實驗二微生物接種技術(shù)

1、實驗二 微生物接種技術(shù)一、目的微生物接種技術(shù)就是在滅菌條件下，用接種工具（針、環(huán)）從一支原菌種中挑取少許菌體，接入到另一支新的培養(yǎng)基上進擴大培養(yǎng)的技術(shù)。了解學習滅菌操作技術(shù)；掌握斜面接種技術(shù)。二、原理接種就是在滅菌條件下，用接種工具（針、環(huán)）（如圖3-1）從一支原菌種中挑取少許菌體，接入到另一支新的培養(yǎng)基上進擴大培養(yǎng)的技術(shù)。接種就是在滅菌條件下，用接種工具（針、環(huán)）從一支原菌種中挑取少許菌體，接入到另一支新的培養(yǎng)基上進擴大培養(yǎng)的技術(shù)。我們要想得到大量的菌種，適應生產(chǎn)，科研和教學要求，就要進行微生物的接種，擴大菌種數(shù)量。接種因使用不同容器、不同的培養(yǎng)基，達到不同的目的，而有不同的接種方法，但是它

2、們的基本要求是相同的。通常接種都應在空氣經(jīng)過消毒滅菌過的“接種室”、或接種箱或超凈工作臺內(nèi)進行。三、材料、試劑與器具材料 蘇云金桿菌斜面菌種，牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基。試劑 75%酒精或1：50的新法爾天水溶液。超凈工作臺，接種針（環(huán)），接種工具（如圖3-1）、酒精燈等。圖3-1 接種工具接種環(huán)；B.接種針；C.接種鉤；D.接種鏟；E.F.玻璃涂布器四、操作步驟（一）準備工作1接種或接種室使用前半天先擦洗干凈，然后每立方米體積用510毫升福爾馬林盛在容器中加熱熏蒸或者是用1/10的福爾馬林重量的高錳酸鉀加到盛有福爾馬林的容器中，不用加熱，亦可進行熏蒸；也可用5%的石炭酸噴務(wù)滅菌；用紫外燈照射20

3、30min。也可達到滅菌的目的。應注意，要把接種時要所需的用具（如接種針（環(huán)），酒精燈等）及培養(yǎng)基放入接種箱（室）一起滅菌消毒，但是菌種不能放入，以免死。超凈工作要預先通風，紫外線照射30min方可使用。2進入接種室前先把手洗凈，再用75%酒精或新潔爾滅擦兩手，菌種試管表面同樣要用酒精或新潔爾滅抹擦后才放入接種室（箱內(nèi)）。（二）接種技術(shù)1、斜面菌種接種技術(shù)（從斜面培養(yǎng)基上的菌種接種至另一新的斜面培養(yǎng)基上的方法）。（1）準備工作就緒后，點然酒精燈。（2）將菌種和斜面培養(yǎng)基的兩支試管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指拉于兩試管之間的部分，斜面向上，并使它們拉于水平位置，也可將試管放在左手掌中，用

4、手指托住試管。（3）先將棉塞用右手擰轉(zhuǎn)松動，便以接種時拔出。（4）右手拿接種環(huán)（拿的方法就和拿鋼筆一樣），在火焰上將環(huán)的部分燒紅滅菌。環(huán)以上凡是在接種時可能進入試管的部分，均應用火燒過（如圖3-2）。以下操作都要把試管口靠近火焰旁進行。（5）用右手小指、無名指和手掌拔掉棉塞（如圖3-2）。（6）用火焰灼燒管口，灼燒時應不斷轉(zhuǎn)動試管口（靠手腕的動作，使試管口沾染的小量菌得以燒死）。（如圖3-2）。（7）將燒過的接種針（環(huán)）觸動沒有長菌的培養(yǎng)基部分，使其冷卻，以免燒死被接種的菌體，然后輕輕接觸菌體，取出少許，慢慢將接種針（環(huán)）抽出試管（如圖3-2）。（8）迅速將接種針（環(huán)）在火焰旁無菌區(qū)伸進另一試

5、管，在培養(yǎng)基斜面上輕輕劃線，在上面接細菌，劃線時要由底部劃到頂部，由上而上，劃線可劃之字形，或劃幾條直線，但都不要把培養(yǎng)基劃破，也不要使菌種沾污管壁（如圖3-2）。（9）將接種針（環(huán)）抽出，灼燒試管口，并在火焰旁將棉塞塞上。塞棉塞時，不要用試管去迎棉塞，以免試管在運動時納入不潔空氣（如圖3-2）。（10）把針（環(huán)）在火焰上再灼紅滅菌，放下接種鐘（環(huán)）后，再騰出手來將塞塞緊。（如圖3-2）。（11）全部培養(yǎng)基接種完畢后，要將試管斜面培養(yǎng)基包扎好，并標明姓名、時間和菌種名稱；整理好接種室（箱）的臺面，搞好清潔衛(wèi)生。2、液體接種技術(shù)（由斜面菌接入液體培養(yǎng)基內(nèi)或液體菌種接入液體培養(yǎng)基）（1）準備工作和

6、操作方法與前相同，但可使試管向上略斜，以免培養(yǎng)液流出。（2）將取得菌種的接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基時，可使環(huán)在液體表面與管壁接觸的部分輕輕摩擦。接種后塞棉塞，將試管在手掌中輕輕搖動，使菌體在培養(yǎng)基中分散開來。（3）由液體菌種接種液體培養(yǎng)基時，接種用無菌滴管或移液管，接種量通常為培養(yǎng)液體積的1/10。無菌操作的注意事項與前相同，只是移液管不同于接種針，系由玻璃做成，它不能在火焰上灼燒，接種前在火焰上迅速通過一兩次即可。3、穿刺接種技術(shù)（深層柱形固體培養(yǎng)基的接種技術(shù)）（如圖3-3）（1）取兩支新鮮半固體牛肉膏蛋白胨深層柱狀培養(yǎng)基，做好標記（寫上菌種名、接種日期和接種人等）。（2）接種的方法是，用接種針沾取少量待接菌種，然后從柱狀培養(yǎng)基的表面中心穿入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路線抽出接種針，注意接種針不要移動。以上接好種的材料置于30下培養(yǎng)2448h。圖3-3 穿刺接種技術(shù)五、注意事項1、菌種取出后，接種針（環(huán)）不要通過火焰、以免燒死菌體。2、斜面接種時，不要使接種針（環(huán)）的碰到管壁；不要劃破培養(yǎng)基，但也不能在試管空間劃，一定要接觸到斜面表面