2組織培養(yǎng)第二章植物組織培養(yǎng)基本操作ppt課件

1、第二章 植物組織培育根本操作宜職院08.9 目的與要求 了解植物組織培育的培育基種類、成分及其特點，學(xué)習(xí)植物組織培育根本操作，了解離體培育環(huán)境條件，以及煉苗移栽根本方法。 具有植物組織培育根本操作程序的認知?？梢宰R別各類培育基特點，熟習(xí)MS培育基成分；具有制造培育基才干，具有選擇外植體、外表滅菌、無菌接種等根本才干；具有植物組織培育條件控制根本才干；有進展組培苗馴化練苗的根本才干。 第一節(jié) 培育基成分、種類及特點 第二節(jié) 培育基的制備 第三節(jié) 外植體無菌接種 第四節(jié) 外植體培育 第五節(jié) 試管苗的馴化與移栽組織培育步驟圖1預(yù)備階段 查閱相關(guān)文獻，根據(jù)已勝利培育的相近植物資料，結(jié)合實踐制定出真實可

2、行的培育方案。 根據(jù)實驗方案配制適當?shù)幕瘜W(xué)消毒劑以及不同培育階段所需的培育基，并經(jīng)高壓滅菌或過濾除菌后備用。2外植體的選擇與消毒 選擇適宜的部位作為外植體，采回后經(jīng)過處置，然后進展消毒處置。 將消毒后的外植體在無菌條件下切割成一定大小的小塊，或剝離出莖尖、挑出花藥，接種到啟動培育基上。3啟動培育 接種后的資料置于培育室或光照培育箱中培育，促使外植體中已分化的細胞脫分化構(gòu)成愈傷組織，或頂芽、腋芽直接萌生構(gòu)成芽。 將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培育基分化成不同的器官原基或構(gòu)成胚狀體，最后發(fā)育構(gòu)成再生植株。4增殖培育 分化構(gòu)成的芽、原球莖數(shù)量有限，采用適當?shù)脑鲋撑嘤?jīng)反復(fù)多次切割轉(zhuǎn)接。 當芽苗繁衍到一定數(shù)量

3、后，再將一部分用于壯苗生根，另一部分保管或繼續(xù)擴繁。進展脫毒苗培育的還要進展病毒檢測。 5生根培育 剛構(gòu)成的芽苗往往比較弱小，多數(shù)無根，此時可降低或不加細胞分裂素濃度，提高生長素濃度，促進芽苗生根，提高其強壯度。6煉苗移栽 選擇生長強壯，有35條根的生根苗進展煉苗，移栽到疏松透氣的基質(zhì)中，留意保溫、保濕、遮蔭。當苗完全成活后，再移向大田。擬定培育方案外植體預(yù)處置外植體無菌接種啟動培育分化出芽、胚狀體或原球莖繼代增殖培育生根培育煉苗移栽成活供消費運用植物組織培育的普通程序 培育基配制滅菌第一節(jié)培育基成分、種類及特點植物生長必需16種根本元素：N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、Mn、B、Cu、Zn

4、、Mo、Cl、C、H、O。離體培育條件下，各元素主要從培育基中獲得：H和O來源于水，C來源于添加的糖類，其它礦質(zhì)元素來源于組成培育基的無機鹽。培育基是根據(jù)植物生長所需營養(yǎng)成分，配制成的供植物生長的人工制造的營養(yǎng)物質(zhì)。一、培育基的成分 培育基普通包括無機鹽、有機化合物和生長調(diào)理劑三大根本組成成分。 1、無機鹽類 功能 離體組織生長發(fā)育的根本成分根據(jù)植物對必需元素需求的量，可以分為以下兩類： 大量元素植物所需元素的運用量普通在每升幾十-幾千毫克，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。 微量元素植物所需元素的濃度小于10-510-7mol/L，F(xiàn)e、Cu、Zn、Mn、Mo、B、Cl。 除C、H、

5、O外，其它礦質(zhì)元素通常以離子態(tài)吸收 N-硝態(tài)氮和銨態(tài)氮 2、有機化合物 培育基中只需無機鹽叫做根本培育基，為使培育物更好的生長，還需添加有機成分，常用有糖類、維生素、醇類、嘌呤、氨基酸等。 糖類 功能 離體培育物生長與發(fā)育不可短少的有機成分，即作為碳源，又維持培育基的浸透壓在1.5-4.1MPa。 多運用蔗糖，試管苗生長與繁衍濃度2-3%，幼胚培育4-6%，某些特殊培育中用8-10%。 細胞和原生質(zhì)體培育還用麥芽糖、葡萄糖、果糖。 維生素類 功能 參與酶的構(gòu)成、蛋白質(zhì)、脂肪代謝，明顯的促進離體培育物的生長。 鹽酸硫胺素-VB1、鹽酸吡哆醇-VB6、煙酸-Vpp、生物素-VH、維生素C-Vc。

6、肌醇 功能 促進糖的轉(zhuǎn)化、維生素和激素的利用，對胚狀體和芽的構(gòu)成有良好影響。 用量普通50-100mg/L。 腺嘌呤 合成各種細胞分裂素的前體物質(zhì)之一，利于細胞分裂，促進芽的構(gòu)成和生長。 氨基酸 蛋白質(zhì)的成分，是有機氮化合物，常用甘氨酸和多種氨基酸混合物如水解酪蛋白、水解乳蛋白。 其它復(fù)合成分 成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳、香蕉汁、酵母提取液、番茄汁、麥芽糖等。3、生長調(diào)理物質(zhì) 生長素類 功能 促進細胞脫分化和細胞伸長，誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生 生長素與細胞分裂素協(xié)調(diào)作用，在離體培育中，生長素促進根的構(gòu)成，抑制芽的構(gòu)成。 液體培育中利于體細胞胚胎發(fā)生。 常用IAA、IBA、NAA、2,4-D。IB

7、A促進生根細胞分裂素的生理效應(yīng)細胞分裂素類 功能 促進細胞分裂和擴展，調(diào)理器官分化，延緩組織衰老，加強蛋白質(zhì)合成。離體培育中，促進不定芽的發(fā)生，與生長素協(xié)調(diào)作用可有效控制培育物的生長與分化。 常用6-BA、ZT、KT、2iP。 植株的形狀建成是CTK和IAA的比值調(diào)控的 CTK/IAA高，誘導(dǎo)愈傷組織構(gòu)成芽 CTK/IAA低，誘導(dǎo)愈傷組織構(gòu)成根煙草在不同細胞分裂素與生長素濃度下的生理效應(yīng)赤霉素類 功能 促進細胞伸長生長、誘導(dǎo)花芽構(gòu)成、突破種子休眠以及誘導(dǎo)單性結(jié)實等。 與生長素協(xié)調(diào)作用對構(gòu)成層分化有影響，刺激體細胞胚進一步發(fā)育成植株。 有20多種，目前主要是赤霉酸GA3。4、水 離體培育中，既是

8、培育基營養(yǎng)成分的溶劑，又是培育基的重要組成部分，占培育基成分的95%。 原生質(zhì)體培育、細胞培育及分生組織培育普通運用雙蒸水或超純水 大批量快速繁衍培育，可用普通蒸餾水或純真水。 5、其它附加成分 瓊脂 功能 來自海藻的多糖類物質(zhì)，組織培育中最常用作凝固劑，是最方便、最好的凝固劑和支持物。 常用量0.6%-1.0%，不是培育基必需成分。 卡拉膠 海藻提取物，含雜質(zhì)少純度更高，凝固后培育基透明，利于資料察看。 活性炭 功能 常用的吸附劑，某些培育類型中，可以吸附培育過程中產(chǎn)生的一些有毒物質(zhì)酚類物質(zhì)，有利于培育物的生長。常用濃度15mg/L左右 其吸附作用選擇性較差，運用應(yīng)慎重。常受溫度影響，低溫吸

9、附效果好，高溫吸附才干降低甚至解吸附。抗生素 培育基中添加抗生素可防止菌類污染，常用的抗生素有青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，用量普通為520mg/L。大部分抗生素需求過濾除菌?？寡趸?抗酚類氧化常用的藥劑有半胱氨酸、聚乙烯吡咯烷酮PVP及抗壞血酸Vc，可用50200mgL的濃度洗滌剛切割的外植體傷口外表，或過濾除菌后參與固體培育基的表層。二、常用培育基的種類、配方及特點一培育基種類1、根據(jù)態(tài)相分： 固體培育基-加凝固劑的培育基 液體培育基-不加凝固劑的培育基。2、根據(jù)培育過程分： 初代培育基-初次接種外植體的培育基。 繼代培育基-接種初代培育之后培育物的 培育基。3、根據(jù)作用分： 誘導(dǎo)培育基-

10、誘導(dǎo)外植體啟動生長 增殖培育基-誘導(dǎo)離體培育苗擴展繁衍。 生根培育基-誘導(dǎo)離體培育苗生根4、根據(jù)營養(yǎng)程度分： 根本培育基-包含無機鹽等根本營養(yǎng)成分。 完全培育基-包含使植物離體生長全面營養(yǎng)。二幾種常用培育基細胞工程常用的根本培育基有：MS、MT、White、Nitsch、 Blaydes、N6、B5、NT、SH、Miller、Heller等。三幾種常見培育基的特點1、富鹽平衡培育基 無機鹽濃度高，元素比例適當，離子平衡好，具有較強的緩沖性，培育中維持較好的穩(wěn)定性，含高量氮、鉀，營養(yǎng)豐富，元素種類齊全，MS培育基運用最廣泛。2、低鹽培育基 無機鹽濃度低，有機成分含量低，多數(shù)作為生根培育基、胚胎培

11、育運用，常用White培育基。3、高硝態(tài)鹽培育基 較低銨鹽，高硝酸鹽和鹽酸硫胺素B5培育基適宜雙子葉植物特別是木本植物的生長。 N6培育基為水稻等禾谷類花藥培育設(shè)計，KNO3和NH42SO4含量高,不含鉬。SH培育基 (NH4)H2PO4替代NH42SO4,礦質(zhì)濃度較高，多數(shù)單子葉和雙子葉植物上運用較好。4、中鹽培育基 大量元素無機鹽為MS的1/2，微量元素種類減少含量增高，無肌醇維生素種類多，添加生物素、葉酸，有H、Hitsch、Miller、Blaydes等培育基，適用于特殊細胞培育。第二節(jié) 培育基的制備 制造一升培育基所需藥品20多種，為節(jié)省時間和配制的準確，需將各種藥品濃縮成一定倍數(shù)，

12、并且混合成一定母液，進展保管。制造培育基時根據(jù)需求制培育基數(shù)量取用母液。一、培育基母液的配制 一營養(yǎng)成分的配制 根據(jù)藥品性質(zhì)將母液配制成以下四類：1、大量元素 可以混在一同配制成1020倍液，硫酸鎂和氯化鈣Ca+和Mg2+會與磷酸鹽混合，產(chǎn)生不溶性沉淀，要分別單獨配制Ca+與PO4-一同混合易沉淀，定容后消逝。2、微量元素可配成100200倍混合母液，KI可單獨配。3、鐵鹽硫酸亞鐵和EDTA鈉鹽易沉淀，需單獨配制，配成100200倍鰲合劑不易沉淀。4、有機化合物維生素、肌醇、氨基酸等一同配成100或200倍液，也可分別配制。二植物生長調(diào)理物質(zhì)的配制 植物生長調(diào)理物質(zhì)分別配成母液儲于冰箱，濃度普

13、通為0.51mg/ml。1、IAA、NAA：先用少量95%酒精使之充分溶解。 2、2,4D：可用少量0.1mol/L的NaOH溶液充分溶解，再漸漸加蒸餾水定容至需求的體積。3、KT和BA等細胞分裂素類： 先用少量0.1mol/L 的HCl溶解，再用蒸餾水定容至需求的體積。三藥品用量的計算： 配制母液時藥品用量(mg)=配方用量(mg)濃縮倍數(shù)制備容量L 二、培育基的制造一母液取用量的計算 制備培育基時母液取用量ml=1000濃縮倍數(shù)制備培育基數(shù)量L二培育基制造程序 1、按大量元素、微量元素、鐵鹽、有機成分順序?qū)⒛敢喝〕?，混合?2、適量蒸餾水放入加熱容器，蒸餾水應(yīng)少于所制培育基數(shù)量，約終體積的

14、2/3-3/4，接通電源加熱。 3、向加熱容器中參與稱量好的瓊脂0.6-0.8%，攪拌加熱，至完全溶化。培育基制造程序圖4、瓊脂熬化后，稱取相應(yīng)量的蔗糖2-3%，參與加熱容器中至溶解。5、將母液混合液參與到加熱容器中，攪拌混勻。6、蒸餾水定容至所需體積。7、測試培育基溶液的PH值(5.8-6.0)，過高滴加0.1mol/L的HCL調(diào)整，過低滴加0.1mol/L的NaOH調(diào)整。8、迅速分裝到培育瓶中，備用。 培育基是離體培育物賴以生存和生長的人工環(huán)境的重要組成部分，常用的培育基根據(jù)其物理形狀的不同分為固態(tài)培育基和液態(tài)培育基。 固態(tài)培育基普通運用瓊脂為凝固劑，也有運用卡拉膠或魔芋粉為凝固劑的。 液

15、態(tài)培育基不運用凝固劑，但需求在容器中置入適當?shù)闹挝铮嚬転榕嘤萜鞯闹挝锟捎脼V紙橋，底面積較大的培育容器，支撐物可選用脫脂棉等。 固體培育基三、培育基及培育器械的滅菌 制備好的培育基假設(shè)帶菌，會導(dǎo)致植物離體培育失敗，因此還要對培育基進展滅菌處置。一高壓蒸汽滅菌培育基的滅菌普通采用濕熱滅菌法： 1、培育瓶及培育器械放入高壓滅菌鍋。 2、滅菌鍋加水至淹沒電熱絲。3、封鎖高壓滅菌鍋各出氣口。4、接通電源加壓至49kPa0.05MPa5、翻開排氣閥，排冷氣至壓力0 kPa。6、繼續(xù)加壓至108kPa0.11mPa-0.12Mpa，即1217、壓力至108kPa0.11mPa-0.12Mpa，即12

16、1時，穩(wěn)壓在此壓力15-20min。8、封鎖電源自然冷卻至壓力為0 kPa。9、取出培育基和器械冷卻，儲存于30以下室內(nèi)。 二干熱滅菌 培育瓶、三角瓶、試管等玻璃器皿及接種器械，可以進展干熱滅菌。 即將洗滌干凈的玻璃器皿放到烘箱中，在150溫度下，干熱滅菌1小時，或120下滅菌2小時。 滅菌終了冷卻后取出器械儲存。 儲存室要堅持無菌、枯燥、以免呵斥培育基的二次污染。 滅菌后的培育基普通應(yīng)在2周內(nèi)運用，時間過長易呵斥潛在的污染。 培育基滅菌后假設(shè)出現(xiàn)過多沉淀或瓊脂不凝固等景象，該培育基不能繼續(xù)運用，應(yīng)查明緣由重新配制。 第三節(jié) 外植體無菌接種 普通來說，無論何種類型的細胞工程技術(shù)，起始階段均涉及

17、外植體取材、滅菌、接種與培育等根本過程。一、植物資料的培育與取材 外植體是指用于離體培育的活的植物組織、器官等資料，是植物離體培育的根底資料。 1、外植體的來源 -生長在自然環(huán)境下的植物 -有目的地培育在溫室控制條件下生長的植物 -無菌環(huán)境下曾經(jīng)過離體培育的植物 自然環(huán)境中生長的植株，普通帶有微生物，甚至與某些微生物具有寄生關(guān)系，使植株具有內(nèi)生菌。取自這些植物的外植體，在培育過程中會有微生物繁殖，從而影響培育效果。 自然環(huán)境生長植株溫室控制條件下生長植株已離體培育植株 多數(shù)情況下，應(yīng)盡量運用溫室或人工氣候室控制培育的植物資料作為外植體來源，減少培育過程中的微生物感染概率。同時，生長在控制條件下

18、的植物可以堅持培育料間的一致性，提高實驗的可反復(fù)性，也便于培育技術(shù)的規(guī)范。 某些多年生植物或特殊資料，必需取自自然生長的植物，就需求盡能夠防止運用那些生長過于潮濕和不干凈環(huán)境中的植物。對于培育過程中能夠出現(xiàn)內(nèi)生菌污染的資料，應(yīng)盡量取生長旺盛期的生長點部位作為起始培育的資料。 2、供體植株的管理 取自室外的外植體資料，供體植株的管理非常重要，這與外植體培育時的污染率親密相關(guān)。植株管理中應(yīng)留意：防止昆蟲危害 許多昆蟲如蚜蟲、螨類和飛虱是許多植物病蟲害的傳播媒介，會引起植物組織的潛在感染。留意防病 尤其是真菌和細菌病害的侵染，取自感病植株的外植體，在培育中的污染率遠遠高于來自安康植株的外植體，必要時

19、需運用化學(xué)藥劑防治病害。控制濕度 給供體植株澆水時應(yīng)從根部給水，防止從上部澆水，以免上部構(gòu)成易于病原侵染的濕度環(huán)境；盡能夠降低溫室濕度；取材前盡能夠堅持植株干爽。1、資料取材 資料選擇 培育資料應(yīng)選擇有代表性的主要植物、選擇性狀優(yōu)良的種質(zhì)或特殊的基因型。 快速繁衍時應(yīng)在植株生長的最適時期取材，花藥培育應(yīng)在花粉發(fā)育到單核期取材。 選取資料的大小普通在0.5-1.0cm之間。胚胎培育或脫毒在0.5cm以下。資料太大易污染，資料太小難于成活。 采收 從生長強壯的無病蟲害的植株上選取發(fā)育正常的器官和組織。最好采用莖尖，后代性狀較穩(wěn)定，攜帶細菌較少。 二、預(yù)處置與外表滅菌 1、預(yù)處置 先對植物資料進展修

20、剪整理，去掉不需求部分，將預(yù)備運用的植物資料外植體在流水中沖洗20-60分鐘，備用。如特別不潔的外植體，可先用加有洗滌劑的水清洗10-15分鐘，再用流水沖洗干凈。 2、外表滅菌1操作人員穿戴滅菌過的任務(wù)服、口罩。進入接種室前雙手用洗滌劑清洗干凈，操作前再用70%酒精或消毒劑擦洗雙手。2操作期間雙手和臺面常用70%酒精或消毒劑擦拭。超凈任務(wù)臺運用前必需用紫外燈照射殺菌，然后開啟風(fēng)機。 3接種用工具解剖刀、剪刀、鑷子可放入70-75%酒精中，運用時需火焰灼燒滅菌，冷卻后運用。 4外植體放入超凈任務(wù)臺內(nèi)，置70-75%酒精中5-60 秒，0.1氯化汞6-10分鐘，或10%的漂白粉上清液中10-15分

21、鐘，然后用無菌水沖洗3-5次。滅菌時需進展攪動。 外表滅菌劑種類較多，可選取1-2種運用。 常用滅菌劑運用濃度及效果比較表滅菌劑 運用濃度 繼續(xù)時間 去除的難易 效果次氯酸鈣 9-10 5-30分鐘 易 很好次氯酸鈉 2 5-30分鐘 易 很好氯化汞 0.1-1 5-10分鐘 較難 最好抗菌素 4-50mgL 30-60分鐘 中 較好酒精 70-75% 0.2-2分鐘 易 好過氧化氫 10-12% 5-15分鐘 最易 好三、外植體的接種無菌接種 外植體的接種是把經(jīng)過外表滅菌后的植物資料切碎或分別出器官、組織、細胞、轉(zhuǎn)放到無菌培育基上的全部操作過程。整個過程均需無菌操作。1借助接種用工具將資料切

22、割分別。2將培育基放入超凈任務(wù)臺內(nèi)，火焰灼燒培育基瓶口，然后翻開培育瓶口，置培育瓶為斜角，防止灰塵落入平中。3迅速將切割分別下的所需組織、細胞、器官，放入培育基上，及時蓋上瓶蓋。4工具用后應(yīng)及時滅菌，防止交叉污染。5任務(wù)人員操作時制止不用要的說話。 第四節(jié) 外植體的培育 接種只是完成了離體培育的第一步，植物離體培育和栽培植物一樣，生長過程中也遭到各種環(huán)境要素的影響。培育條件是離體培育能否勝利的關(guān)鍵。在培育基條件適宜的根底上，影響試管苗生長的主要要素有光照、溫度、濕度、氧氣。一、外植體的培育條件1、光照 光照對植物生長發(fā)育有重要作用，是離體培育中非常重要的環(huán)境要素。光照強度、光質(zhì)以及光照時間，對

23、細胞的增殖、器官的分化都有很大影響。除特殊要求外，普通都采用日光燈作光源，光照強度1000-5000Lx，根據(jù)不同植物或器官需求，可以每天延續(xù)光照12-16小時，也可每天光照16小時，8小時黑暗。2、溫度 離體培育中對溫度的控制比光照更為重要，大所數(shù)植物最適溫度在23-32之間。培育室溫度是252。低于15時，培育的組織生長停頓，高于35對生長也不利。因此，培育室應(yīng)安裝空調(diào)機或其他的控溫設(shè)備。3、濕度 培育瓶內(nèi)相對濕度通常是100%，而環(huán)境中的相對濕度會直接影響培育基的水分蒸發(fā)。因此，培育過程中，培育室普通要求相對濕度堅持在70-80%，相對濕度過低影響培育物生長和分化，應(yīng)向室內(nèi)噴灑水，以提高

24、濕度；過高雜菌繁殖，大量污染，應(yīng)及時地通風(fēng)除濕。4、氧氣 離體培育的試管苗是需求氧氣的，在固體培育或液體靜置培育時，假設(shè)組織完全浸入培育基中，與氧氣隔絕，就會停頓生長。因此，接種時要有部分組織合空氣接觸。振蕩培育是處理通氣的良好方法。固體培育中，如瓶塞不透氣，培育物也不能生長，要選擇通氣性好的培育瓶蓋，添加可利用的氧氣，迅速除去釋放出來的CO2，有利于外植體外層細胞開場分裂。二、外植體的成苗途徑外植體的成苗途徑有三種：一外植體-愈傷組織-完好植株。 詳細又可分為三種： 1、愈傷組織-同時長芽和根-植株。2、愈傷組織-莖-根-植株。3、愈傷組織-根-芽-植株。二外植體-胚狀體-植株?？蓮囊韵聨追N

25、培育物中產(chǎn)生：1、器官上發(fā)生。2、愈傷組織上發(fā)生。3、游離單細胞發(fā)生。4、小孢子發(fā)生。 誘導(dǎo)胚狀體比誘導(dǎo)芽數(shù)量多、速度快、構(gòu)造完好。 三外植體-直接構(gòu)成根與芽-植株。如莖尖培育 三、培育中常見問題一污染的緣由及其預(yù)防措施1、污染緣由 污染是指在組織培育過程中培育基和培育資料繁殖雜菌，導(dǎo)致培育失敗的景象。 病原菌：細菌及真菌兩大類。細菌污染特點-菌斑呈黏液狀，接種后1-2天發(fā)現(xiàn)。污染途徑： 外植體帶菌 培育基及器皿滅菌不徹底 操作人員未遵守操作規(guī)程 真菌污染的特點-污染部分長有不同顏色的霉菌，接種后3-10天發(fā)現(xiàn)。 污染途徑： 周圍環(huán)境不清潔 超凈任務(wù)臺過濾安裝失效 培育瓶的口徑過大2、污染的預(yù)

26、防措施防止資料帶菌的措施-莖尖作外植體時，進展預(yù)培育無糖或暗培育。無糖營養(yǎng)液或自來水使枝條抽枝，以新抽嫩枝作外植體。-晴天取材，下午取材，經(jīng)日曬過可殺死部分細菌或真菌。-接種時除去外部韌皮組織，只接內(nèi)部的分生組織。 2外植體的滅菌 -多次滅菌法，次氯酸鈉-無菌水-次氯酸鈉-多種藥液交替浸泡法，肥皂水-酒精-次氯酸鈉-無菌水。器皿與金屬器械的滅菌 玻璃器皿可采用濕熱滅菌或干熱滅菌 金屬器皿普通火焰滅菌，也可干熱滅菌布質(zhì)制品的滅菌 濕熱滅菌無菌操作室的滅菌 2%新捷爾滅或70%酒精擦拭噴霧，紫外燈照射，定期甲醛和高錳酸鉀熏蒸。嚴厲按照操作程序。二外植體的褐變及其防止措施。1、褐變的緣由 褐變是指外

27、植體在培育過程中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細胞內(nèi)的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，這種致死的褐變物向外分散致使培育基逐漸變成褐色，抑制其它酶的活性，影響外植體的分化，最后變褐死亡的景象。 基因型 某些植物酚類物質(zhì)含量較多。外植體的生理形狀 幼年的資料培育含醌類物質(zhì)較少。培育基的成分-過高的無機鹽濃度-生長調(diào)理物質(zhì)運用不當，BA過多-分生才干強的資料，氧化受抑制，褐變也被抑制-培育條件不適宜，溫度過高或光照過強，褐變加速。資料轉(zhuǎn)移時間 時間過長引起資料褐變。2、褐變的防止措施選擇適宜的外植體及最正確培育基。延續(xù)轉(zhuǎn)移。加抗氧化物。加活性炭。0.1-0.5%活性炭 三玻璃化景象及其預(yù)防措施1、玻璃化

28、景象及其產(chǎn)生緣由玻璃化是在細胞生長過程中的環(huán)境產(chǎn)生變化，試管苗為了順應(yīng)變化了的環(huán)境而呈玻璃狀。主要緣由是：激素濃度 BA濃度提高，導(dǎo)致玻璃化苗的產(chǎn)生。瓊脂濃度 瓊脂濃度低，玻璃化苗添加。溫度 低溫易構(gòu)成玻璃化苗。光照時間 普通要求10-12h，大于15h玻璃苗添加。通風(fēng)條件 培育瓶容量小，氣體交換不良，玻璃化苗多。離子程度 植物種類不同，離子形狀比例量要求不同。2、預(yù)防措施控制無機營養(yǎng)成分，降低氮銨態(tài)氮和氯。提高蔗糖和瓊脂濃度降低細胞分裂素和赤霉素濃度，添加生長素比例。添加自然光照1000-1800lx，控制光照時間8-12h。適溫生長，熱擊處置防止玻璃化發(fā)生。運用透氣性好的封口膜。培育基中參與間苯三酚、根皮苷或多效唑、矮壯素。 第五節(jié) 試管苗的馴化移栽一、試管苗的特點1、試管苗的生態(tài)環(huán)境 組織培育出來的苗通稱試管苗或組培苗。 試管苗長期生活在密閉容器中，構(gòu)成其獨特生態(tài)系統(tǒng)，與外界環(huán)境相比，有四大差