《生物化學》本科課件第10章+酶的作用機制和酶的調節(jié)

1、第10章 酶的作用機制和酶的調節(jié)Metabolic regulation is achieved through an exquisitely balanced interplay among enzymes and small molecules, a process symbolized by the delicate balance of forces in this mobile. (Sea Scape by Alexander Colder/Whitney Museum of American Art. NY)揚州大學生物科學與技術學院 或者稱活性中心（active center)與

2、酶活力直接相關的區(qū)域局限在酶分子的特定部位一、酶的活性部位 ( active site ）揚州大學生物科學與技術學院 結合中心：與S結合 決定酶促反應的專一性 催化中心：促進S發(fā)生化學變化 決定酶促反應的性質 活性中心揚州大學生物科學與技術學院必需基團：與酶的催化活性直接相關的化學基團常見：His咪唑基、Ser-OH、 Glu-COOH、Cys-SH、Asp-COOH位于活性中心活性中心以外，穩(wěn)定分子構象必需基團非必需基團（一）酶活性部位的特點揚州大學生物科學與技術學院底 物 活性中心以外的必需基團結合基團催化基團 活性中心 揚州大學生物科學與技術學院（一） 酶活性部位的特點1、活性部位只占相

3、當小的部分幾個殘基+輔助因子（單純/結合）2、在空間構象上集中到一起形成一個三維實體（單體/寡聚）3、與底物誘導契合4、位于酶表面裂縫 (crevice)內6、活性中心構象具有柔性或可運動性5、通過次級鍵與底物結合揚州大學生物科學與技術學院 酶 AA殘基 活性中心AA 核糖核酸酶 124 H H K R D E溶菌酶 129 D E胰凝乳蛋白酶 241 H D S羧肽酶A 307 R E Y Zn2+胰蛋白酶 223 H D S揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院（二）、研究酶活性部位的方法1.酶分子側鏈基團的化學修飾法 化合

4、物活性部位AA殘基側鏈基團 共價結合水解酶，確定一級結構位置揚州大學生物科學與技術學院 推測某基團是否在活性中心 某基團被修飾后： 判斷修飾劑與活性部位結合的依據(jù)： S/競爭性I可以保護修飾劑的作用 酶活力影響程度與修飾劑濃度相關酶活力改變：為必需基團（1）非特異性共價修飾利用某些化學試劑與酶蛋白中某類氨基酸殘基的側鏈反應而使基團的結構和性質發(fā)生改變揚州大學生物科學與技術學院（2）特異性共價修飾試劑專一修飾活性部位某一AA，使酶失活。 如：二異丙基氟磷酸（DFP)專一修飾酶（主要為蛋白水解酶及酯酶）活性部位的 Ser-OH，從而使酶失活。僅修飾活性中心Ser-OH揚州大學生物科學與技術學院利用

5、DFP共價修飾法對某些蛋白水解酶進行研究，發(fā)現(xiàn)許多酶活性部位都含有絲氨酸，還具有相似的肽段：Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro順序。揚州大學生物科學與技術學院(3)親和標記法與S結構相似的共價修飾劑能被專一地引入活性部位，接近S結合位點其活潑的化學基團可與活性部位某一基團 形成穩(wěn)定的共價鍵專一性不可逆抑制劑/活性部位指示試劑揚州大學生物科學與技術學院對甲苯磺酰L苯丙氨酸乙酯 (TPE)對甲苯磺酰L苯丙氨酰氯甲基酮（TPCK）胰凝乳蛋白酶揚州大學生物科學與技術學院2.動力學參數(shù)測定法 活性部位AA殘基解離狀態(tài)和酶活性直接相關 通過動力學方法求有關參數(shù)， 對酶活性部位化學性質作出判斷。

6、3.X射線晶體結構分析法 解析與S結合的酶分子的三維結構 了解酶活性部位AA殘基所處的相對位置 以及與活性部位有關的其它基團揚州大學生物科學與技術學院4.定點誘變法 利用定點誘變技術，改變編碼蛋白基因中的DNA順序，改變其中某AA后，測定酶活性的變化。揚州大學生物科學與技術學院酶催化反應的某些獨特性質為許多反應所共有，可概括如下：二、酶催化反應的獨特性質酶反應可分成兩類，一類僅涉及電子轉移（速率：108 s-1數(shù)量級）；另一類涉及電子和質子兩者或者其他基團的轉移（速率：103 s-1數(shù)量級）大部分反應屬于第二類。酶的催化作用是由氨基酸側鏈上的功能基團和輔酶為媒介的。酶催化反應的最適pH范圍通常

7、是狹小的與底物相比較，酶分子很大，而活性部位通常只比底物稍大一些。酶除活性基團外，還有別的特性使反應進行更有利，并使更復雜的多底物反應按一定途徑進行。揚州大學生物科學與技術學院主要有利條件： 在活性部位存在1個以上的催化基團，所以能進行協(xié)同催化 存在有結合部位，底物分子可以按固有方位結合在活性部位附近 在2個或2個以上底物反應時，存在1個以上的底物分子結合部位 底物結合到酶分子后，底物分子中的鍵產生張力，有利于過渡態(tài)復合物的形成。揚州大學生物科學與技術學院（一）底物和酶的鄰近效應和定向效應 三、影響酶催化效率的有關因素鄰近效應：酶與底物形成復合物后，底物與底物、催化基團與底物之間結合于同一分子

8、（酶）而使有效濃度極大增加，從而使反應速率大增的效應。催化中鄰近效應的一個例子：（a）游離的咪唑催化乙酸對硝基苯酯的速度較慢；（b）變成分子內反應后要快24倍有機化學模式實驗揚州大學生物科學與技術學院定向效應：反應物的反應基團之間和酶的催化基團與底物的反應基團之間的正確取位產生的效應。鄰近效應和定向效應對酶促反應的影響：提高有效濃度、正確取位；變分子間反應為分子內反應。Page等認為兩類效應在雙分子反應中起的促進作用至少分別達到104倍。酶催化效率提高的實質：底物分子結合在酶的活性部位，作用基團互相鄰近并定向，大大提高了酶的催化效率。定向效應的一個例子：鄰羥苯丙酸的內酯形成，當兩個甲基取代了苯

9、環(huán)鄰近的碳原子上的氫，使羧基與羥基之間更好定向時，兩個速率常數(shù)之比為2.5 1011 。揚州大學生物科學與技術學院（二）底物的形變和誘導契合酶與專一性底物結合后，酶的基團或離子使底物的某些基團的電子云密度增高或降低，產生“電子張力”，使底物分子發(fā)生形變而接近過渡態(tài)，反應容易發(fā)生。誘導契合：當?shù)孜锖兔附佑|時，可誘導酶分子的構象變化，使酶活性中心的各種基團處于和底物互補契合的正確空間位置，有利于催化。揚州大學生物科學與技術學院契合后，誘導“電子云形變”:EA : B:A- : B+:電子云形變:E這樣的共價鍵易被酶活性中心酸堿催化或共價催化揚州大學生物科學與技術學院酶活性中心瞬時地向反應物提供H+

10、/H+受體以穩(wěn)定過渡態(tài)，加速反應的一類催化機制。（三）酸堿催化（acid-base catalysis)在水溶液中通過高反應性的質子和氫氧離子進行的催化稱為專一的酸堿催化或狹義的酸堿催化通過H+和OH-以及能提供H+及OH-的供體進行的催化稱為總酸堿催化或廣義的酸堿催化專一酸堿催化作用總酸堿催化作用專一的酸堿催化的表觀速率常數(shù)（kobs)僅依賴pH而不受緩沖液的濃度影響；總酸堿催化的kobs除依賴pH外，還與緩沖液濃度成正比揚州大學生物科學與技術學院酸催化(OH、NH3+、NH+、-COOH、SH)A- : H+EHE-H2OEH + OH-+ H+AH + B+堿催化(-COO-、-S-、咪

11、唑基等失電子態(tài)基團)A- : B+ E-COO-A- + E-COOH E-COO- + H+在生理條件下，因H+和OH-的濃度甚低，總酸堿催化作用較為重要。很多酶的活性部位的某些功能基，能在近中性的條件下，作為催化性的質子供體或受體參與總酸堿催化作用?？偹峄蚩倝A的催化可提高反應速率102到105倍。揚州大學生物科學與技術學院酶分子中作為總酸堿催化的功能基團影響酸堿催化反應速率的因素有兩個：酸或堿的強度（pK值）及質子傳遞的速率。例如咪唑基pK約為6，在中性條件下，即可作為質子供體，又可作為質子受體。同時其接受或供出質子的速率十分迅速，因此是一個重要的酸堿催化基團。揚州大學生物科學與技術學院

12、催化劑的親核/親電基團分別放出電子或汲取電子并作用于底物的缺電子中心或負電中心，形成共價中間復合物，降低活化能，使反應加速的機制。親電基團帶正電荷性質的基團親核基團帶負電荷性質的基團（四）共價催化（covalent catalysis)分為親核催化或親電子催化揚州大學生物科學與技術學院-OH-SH酶蛋白氨基酸側鏈提供各種親核中心，以下3種最常見：絲氨酸羥基、半胱氨酸巰基、組氨酸咪唑基磷酰酶?；钙咸敲该负偷孜镩g共價鍵形成的例子。中間產物不穩(wěn)定，斷裂，形成產物，酶復原。（不同酶促反應中的催化因素影響大小不同。）揚州大學生物科學與技術學院Enzymes That Form Covalent Int

13、ermediatesEnzymesReacting GroupCovalent Intermediate1. Chymotrypsin ElastaseEsterasesSubtilisinThrombinTrypsin 2. Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase Papain 3. Alkaline phosphatase Phosphoglucomutase 4. Phosphoglycerate mutase Succinyl-CoA synthetase 5. Aldolase Decarboxylases Pyridoxal phosphat

14、e- dependent enzymes 揚州大學生物科學與技術學院1、需要金屬離子的酶（幾乎1/3的酶催化活性需要金屬離子）（1） 金屬酶 (metalloenzyme)含緊密結合的金屬離子（多為過渡金屬離子如：Fe2+，F(xiàn)e3+,Cu2+,Zn2+,Mn2+,Co3+）（2）金屬-激活酶 ( metal-activited enzyme)含松散結合的金屬離子（多為堿和堿土金屬離子如：Na+、K+、Mg2+、Ca2+。（五）金屬離子催化揚州大學生物科學與技術學院2、金屬離子以3種主要途徑參加催化過程 A、參與底物反應的定向 B、通過價態(tài)改變參與電子轉移 C、通過靜電穩(wěn)定/屏蔽負電荷金屬離子的

15、催化作用往往和酸的催化作用相似，有些帶多價正電荷的金屬離子甚至比質子的作用更強金屬離子具有絡合作用在中性溶液中能維持一定濃度揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院（六）多元催化和協(xié)同效應酶的活性中心部位，一般都含有多個起催化作用的基團，這些基團在空間有特殊的排列和取向，可以對底物價鍵的形變和極化及調整底物基團的位置等起到協(xié)同作用，從而使底物達到最佳反應狀態(tài)。揚州大學生物科學與技術學院（七）活性部位微環(huán)境的影響 活性部位位于酶分子表面疏水環(huán)境的裂縫中：非極性環(huán)境中的介電常數(shù)較在水介質中低，根據(jù)庫侖定律，在非極性環(huán)境中兩個帶電基團之間的靜電作用比在極性環(huán)境中顯著增高。疏水環(huán)境有利于酶

16、的催化作用。揚州大學生物科學與技術學院四、酶催化反應機制的實例（一）溶菌酶（lysozyme）Alexander Fleming存在雞蛋清和眼淚中由129個氨基酸殘基組成的單肽鏈蛋白質，含4對二硫鍵。揚州大學生物科學與技術學院溶菌酶生物學功能是催化水解細菌細胞壁多糖揚州大學生物科學與技術學院溶菌酶催化底物C1-O鍵裂解揚州大學生物科學與技術學院溶菌酶的結構和水解特性溶菌酶分子近橢圓形，內部幾乎全部是非極性，分子表面有一個較深裂縫，其大小恰好能容納多糖底物的6個單糖。溶菌酶催化水解NAM的C1與NAG的C4之間的糖苷鍵，也催化僅由NAG殘基通過b(1-4)糖苷鍵連接的幾丁質。(NAG)3是溶菌酶

17、的競爭性抑制劑，其最小底物為(NAG)6。水解部位只能發(fā)生在D-E之間。ABCDEF溶菌酶的活性部位的必需基團是Asp52和Glu35，揚州大學生物科學與技術學院第一步是質子轉移,糖苷鍵被裂解,形成一個碳正離子中間物溶菌酶的催化機制：揚州大學生物科學與技術學院第二步是OH-和H+分別加合到正碳離子中間物和Glu35的側鏈后,水解反應完成揚州大學生物科學與技術學院形成碳正離子時葡萄糖環(huán)的形變揚州大學生物科學與技術學院羧肽酶 A（二）揚州大學生物科學與技術學院堿催化酸催化揚州大學生物科學與技術學院穩(wěn)定活性中心吸附羧氧原子使肽鍵失穩(wěn)揚州大學生物科學與技術學院胰蛋白酶蛋白質水解酶巰基蛋白酶天冬氨酸蛋白

18、酶絲氨酸蛋白酶鋅蛋白酶胰凝乳蛋質酶凝血酶彈性蛋白酶（三）絲氨酸蛋白酶揚州大學生物科學與技術學院以胰凝乳蛋白酶為模型疏水口袋活性位點殘基揚州大學生物科學與技術學院4.絲氨酸蛋白酶的催化機制催化三聯(lián)體親核攻擊穩(wěn)定His的正電形式揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院乙酸硝基苯酯硝基苯酚：400nm處有強吸收 乙酰酶復合物?；饔妹擋；饔糜萌斯さ孜镅芯恳饶榈鞍酌复呋磻獧C制揚州大學生物科學與技術學院趨同進化（convergent evolution）：催

19、化三聯(lián)體趨異進化（ divergent evolution）：底物專一性揚州大學生物科學與技術學院OH的親核催化(胰凝乳蛋白酶)揚州大學生物科學與技術學院（四）天冬氨酸蛋白酶（asparitic proteases）天冬氨酸蛋白酶產生于哺乳動物、霉菌和高等植物。酶在酸性pH（或有時中性）呈現(xiàn)活性，活性部位有兩個Asp。酶的活性部位是一個深寬的裂縫，是由2個并列的結構域形成的，能容納7個氨基酸殘基天冬氨酸蛋白酶胃蛋白酶凝乳酶組織蛋白酶腎素HIV-1蛋白酶揚州大學生物科學與技術學院堿催化天冬氨酸蛋白酶的作用機制：蛋白酶活性的pH依賴性支持廣義酸堿的催化模式活性部位存在兩個高度對稱的天冬氨酸殘基，稱

20、為“催化二聯(lián)體”揚州大學生物科學與技術學院HIV-I蛋白酶是一種天冬氨酸蛋白酶揚州大學生物科學與技術學院五、酶活性的調節(jié)控制揚州大學生物科學與技術學院（一）別構調控（allosteric regulation） 定義 別構調節(jié)：酶分子的非催化部位與某些化合物可逆地非共價結合后發(fā)生構象的改變，進而改變酶活性狀態(tài)。 別構酶：具有別構現(xiàn)象的酶。 別構劑：能使酶分子發(fā)生別構作用的物 質。通常為小分子代謝物或輔因子揚州大學生物科學與技術學院別別別別別別別揚州大學生物科學與技術學院效應物（調節(jié)物、別構劑）底物其他對酶活性影響促進同促反應正協(xié)同效應異促反應正協(xié)同效應抑制同促反應負協(xié)同效應異促反應負協(xié)同效應揚

21、州大學生物科學與技術學院ATP 別構激活劑CTP 別構抑制劑1. 天冬氨酸轉氨甲酰酶（ATCase)揚州大學生物科學與技術學院調節(jié)亞基催化亞基揚州大學生物科學與技術學院ATCase由催化亞基和調節(jié)亞基構成： 大亞基為催化亞基，有催化活性， 不與ATP和CTP結合；小亞基為調節(jié)亞基，無催化活性， 能與ATP和CTP結合;揚州大學生物科學與技術學院 2. 3磷酸甘油醛脫氫酶是糖分解途徑中的重要酶。與供能有關。 具有負協(xié)同效應的別構酶代表 該酶含4個亞基，可和4個NAD+結合，但結合常數(shù)不相同，酶結合NAD+后，發(fā)生構象變化。揚州大學生物科學與技術學院 即使NAD+濃度很低，酶也能結合，但是結合兩個

22、NAD+后，再要結合第三/四個NAD+就很難，需要提高濃度至少兩個數(shù)量級。實驗結果表明，酶只能結合兩分子NAD+，酶結合NAD+的位點，只有一半起反應稱為半位反應性 這是一種極端負協(xié)同效應。說明在一定底物濃度范圍內，底物濃度的變化不足以影響酶反應速率。這是負協(xié)同別構酶的特點。揚州大學生物科學與技術學院別構激活劑別構抑制劑3、 別構酶的性質（1）多亞基一部分亞基有活性中心，另一部分有別構調節(jié)中心揚州大學生物科學與技術學院S形曲線（正協(xié)同）表觀雙曲線（負協(xié)同效應） （2）別構酶的動力學揚州大學生物科學與技術學院 協(xié)同指數(shù)CI（cooperativity index）又稱為飽和比值Rs（satura

23、tion ratio）可用于鑒別不同的協(xié)同作用以及協(xié)同作用的程度。n 代表協(xié)同系數(shù)（Hill系數(shù)）典型的米氏酶Rs81具正協(xié)同效應別構酶Rs81，愈大效應愈顯著。n =1n 1n 1揚州大學生物科學與技術學院（3）K型效應物和V型效應物：K0.5：別構酶催化反應達到1/2 Vmax時的S改變K0.5不改變Vmax：K型效應物改變Vmax，不改變K0.5 ：V型效應物揚州大學生物科學與技術學院A為K型效應物B為V型效應物+.加激活劑；-.加抑制劑揚州大學生物科學與技術學院別構酶經加熱或用化學試劑等處理，可引起別構酶解離，失去調節(jié)活性。 脫敏后表現(xiàn)為米氏酶動力學雙曲線（4）脫敏作用揚州大學生物科學

24、與技術學院4、別構模型 1、對稱或協(xié)同模型（symmetry or concerted model,也稱齊變模型、MWC模型） 1965年由Monod、Wyman和Changeux提出。 該模型的要點 : 揚州大學生物科學與技術學院2、序變模型（sequential model，也稱KNF模型） 1966年由Koshland、Nemethy和Filmer提出。 該模型的要點 :揚州大學生物科學與技術學院（二）酶原的激活酶原(zymogen)：酶的無活性的前體酶原的激活：由無活性的酶原轉變?yōu)橛谢钚缘拿傅倪^程。酶原激活的意義：在特定的環(huán)境和條件下發(fā)揮作用；避免細胞自身消化；有的酶原可以視為酶的儲存

25、形式。揚州大學生物科學與技術學院酶原激活的機理:酶 原分子構象發(fā)生改變形成或暴露出酶的活性中心 一個或幾個特定的肽鍵斷裂，水解掉一個或幾個短肽在特定條件下?lián)P州大學生物科學與技術學院胰蛋白酶的激活纈天天天天賴異纈甘組SS絲SS腸激酶（激活作用）纈天天天天賴異甘組SS絲纈SS活性中心胰蛋白酶原胰蛋白酶為什么不直接以酶形式存在呢？保護正常組織不受傷害?；钚圆课粨P州大學生物科學與技術學院胰蛋白酶原胰蛋白酶六肽+彈性蛋白酶原彈性蛋白酶 + 碎片胰凝乳蛋白酶原-胰凝乳蛋白酶 +兩個二肽羧基肽酶原A羧基肽酶A + 碎片腸激酶自身催化腸激酶啟動的酶原激活出血性胰腺炎發(fā)病機制？揚州大學生物科學與技術學院揚州大學

26、生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院凝血機制：1、受傷血管收縮減少血流；2、血小板粘聚成栓堵住傷口；3、凝血相關因子的級聯(lián)激活作用揚州大學生物科學與技術學院共價調節(jié)酶通過其它酶對其多肽鏈上的某些基團進行可逆的共價修飾?？赡娴墓矁r修飾，使酶處于活性/非活性的互變狀態(tài)，從而調節(jié)酶的活性。（三）可逆的共價修飾可逆的共價修飾形式有56種，其中最重要的一種是磷酸化修飾。揚州大學生物科學與技術學院酶 酶-P 蛋白激酶，磷酸化磷酸酶，脫磷酸化酶的活性形式：可能是磷酸化也可能是脫磷酸化由核苷三磷酸（ATP）提供磷酸基，都需Mg2+。1. 蛋白質的磷酸化蛋白質的磷酸化與脫磷酸化是生物體普遍的調節(jié)方式，幾

27、乎涉及所有的生理及病理過程，在細胞信號轉導過程極其重要，真核細胞1/2到1/3的蛋白質可以磷酸化。揚州大學生物科學與技術學院底物蛋白質被磷酸化的氨基酸殘基有兩類：（1）“P-O”鍵連接，如Thr, Ser, Tyr, Asp, Glu（2）“P-N”鍵連接，如Lys, Arg, His主要是磷酸化Ser、Thr，個別為Tyr。被磷酸化的殘基可以是一個、兩個或多個。多數(shù)蛋白激酶表現(xiàn)一定的底物特異性，但是很少絕對特異性。底物蛋白質被磷酸化的氨基酸殘基附近的氨基酸組成和順序有其共有的特性。見下表揚州大學生物科學與技術學院X代表任何的氨基酸；B代表任何疏水氨基酸；Sp, Tp, 和Yp表示已經磷酸化的

28、Ser, Thr和Tyr殘基。揚州大學生物科學與技術學院主要是SerThr揚州大學生物科學與技術學院信使依賴性非信使依賴性cAMP依賴性（PKA）cGMP依賴性（PKG)Ca2+ /磷脂依賴性 （PKC)胞內信使激素/生長因子依賴性 蛋白激酶2. 蛋白激酶一個非常大的家族，已發(fā)現(xiàn)至少200種，結構上有很大的相似性，進化上相關。根據(jù)底物磷酸化類型分為：Ser/Thr型和 Tyr型。根據(jù)調節(jié)物分為：揚州大學生物科學與技術學院3. 幾種重要的蛋白激酶（1）蛋白激酶A（PKA）或cAMP依賴性蛋白激酶（cAPK)激活：磷酸化酶激酶、甘油三酯酶、酪氨酸羥化酶、RNA聚合酶II等，抑制：糖原合成酶、乙酰C

29、oA羧化酶、丙酮酸激酶等。（2）蛋白激酶C（PKC)廣泛分布在真核細胞特別是哺乳動物細胞的一種蛋白激酶，以無活性形式存在胞液中，當被Ca2+等激活后轉移到膜上，PKC對調節(jié)細胞代謝，分化，生長，增殖及信號轉導等起重要作用。（3）磷酸化酶激酶（PhK)是糖原代謝中一個關鍵的調節(jié)酶，其催化的反應是通過磷酸化作用使無活性的磷酸化酶b轉化成有活性的磷酸化酶a，從而加強糖原分解代謝揚州大學生物科學與技術學院六、同工酶（isoenzyme）（一）定義： 催化相同的化學反應，但其蛋白質分子結構、理化性質和免疫性能等方面都存在明顯差異的一組酶。揚州大學生物科學與技術學院（二）特點： 1、都是寡聚酶 2、不同的

30、亞基組成 3、不同亞基的活性中心非常相似 4、組織分布部位不同 5、所催化的反應有側重點揚州大學生物科學與技術學院如：揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院揚州大學生物科學與技術學院生理及臨床意義 同工酶可以作為遺傳標志，用于遺傳分析研究；用于解釋發(fā)育和組織分化過程中階段特有的代謝特征；在代謝調節(jié)上起著重要的作用；同工酶譜的改變有助于對疾?。ㄓ绕涫前┌Y）的診斷。心肌梗塞和肝病病人血清LDH同工酶譜的變化1酶活性心肌梗塞酶譜正常酶譜肝病酶譜2345揚州大學生物科學與技術學院12345酶活性遷移位置酶活性遷移位置ab(a) LDH同工酶電泳圖譜 (b)（a）正常人LDH同工酶電泳圖譜,（b）心肌梗塞病人血清LDH同工酶電泳圖譜