流感病毒在體內(nèi)免疫反應(yīng)過程

1、流感病毒在體內(nèi)免疫反應(yīng)過程Outline 一、非特異性免疫應(yīng)答二、特異性免疫應(yīng)答三、小結(jié)四、免疫反應(yīng)的驗(yàn)證22020/12/1流感病毒的結(jié)構(gòu) 根據(jù)核蛋白和基質(zhì)蛋白的抗原性,流感病毒可以分成甲(A)、乙(B)、丙(C)三種類型,其中甲型流感病毒根據(jù)其表面血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)分成許多亞型。32020/12/1Outline 42020/12/1Company Logo一、非特異性免疫應(yīng)答流感病毒感染的早期，首先引起防御屏障吞噬細(xì)胞干擾素NK細(xì)胞等為主的非特異性免疫52020/12/1Company Logo防御屏障作用 在感染的初期，呼吸道粘膜及其分泌物等構(gòu)成第一道防御屏障,阻擋流感

2、病毒的侵入，再通過纖毛的擺動(dòng)，排除病毒，凈化呼吸道。吞噬細(xì)胞的作用 當(dāng)?shù)谝坏婪谰€不足以阻擋病毒的入侵時(shí)，病毒則侵入呼吸道粘膜下組織，此時(shí)局部的吞噬細(xì)胞吞噬病原體。與此同時(shí)，補(bǔ)體被激活，其活化產(chǎn)物C3b /C4b通過調(diào)理作用，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬能力。活化的吞噬細(xì)胞釋放大量的促炎因子和炎癥介質(zhì)，進(jìn)一步增強(qiáng)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。一、非特異性免疫應(yīng)答62020/12/1Company LogoNK細(xì)胞的作用 NK細(xì)胞是自然殺傷的淋巴細(xì)胞，在干擾素和細(xì)胞因子的誘導(dǎo)下， NK細(xì)胞即可活化，活化的NK細(xì)胞直接與病毒感染的細(xì)胞(靶細(xì)胞)接觸，并通過釋放穿孔素裂解靶細(xì)胞，達(dá)到抗病毒的作用。一、非特異性免疫應(yīng)答干擾

3、素的作用 干擾素( IFN)是病毒感染的細(xì)胞或其它活化細(xì)胞產(chǎn)生的一類分泌性蛋白，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性。干擾素可通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白( AV P)，該蛋白抑制病毒的復(fù)制、限制病毒的擴(kuò)散。在感染的起始階段特異性免疫尚未形成之前，干擾素發(fā)揮重要的抗病毒作用。72020/12/1Company Logo二、特異性免疫應(yīng)答 病毒感染屬細(xì)胞內(nèi)感染,所以細(xì)胞免疫的作用尤為突出。流感病毒侵入機(jī)體后，依靠血凝素(HA)吸附于宿主細(xì)胞表面，經(jīng)過吞飲進(jìn)入胞漿后在其內(nèi)合成病毒蛋白而成為內(nèi)源性抗原，此內(nèi)源性抗原降解為抗原肽，然后與MHC-1類分子結(jié)合成抗原肽MHC-1類復(fù)合物，然后表達(dá)于細(xì)

4、胞膜上，供CD8+T細(xì)胞識(shí)別。細(xì)胞免疫應(yīng)答82020/12/1Company Logo二、特異性免疫應(yīng)答 該細(xì)胞稱抗原提呈細(xì)胞( APC) ；APC膜上的抗原肽 MHC-1類復(fù)合物與T細(xì)胞表面的抗原受體(TCR)特異性結(jié)合，使T細(xì)胞活化、增殖、分化為細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CT L)。CT L可通過抗原受體識(shí)別流感病毒感染的(靶細(xì)胞)細(xì)胞，然后釋放穿孔素和顆粒酶等物質(zhì)，攻擊和殺傷靶細(xì)胞，達(dá)到清除或釋放在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的病毒體，從而在抗體的配合下清除病毒。CTL還通過分泌IFN、TN F等細(xì)胞因子發(fā)揮抗病毒作用。CD4+ T 細(xì)胞受流感病毒刺激后被活化、增殖、分化為效應(yīng)性Th 1細(xì)胞，并釋放多種細(xì)胞因子，誘

5、發(fā)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)CTL的增殖和分化，在抗病毒感染中起重要作用。細(xì)胞免疫應(yīng)答92020/12/1Company Logo體液免疫 體液免疫主要作用于細(xì)胞外游離的病毒。流感病毒侵入機(jī)體后，B細(xì)胞膜上的抗原受體(BCR)與其特異性結(jié)合，成為B細(xì)胞活化的信號(hào)，使B細(xì)胞活化、增殖、分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞在流感病毒抗原的刺激下合成并分泌具有抗病毒效應(yīng)的抗體。二、特異性免疫應(yīng)答102020/12/1Company Logo病毒中和抗體: 該抗體能與細(xì)胞外游離的病毒結(jié)合，封閉其細(xì)胞受體結(jié)合的病毒抗原表位或改變病毒表面抗原構(gòu)型，阻止病毒吸附、侵入易感細(xì)胞，但不能直接殺滅病毒。血凝抑制抗體:表面含有血凝素的流感病毒

6、可刺激機(jī)體產(chǎn)生血凝抑制抗體，該抗體能中和病毒的感染性。補(bǔ)體結(jié)合抗體: 此類抗體不能中和病毒感染性，但可通過調(diào)理作用增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用。二、特異性免疫應(yīng)答體液免疫中的抗體：112020/12/1Company Logo 總之，機(jī)體抗流感病毒免疫應(yīng)答由非特異性免疫應(yīng)答和特異性免疫應(yīng)答共同來完成。非特異性免疫先于特異性免疫發(fā)生，主要通過屏障結(jié)構(gòu)、非特異性免疫細(xì)胞(吞噬細(xì)胞、NK細(xì)胞)和體液免疫分子(補(bǔ)體、干擾素)等發(fā)揮抗病毒作用。特異性免疫是建立在非特異性免疫的基礎(chǔ)上，受流感病毒抗原的誘導(dǎo)而發(fā)生。但特異性免疫的作用更強(qiáng)烈、更有效、更具有針對(duì)性。主要通過細(xì)胞免疫和體液免疫發(fā)揮特異性抗流感病毒作用。

7、三、小結(jié)122020/12/1Company Logo 流感病毒多種多樣，但只要感染過同一種病毒發(fā)生了感冒，之后再感染同一類病毒時(shí)就不會(huì)感冒了。這是因?yàn)槊庖哂洃?。用同一抗原再次免疫時(shí)，可引起比初次更強(qiáng)的抗體產(chǎn)生，稱之為再次免疫應(yīng)答或免疫記憶，無論在體液免疫或細(xì)胞免疫均可發(fā)生免疫記憶現(xiàn)象。在體液免疫時(shí)，對(duì)TD抗原的再次應(yīng)答可表現(xiàn)為抗體滴度明顯上升，免疫球蛋白類別可由IgM轉(zhuǎn)換為IgG，而且抗體親和力增強(qiáng)。提示再次應(yīng)答不僅發(fā)生抗體量的變化，而且也發(fā)生了質(zhì)的變化。實(shí)驗(yàn)證明，免疫記憶的基礎(chǔ)是免疫記憶細(xì)胞的產(chǎn)生。三、小結(jié)132020/12/1Company Logo（1）IgA的檢測(cè)原理：病毒首先侵襲呼

8、吸道黏膜， 而黏膜表面的分泌性 IgA 可以有選擇的轉(zhuǎn)移到黏膜表面， 能夠結(jié)合病毒防止其粘附和進(jìn)入。因此，只需檢測(cè)IgA 的變化即可證實(shí)是否為免疫反應(yīng)。四、免疫反應(yīng)的驗(yàn)證142020/12/1Company Logo方法：將小鼠隨機(jī)分 2 組，設(shè)病毒組和正常組。在乙醚輕度麻醉下， 滴鼻感染 15 滴LD 50 流感病毒液，感染后 5 天， 殺剖小鼠， 稱體重和肺重測(cè)定肺指數(shù)。采血分離血清， 收集鼻咽沖洗液、 支氣管肺泡灌洗液、 腸道沖洗液進(jìn)行 ELISA法檢測(cè) IgA 含量。四、免疫反應(yīng)的驗(yàn)證152020/12/1四、免疫反應(yīng)的驗(yàn)證（2）外周血IL-12水平的檢測(cè)原理：白細(xì)胞介素12又稱NK細(xì)

9、胞刺激因子(NKSF)。IL-12主要由單核巨唾細(xì)胞、NK細(xì)胞和B細(xì)胞分泌,主要生物學(xué)活性有:促進(jìn)激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖;增強(qiáng)Th細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞及CTL的生物學(xué)活性。誘導(dǎo)Tn向Th1分化,并促進(jìn)Th1的增殖和發(fā)育,與IL - 4共同調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡,調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答。162020/12/1Company Logo實(shí)驗(yàn)對(duì)象：1、健康對(duì)照組：收集XX醫(yī)院健康體檢者20名2、流感癥狀組：收集XX醫(yī)院明確診斷的流感癥狀患者26名；經(jīng)rRT-PCR方法確定為非甲型HlNl流感病毒感染3、輕癥甲流組：收集XX醫(yī)院診斷明確甲型H1N1流感病毒感染住院患者29名;經(jīng)rRT-PCR方法

10、確診為甲型 H1N1病毒感染，癥狀較輕4、重癥甲流組：收集XX醫(yī)院明確診斷甲型H1N1病毒感染住院患者名13名;經(jīng)rRT-PCR方法確定為甲型H1N1病毒感染,并且癥狀較重四、免疫反應(yīng)的驗(yàn)證172020/12/1實(shí)驗(yàn)過程：實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:板條包被ELASA法測(cè)定檢測(cè)物濃度四、免疫反應(yīng)的驗(yàn)證182020/12/1 結(jié)論：流感病毒感染呼吸道后,通過呼吸器官上皮細(xì)胞感染其下方樹突狀細(xì)胞和巨唾細(xì)胞并且在這些細(xì)胞中傳播,樹突狀細(xì)胞和巨嗟細(xì)胞可以分秘抗病毒的細(xì)胞因子例如TNF-、IL-12、IL-18等來協(xié)調(diào)有效的先天免疫反應(yīng)來對(duì)抗病毒。四、免疫反應(yīng)的驗(yàn)證192020/12/1Company Logo（3）外周血T淋巴細(xì)胞亞群及B、NK細(xì)胞百分率的測(cè)定步驟：1. 標(biāo)本采集及制備 2. 染色及固定細(xì)胞 3. 流式細(xì)胞儀上T淋巴細(xì)胞亞群及B、NK的檢測(cè)及分析 四、免疫反應(yīng)的驗(yàn)證202020/12/1 結(jié)