顯微鏡的使用和海洋細菌的觀察 實驗報告

1、實驗一顯微鏡的使用和海洋細菌的觀察一、目的要求：1、了解普通光學顯微鏡的構造。2、學習顯微鏡的正確使用維護。3、觀察不同細菌形成菌落特征。4、學習活細菌形態(tài)的觀察方法。二、實驗說明顯微鏡是微生物研究的工具，顯微鏡種類繁多，有光學顯微鏡、 相差、暗視野、熒光及電子顯微鏡等。但它們的原理和結構基本相同。 下面以普通光學顯微鏡為例簡要介紹其原理及結構。（一）原理一般顯微鏡的光學系統(tǒng)由兩部分組成。1、成像系統(tǒng)由目鏡、物鏡組成。物鏡將標本作第一次放大，然 后目鏡再將第一次放大的實像作第二次放大。2、照明系統(tǒng)由光源、光圈調節(jié)器和聚光鏡組成。光源可選用人 工光源，人工光源由鎢鹵素燈發(fā)出，經(jīng)光圈調節(jié)器調解后，

2、然后聚光 鏡將外來光線聚在標本上，從而照明了標本，便于觀察。（二）結構由光學部分（光圈調節(jié)器、聚光器、物鏡和目鏡）和機械部分（鏡 座、鏡筒、鏡臂、轉換器、載物臺、推動器、粗動螺旋和微動螺旋）組成（圖1-2），主要部分件有:1 m頭2.宜鎮(zhèn)3.植曲固緊螺釘占笳換囂5.物統(tǒng)丘載物臺T素光慎升降手輪&聚光鏡固囊螺釘公聚謎饒t帶孔徑光闈）Id下聚光兢U殼縻施袖12一電源開關D撤尚移動手段L4,辨向啊手輪15.微動調焦鯉鈿 W粗動調集旋祖17標軍片夾持黝 就霸臂19.單目臬鏡筒）叫.雙人示教頭t鏡筒）加-三目頭 鏡筒）心.兢座i 0-24耳微鏡的結構1、目鏡 通常備有5X、10X、16X，一般選用10X

3、。2、物鏡 它對分辯力有著決定性影響。一般低倍鏡（10X）、高 倍鏡（40X ）和油鏡（100X）,通常按順序安裝在轉換器上。3、聚光鏡 具有使樣品明亮的集光作用，同時還影響物像的分 辯力和反差，若將聚光鏡的光圈開放到超過物鏡的數(shù)值孔徑時，便產(chǎn) 生光斑，若收擾光圈，分辯力下降但反差增大。4、載物臺 又稱鏡臺，載放樣品用。一般都裝有一個推進器 可由移動手輪作橫向或縱向移動載玻片。5、粗、細調旋轉 是調節(jié)載物臺或鏡筒上下移動的裝置。細調 旋扭轉動一圈的升降值為0.2mm，亥U值為0.002 mm。（三）顯微鏡性能1、數(shù)值孔徑顯微鏡分辯力的高低決定于光學系統(tǒng)的各種條件， 但起決定性影響的是物鏡。物鏡

4、的性能可用數(shù)值孔徑（N.A來表示）。 數(shù)值孔徑又叫開口率，它與顯微鏡的分辯力成正比，與焦深成反比， 與鏡像亮度平方根成正比。2、分辨力分辨力系指分辨物體細微結構的能力。D值愈小， 分辨力愈高，物像愈清晰。3、 放大倍數(shù) 顯微鏡放大倍數(shù)（V）等于物鏡放大率（VI）和 目鏡放大率（V2）的乘積V=V2XV2。4、焦深在顯微鏡下觀察一個標本時，焦點對在某一像面時，物 像最清晰，這像面為目的面。在視野內(nèi)除目的面外，還能在目的面的 上面和下面看見物像，這兩個面之間的距離稱為焦深。物鏡的焦深和 開口率及放大率成反比，即開口率和放大率愈大，焦深愈小。因此調 節(jié)高倍鏡比調節(jié)低倍鏡要仔細，否則容易使物像滑過而找

5、不到。三、實驗器材顯微鏡、載玻片、蓋玻片、酒精燈、接種環(huán)。以改良Zobell 2216E培養(yǎng)基采用涂布法分離的海洋細菌，海水樣 品采自唐山附近海域。四、實驗方法步驟（一）顯微鏡使用1、取鏡 打開鏡箱、右手握住鏡臂，取出顯微鏡，用左手托住 鏡座放于平穩(wěn)的實驗臺上。鏡檢者姿勢應端正，觀察時兩眼必須同時 睜開，以減少疲勞。2、調光 打開電源開關。（1）將低倍鏡轉至鏡筒下方，旋轉粗調節(jié)器，使鏡頭與載玻臺 相距0.5cm。（2）觀察光源強弱，調節(jié)光源強弱、光圈及升降聚光鏡即可。 使視野內(nèi)光線均勻明亮。3、低倍鏡觀察 將待測標本置載物臺上，用卡尺夾住，移動推 動器，使觀察標本處于物鏡正下方。轉動粗螺旋，使

6、載物臺上升（或 鏡筒下降）至距標本0.5cm處，由目鏡觀察，然后慢慢下降載物臺（或 上升鏡筒）直至出現(xiàn)模糊像后，用細調節(jié)器調至物像清晰為止。4、高倍鏡觀察低倍鏡觀察至清晰物像后，將觀察的部位移至 視野中央，轉換高低鏡，然后用細調節(jié)器調至物像清晰。（二）活細菌觀察生活的細菌在顯微鏡下是透明的，不易觀察。因此觀察時應減弱 光照、增加反差，才能獲得較好的效果。如果光照很強，細菌和周圍 液體的差別就難以辯別。取載玻片一塊，加無菌海水一滴，用接種環(huán)取少許菌在水滴中沾 幾下，當水滴微渾時即將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒去多余菌體，然 后蓋上玻片。鏡檢時先用低倍鏡調焦，然后轉高倍鏡觀察。五、實驗結果將菌落觀察及顯微鏡鏡檢結果填入下表中。菌落1菌落2菌落3顏色大小菌落形態(tài)隆起邊緣數(shù)量菌體形態(tài)說明：1、菌落大小估算即可2、形態(tài)可采用點狀、圓形、紡錘形、不規(guī)則、假根狀、絲狀等 詞語。3、隆起可采用扁平、拱起、凸透鏡狀、臍凹狀、枕狀等詞語。4、邊緣可采用完整、波狀、裂葉狀、嚙蝕狀、絲狀、卷曲等詞 語。5、數(shù)量為菌落數(shù)量，估算一下即可。無法