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1、會計學(xué)1科研項目的策劃與實施醫(yī)學(xué)科學(xué)研究入科研項目的策劃與實施醫(yī)學(xué)科學(xué)研究入門門 檢查各項準(zhǔn)備工作是否完善;檢查各項準(zhǔn)備工作是否完善; 確定實驗操作方法是否正確可行確定實驗操作方法是否正確可行 ; 獲得某些基礎(chǔ)數(shù)據(jù),確定合適的樣本數(shù)和必獲得某些基礎(chǔ)數(shù)據(jù),確定合適的樣本數(shù)和必要的統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù),以確保后續(xù)正式實驗的順利要的統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù),以確保后續(xù)正式實驗的順利進行;進行; 摸索最佳實驗條件;摸索最佳實驗條件; 初步檢驗假說。初步檢驗假說。 Nat Immunol. 2004 Nov;5(11):1124-33.控制實驗方法質(zhì)量的關(guān)鍵是規(guī)范意識控制實驗方法質(zhì)量的關(guān)鍵是規(guī)范意識 ! 實驗名稱,對于具體課題

2、的實驗操作,名稱應(yīng)是特異性和實驗名稱,對于具體課題的實驗操作,名稱應(yīng)是特異性和具體的,勿僅標(biāo)示通用性實驗名稱;具體的,勿僅標(biāo)示通用性實驗名稱; 實驗?zāi)康模粚嶒災(zāi)康模?實驗方法;實驗方法; 實驗流程,指在實驗?zāi)康闹笇?dǎo)下的特定流程,每個具體步實驗流程,指在實驗?zāi)康闹笇?dǎo)下的特定流程,每個具體步驟均應(yīng)詳細注明實驗中實際應(yīng)用的試劑名稱或劑量等,避免驟均應(yīng)詳細注明實驗中實際應(yīng)用的試劑名稱或劑量等,避免通用性的實驗流程;通用性的實驗流程; 實驗材料及儀器設(shè)備等。實驗材料及儀器設(shè)備等。 圖表:由自動記錄儀打印的圖表和數(shù)據(jù)資料應(yīng)按順序粘貼于記錄本相應(yīng)位圖表:由自動記錄儀打印的圖表和數(shù)據(jù)資料應(yīng)按順序粘貼于記錄本相

3、應(yīng)位置,若圖表較多,可先將圖表按順序裝訂在一起,然后粘貼于記錄本上置,若圖表較多,可先將圖表按順序裝訂在一起,然后粘貼于記錄本上 。壓。壓邊簽字邊簽字 。熱敏紙打印的數(shù)據(jù),打印后立即復(fù)印,并將原件和復(fù)印件一并粘貼在實驗記熱敏紙打印的數(shù)據(jù),打印后立即復(fù)印,并將原件和復(fù)印件一并粘貼在實驗記錄的相應(yīng)位置并壓邊簽字。錄的相應(yīng)位置并壓邊簽字。 照片:各種照片直接粘貼于實驗記錄本相應(yīng)位置,壓邊簽字。細胞或病理組照片:各種照片直接粘貼于實驗記錄本相應(yīng)位置,壓邊簽字。細胞或病理組織照片須標(biāo)記顯微鏡倍數(shù)、染色方式等信息。腫瘤照片須含標(biāo)尺刻度。此外,織照片須標(biāo)記顯微鏡倍數(shù)、染色方式等信息。腫瘤照片須含標(biāo)尺刻度。此

4、外,照片背后應(yīng)寫明實驗日期和處理因素等。相應(yīng)組織切片存放位置、編號和名照片背后應(yīng)寫明實驗日期和處理因素等。相應(yīng)組織切片存放位置、編號和名稱等須記錄于實驗記錄本相應(yīng)位置,以便后續(xù)查找并重新分析。稱等須記錄于實驗記錄本相應(yīng)位置,以便后續(xù)查找并重新分析。自成體系的表格記錄:可單獨裝訂成冊,但須在實驗記錄本相應(yīng)位置記錄相自成體系的表格記錄:可單獨裝訂成冊,但須在實驗記錄本相應(yīng)位置記錄相關(guān)信息和存放位置及編號。關(guān)信息和存放位置及編號。 電子板原始數(shù)據(jù)的記錄:電子板原始數(shù)據(jù)的記錄:要有幾處拷貝;要有幾處拷貝;可整理分析后打印粘貼,但實驗記可整理分析后打印粘貼,但實驗記錄本上須明確記錄原始數(shù)據(jù)和圖表的存放位

5、置、標(biāo)號含義等基本信息。錄本上須明確記錄原始數(shù)據(jù)和圖表的存放位置、標(biāo)號含義等基本信息。掃描圖片:各種掃描圖片應(yīng)粘貼于實驗設(shè)計下方,其測定數(shù)據(jù)置于掃描圖片掃描圖片:各種掃描圖片應(yīng)粘貼于實驗設(shè)計下方,其測定數(shù)據(jù)置于掃描圖片下方,從而有助于參考圖片分析數(shù)據(jù)。下方,從而有助于參考圖片分析數(shù)據(jù)。 S-TNF(%)TM-TNF(%)necrosisapoptosis necrosisapoptosisL92934.5620.022.653.89MCF-769.7302.6265.61HepG21.33.423.040.85Raji2.821.71.7535.28HL-602.04.53.6445.32K5

6、622.341.232.6547.45EH22H22/neoH22/TM-TNFH22/S-TNFH22/Wt-TNFE/T=5:1 2 43 40 38E/T=1:1 1.8 17 22 15E/T=1:5 1.6 8 9 61:5/5:1 18.6% 22.5% 15.79%* 欄內(nèi)數(shù)字均為細胞殺傷率(%) EH22H22/neo H22/TM-TNFH22/S-TNFH22/W t-TNFE/T=1:0 1.5 97 97 73E/T=5:1 2 92 96 77E/T=1:1 1.8 80 75 58E/T=1:5 1.6 26 75 451:5/5:1 26.8% 77.3% 61.

7、6%* 欄 內(nèi) 數(shù) 字 均 為 抑 瘤 率 (%)兩型兩型TNFTNF體外殺瘤率體外殺瘤率兩型兩型TNFTNF體內(nèi)抑瘤率體內(nèi)抑瘤率 預(yù)先激活TM-TNF-反向信號對 NK92細胞殺傷的影響0 01010202030304040505060607070808090901001000 01 12 23 34 45 5殺傷時間(h)殺傷時間(h)殺傷率(%)殺傷率(%)sTNFRI+rhIL-2rhIL-2 * * * *讀出結(jié)果的全部信息讀出結(jié)果的全部信息封閉肽封閉肽 正常正常 關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)炎I-kBI-kB1 2 3 4 5 61:對照;2:sTNFR1;3:轉(zhuǎn)染空載PCDNA3.0sTNFR1;

8、4:轉(zhuǎn)染C-28F突變型TM-TNF-+sTNFR1;5:轉(zhuǎn)染野生型TM-TNF-+sTNFR1;6:轉(zhuǎn)染缺失胞漿段TM-TNF-+sTNFR1。該結(jié)果提示什么?該結(jié)果提示什么?1 對照;2 COS-7;3 轉(zhuǎn)染空載PCDNA3.0;4 轉(zhuǎn)染C-28F 突變TM-TNF- ;5 轉(zhuǎn)染野生型TM-TNF- C-28F TM-TNF-突變體喪失誘導(dǎo)U937細胞轉(zhuǎn)錄iNOSmRNA的效應(yīng)該實驗結(jié)果肯定的條件是什么?該實驗結(jié)果肯定的條件是什么?Cleaved caspase-3- cleaved PARP (89kDa)- -actin - 19kDa- 17kDaWild-memTNF- contr

9、ol(MCF-7)Y87F memTNF- s-TNF pcDNA3.0- full length PARP (116kDa)C樣品排列不一致!樣品排列不一致!NF-kB activation of Raji cell decreased after lipid rafts disruption After treatment of MCD, Raji cell were lysed and its lysis supernatant were used to NF-kB detection. NF-kB were detected by ELISA.如何下結(jié)論?如何下結(jié)論?mTNF expr

10、ession vector were transfected to Hela cell, and then use this cell as effect cell to kill human EVC-304 cell. Hela+TNFwt was transfected with wild type mTNF, Hela+TNF(-47) was transfected with mTNF mutated on -47 which deleted the palmitoylated site.Deletion of palmitoylated site has no effect on m

11、TNF cytotoxity 該結(jié)果能否說明該結(jié)果能否說明TNF不在脂筏里?為什么?不在脂筏里?為什么?前后結(jié)果內(nèi)在聯(lián)系提示什么?前后結(jié)果內(nèi)在聯(lián)系提示什么?mTNF expression increased after MCD treatment. Raji Raji+MCD必須排除何種因素?如何排除?TNFR1TNFR2免疫共沉淀免疫共沉淀TNFR1TNFR2TNFR1TNFR2為何兩種受體共沉淀的信號分子一樣?為何兩種受體共沉淀的信號分子一樣?1879使大家吃驚的是:幾乎所有這使大家吃驚的是:幾乎所有這些家禽都經(jīng)受住了這次接種,些家禽都經(jīng)受住了這次接種,而先前未接種的家禽,經(jīng)過了而先前未接

12、種的家禽,經(jīng)過了通常的潛伏期后則全部死掉了。通常的潛伏期后則全部死掉了。這一點甚至連巴斯德自己或許這一點甚至連巴斯德自己或許也大吃一驚,他沒有預(yù)料到這也大吃一驚,他沒有預(yù)料到這樣的成功。樣的成功。機遇只垂青那些懂得怎樣追求她機遇只垂青那些懂得怎樣追求她的人。查理的人。查理 . 尼科爾尼科爾1921年復(fù)活節(jié)星期天之前的那個夜晚,奧地利生物學(xué)家洛伊(Otto Loewi)從夢中醒來,想到一個極好的設(shè)想。他打開燈,抓過一張紙迷迷糊糊地寫了些東西,倒下去又睡著了。早上6點鐘,他突然想到,自己昨夜記下了一些極其重要的東西,趕緊把那張紙拿來看,卻怎么也看不明白自己寫的是些什么鬼畫符。他在實驗室里整整坐了一天,面對著熟悉的儀器,就是想不起那個設(shè)想。幸運的是,第二天凌晨3點,他又一次醒了過來,還是同樣的頓悟,他高興極了。這回他仔細地記錄下來,這才回去睡覺。不想好不做,不準(zhǔn)備好不做!不標(biāo)準(zhǔn)化不做!不想好不做

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