力 原因: 生長素濃度過高；光照太弱或溫度太高； 生長正常：莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織，莖尖顏色 逐漸變綠，并伸長，葉原基發(fā)育成可見的小葉， 進而形成小苗。莖尖生長狀態(tài)2022/7/226植物器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)2初代培養(yǎng)條件 每天 光照16h， 照度1500-30001x， 溫度252 2022/7/227植物器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)3 繼代培養(yǎng) 莖尖長成的新梢切成小段增殖培養(yǎng)基中 1個月左右新梢又可切

14、成小段再轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)基建立和維持了莖尖無性系。 即微型扦插 繼代培養(yǎng)可用MS培養(yǎng)基。2022/7/228植物器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng) 4 誘導(dǎo)生根 采用I2MS培養(yǎng)基 參加一定的生長素類調(diào)節(jié)物質(zhì)，如NAA、IBA等。新梢基部浸入50或100mg/l的IBA溶液處理4-8h，然后轉(zhuǎn)移到無激素的生根培養(yǎng)基中。2022/7/229植物器官的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)(5) 馴化移栽入土 在生根培養(yǎng)1個月左右生長健壯而興旺的根系煉苗移栽 管理溫、光、濕、氣。2022/7/230植物營養(yǎng)器官的培養(yǎng)三、莖段培養(yǎng)一定義二目的三培養(yǎng)步驟2022/7/231植物器官的培養(yǎng)莖段的培養(yǎng) 一定義： 指不帶芽和帶1個以上定芽或不定芽包括

15、塊莖、球莖在內(nèi)的幼莖切段的無菌培養(yǎng)。 2022/7/232植物器官的培養(yǎng)莖段的培養(yǎng)二意義 ： 快速繁殖； 探討莖細胞的生理特點 進行育種上的篩選突變體的過程。2022/7/233植物器官的培養(yǎng)莖段的培養(yǎng)三培養(yǎng)步驟 1. 材料的選擇和處理 1 取材：當(dāng)年生嫩枝去葉剪成3-4cm的小段自來水沖洗1-3h 注：生長期取芽，外植體取枝條頂部或中部莖段。2022/7/234植物器官的培養(yǎng)莖段的培養(yǎng)2消毒與接種： 將材料切割成1cm長短無菌條件下用75酒精滅菌30-60s 升汞浸泡3-8min飽和漂白粉浸泡10-20min 無菌水沖洗數(shù)次以備接種2022/7/235植物器官的培養(yǎng)莖段的培養(yǎng)2. 培養(yǎng) (1

16、)培養(yǎng)基的選擇： MS+3蔗糖瓊脂+激素 促進腋芽增殖6-BAKt和Ze (2)培養(yǎng)條件： 保持25左右，給予充分的光照和光期 2022/7/236植物器官的培養(yǎng)莖段的培養(yǎng)(3)繼代培養(yǎng)： 途徑一：促進腋芽的快速生長 優(yōu)點：不會產(chǎn)生變異，方法簡便，每年從一個芽 可增殖10萬株以上 途徑二：誘導(dǎo)形成大量不定芽。 優(yōu)點：產(chǎn)生變異。 繼代增殖過程注意選用培養(yǎng)基和生長調(diào)節(jié)劑。2022/7/237植物器官的培養(yǎng)莖段的培養(yǎng)4生根培養(yǎng) 目的：使再生的大量試管苗形成根系，獲得完整的植株。 培養(yǎng)基選擇：1/2，1/3或1/4的MS，B5培養(yǎng)基或White培養(yǎng)基， 附加生長素濃度，IBA和IAA可稍高而降低或除去

17、細胞分裂素。 最好添加活性炭，以促進生根。 2022/7/238植物器官的培養(yǎng)莖段的培養(yǎng) 3. 移植 移植是一個由異養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)樽责B(yǎng)的過程。 試管苗煉苗取苗洗凈瓊脂小心移栽苗期管理初期濕度要大，基質(zhì)通氣濕潤，保濕保溫2022/7/239植物營養(yǎng)器官的培養(yǎng)一定義二意義三培養(yǎng)方法四、離體葉的培養(yǎng)2022/7/240營養(yǎng)器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng) 一定義： 離體葉培養(yǎng)指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉在內(nèi)的葉組織的無菌培養(yǎng)。 它大多經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再由愈傷組織分化出莖和根。 其中葉片培養(yǎng)是一個典型的代表。 2022/7/241營養(yǎng)器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng)二意義： 1. 是繁殖稀有名貴品種的有效手段； 2.

18、 可用于研究形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成等理論問題。2022/7/242營養(yǎng)器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng)三葉片的離體培養(yǎng)方法 發(fā)育方式： 葉片培養(yǎng)再生成完整植株有兩種方式： 是直接誘導(dǎo)形成芽和根完整植株； 是先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再經(jīng)愈傷組織分化形成芽和根完整植株。 其中，以第二種方式最為常見。2022/7/243葉片離體培養(yǎng)發(fā)育方式成苗途徑葉原基葉鞘葉片子葉葉柄愈傷組織莖和根試管苗 不定芽2022/7/244營養(yǎng)器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng) 1. 材料選擇及滅菌 取植物的幼嫩葉片，切割成適當(dāng)大小23cm，在流水中沖洗干凈。再用70酒精浸泡約10s 飽和漂白粉液中浸3-15min，或在升汞中浸3-5min 無

19、菌水沖洗數(shù)次無菌的干濾紙上吸干水分接種。 注：細嫩與成熟葉片消毒時間不同2022/7/245營養(yǎng)器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng)接種 外植體大小：2 薄片葉柄、子葉上表皮朝上接種培養(yǎng)基。最好帶葉脈，注意極性2022/7/246營養(yǎng)器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng)3. 培養(yǎng)1培養(yǎng)基： MS、B5、White 、N6；蔗糖3%； 2.4D利于愈傷組織形成，NAA抑制芽形成，利于根發(fā)生，KT、6-BA利于芽形成。 愈傷組織誘導(dǎo)：1mg/L； 分化培養(yǎng)：CTK 2 mg/L； 生根培養(yǎng)：NAA 0.51.0 mg/L 2022/7/247植物器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng) 3. 培養(yǎng) (2)培養(yǎng)過程：培養(yǎng)約2周至4周形成愈傷組織再分化

20、培養(yǎng)基上附加6-BA 2mgL 進行分化培養(yǎng)約10d左右，愈傷組織開始轉(zhuǎn)綠出現(xiàn)綠色芽點發(fā)育成無根苗生根培養(yǎng)基附加 NAA0.5-l mg/L 發(fā)育形成完整植株。2022/7/248植物器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng)(3)培養(yǎng)條件： 溫度：252 光照時間：10-12h， 光照強度：1500-3000 Lx 。2022/7/249植物器官的培養(yǎng)葉片的培養(yǎng) 葉的培養(yǎng)比胚，莖尖和莖段培養(yǎng)難度大。 首先要選用易培養(yǎng)成功的葉組織，如幼葉比成熟葉易培養(yǎng)，子葉比葉片易培養(yǎng)。 其次要添加適當(dāng)?shù)纳L素和細胞分裂素，保證利于葉組織的脫分化和再分化。 2022/7/250植物器官的培養(yǎng)第二節(jié) 生殖器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)二

21、、種子的培養(yǎng)三、胚胎的培養(yǎng)四、胚珠培養(yǎng)五、子房培養(yǎng)六、胚乳培養(yǎng)2022/7/251生殖器官的培養(yǎng)花器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)2022/7/252生殖器官的培養(yǎng)花器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)2022/7/253生殖器官的培養(yǎng)花器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)花蕾 1. 定義： 花器官培養(yǎng)指整個花器及其組成局部如花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥等的無菌培養(yǎng)。 2022/7/254生殖器官的培養(yǎng)花器官的培養(yǎng)2、意義：通過離體花芽培養(yǎng)可了解整體植物和內(nèi)源激素在花芽性別決定中所起的作用可以了解花器各局部對果實和種子發(fā)育的作用內(nèi)、外源激素在果實種子發(fā)育過程中的調(diào)控作用生產(chǎn)上也可用于珍貴品種的擴大繁殖。2022/

22、7/255生殖器官的培養(yǎng)花器官的培養(yǎng) 3. 培養(yǎng)方法 (1) 取材、消毒 從健壯植株上取未開放的花蕾 75酒精浸潤約30s 飽和漂白粉浸泡10-15min或升汞中浸3-5min 無菌水沖洗數(shù)次接種。 2022/7/256生殖器官的培養(yǎng)花器官的培養(yǎng)(2)接種花蕾培養(yǎng)：花梗插入培養(yǎng)基中。局部花器培養(yǎng)：切片接入培養(yǎng)基中。2022/7/257生殖器官的培養(yǎng)花器官的培養(yǎng)(3)培養(yǎng) 培養(yǎng)基：MS、B5。 附加生長素 NAA0.1 mg/L 和細胞分裂素 6-BA 2mg/L ，誘導(dǎo)形成愈傷組織或胚狀體，再分化培養(yǎng)成植株。2022/7/258植物器官的培養(yǎng)花器官的培養(yǎng)培養(yǎng)條件： 溫度：252 光照時間：10

23、-12h， 光照強度：1500-3000 Lx 培養(yǎng)約1周，形成少量愈傷組織。再經(jīng)1個月就分化出綠色芽點，再切割轉(zhuǎn)接，可形成大量無根苗，經(jīng)長根成植株，用于繁殖。2022/7/259植物器官的培養(yǎng)二、種子培養(yǎng)2022/7/260生殖器官的培養(yǎng)種子的培養(yǎng)定義： 種子培養(yǎng)是指受精后發(fā)育完全的成熟種子和發(fā)育不完全的未成熟種子的無菌培養(yǎng)。2022/7/261生殖器官的培養(yǎng)種子的培養(yǎng)2. 意義 ： 可以打破種子休眠，促進萌發(fā)； 解決遠緣雜種敗育性，產(chǎn)生后代； 快速繁殖苗木； 優(yōu)點：植株分化容易，無菌操作方便2022/7/262生殖器官的培養(yǎng)種子的培養(yǎng) 3. 培養(yǎng)技術(shù) (1) 種子滅菌 種皮厚或不飽滿的種子

24、，宜用升汞消毒10-20min。幼嫩的或發(fā)育不全的種子，宜用飽和漂白粉消毒15-30min。假設(shè)種子上有絨毛或蠟質(zhì)，應(yīng)先用95酒精或吐溫40處理，提高消毒效果。對殼厚難萌發(fā)的種子，可去殼培養(yǎng)。2022/7/263生殖器官的培養(yǎng)種子的培養(yǎng)(2)培養(yǎng)基：A.促種子萌發(fā)用MS培養(yǎng)基，加或不加激素，誘導(dǎo)愈傷組織那么可參加6-BA或2,4-D。B.無胚乳種子應(yīng)適當(dāng)加生長素。C.一般糖濃度為1-3%。D.打破休眠可加GA，或在接種前浸種處理。2022/7/264生殖器官的培養(yǎng)種子的培養(yǎng)(3) 接種培養(yǎng) 接 種： 把種子按每瓶3-5粒放人培養(yǎng)瓶中，均勻排列 培養(yǎng)條件： 溫度20-28 1000-20001x

25、光強， 每天光照10-12h。2022/7/265植物器官的培養(yǎng) 植物胚胎培養(yǎng)是胚及胚器官(如子房、胚珠)在離體無菌條件下，使胚發(fā)育成幼苗的技術(shù)。 包括幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)、子房培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)等。三、胚胎的培養(yǎng)2022/7/266生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)胚胎培養(yǎng)已有近百年的歷史： 1904年的Haning最早成功地培養(yǎng)了蘿卜和辣椒的胚，并萌發(fā)形成小苗。 30年代成功地把蘭科植物的胚培養(yǎng)成小植株。 40年代在蘋果、桃、柑桔、梨、葡萄、山楂、馬鈴薯、甘藍與大白菜的種間雜種的胚胎培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)及子房與胚珠培養(yǎng)均取得了不同程度的進展。2022/7/267生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)一胚胎培養(yǎng)的意

26、義 克服遠緣雜種的不育性 ； 使胚發(fā)育不全的植物獲得后代 縮短育種年限 ； 研究與胚發(fā)育有關(guān)的內(nèi)外因素2022/7/268植物器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)二離體胚培養(yǎng) 離體胚培養(yǎng)包括胚胎發(fā)生過程中不同發(fā)育期的胚，一般可分為成熟胚和幼胚培養(yǎng)。2022/7/269生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)1. 成熟胚培養(yǎng) 指子葉期后至發(fā)育完全的胚。 培養(yǎng)較易成功，在含有大量無機元素和糖的根本培養(yǎng)基上，就能正常生長成幼苗。 將成熟或未成熟種子用70酒精進行幾秒鐘的外表消毒無菌水沖洗3-4次無菌條件下進行解剖，取出胚并接種在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上培養(yǎng)。2022/7/270生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng) 培養(yǎng)基： White Tukey MS

27、 無機鹽+糖(1-2%)+生長輔助物質(zhì)(激素、AA、活性炭、維生素等)2022/7/271植物器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng) 2. 幼胚未成熟胚培養(yǎng)： 幼胚是指子葉期以前的幼小胚。 由于幼胚培養(yǎng)在遠緣雜交育種上有極大的利用價值，其研究應(yīng)用越來越深入廣泛。幼胚培養(yǎng)技術(shù)：mm胚越小就越難培養(yǎng) 幼胚培養(yǎng)成功的有大麥、薺菜、甘蔗、甜菜、胡蘿卜等 2022/7/272生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)1未成熟胚胎的培養(yǎng)有三種不同的發(fā)育方式： a. 繼續(xù)進行正常的胚胎發(fā)育，維持“胚性生長； b. 早熟萌發(fā)，即培養(yǎng)后迅速萌發(fā)成幼苗； c. 胚在培養(yǎng)基中發(fā)生細胞增殖形成愈傷組織，并由此再分化形成多個胚狀體或芽原基。 2022/7

28、/273生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)2幼胚培養(yǎng)技術(shù) 幼胚培養(yǎng)的操作方法與成熟胚培養(yǎng)方法根本相同，值得注意的是切取幼胚必須在高倍解剖鏡下進行，操作時要細心，盡量取出完整的胚。 幼胚培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，是提供幼胚所必需的營養(yǎng)和環(huán)境條件。2022/7/274植物器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng) 通常存在的影響條件如下： a. 培養(yǎng)基 幼胚對培養(yǎng)基要求較高，常用的培養(yǎng)基有Tukey， Nitch、 MS，B5培養(yǎng)基； 需要較高的蔗糖濃度，以提供較高的滲透壓 2022/7/275生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)b. 生長調(diào)節(jié)物質(zhì) 不同植物的胚培養(yǎng)需要的生長物質(zhì)不同，如IAA可明顯促進向日葵胚的生長；IAA，Kt的共同作用可促進薺菜

29、幼胚的生長；一般認為IAA可使胚的長度增加；參加BA可提高胚的生存時機；2022/7/276生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)c. 天然提取物的作用 椰乳對胚培養(yǎng)有一定的促進作用番茄胚在含有50%椰乳的培養(yǎng)基中可維持生長 一些瓜類的胚乳提取物能促進胚生長的能力 2022/7/277生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)d. 溫光條件 對于大多數(shù)植物的胚來說，在25-30為宜早熟果樹如桃的種胚，必須經(jīng)過一定的低溫春化階段才能正常萌發(fā)生長，而馬鈴薯胚以20為好。光照可以促進某些植物胚的轉(zhuǎn)綠，利于胚芽生長，而黑暗那么利于胚根生長。因此以光暗交替培養(yǎng)較為有利。2022/7/278生殖器官的培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)5.其它條件 胚培養(yǎng)中除要求較高的蔗糖濃度、高滲透壓以外，還要求較高濃度的氨基酸及無機鹽。 2022/7/279植物器官的培養(yǎng)四、胚珠培養(yǎng)一定義： 胚珠培養(yǎng)是將授粉的子房在無菌條件下解剖后，取胚珠置于培養(yǎng)基培養(yǎng)的過程。有時也把胚珠連同胎座一起取下來培養(yǎng)。2022/7/280生殖器官的培養(yǎng)胚珠的培養(yǎng)柱頭花柱子房花?；ㄍ谢ńM成2022/7/281生殖器官的培養(yǎng)胚珠的培養(yǎng)胚囊卵細胞株心珠 孔反足細胞珠 被胚珠極核 株柄2022/7/282生殖器官的培養(yǎng)胚珠的培養(yǎng)二意義： 胚珠培養(yǎng)可以解決象蘭科植物成熟胚較小不易培養(yǎng)的問題。 另一方面在未受精的胚珠培養(yǎng)中，可誘發(fā)大孢子發(fā)育成單倍體，用于單倍體育種。