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文檔簡介
1、文獻(wnxin)閱讀整理 共三十三頁超聲波協(xié)同微波提取(tq)黑小麥色素的工藝優(yōu)化1. 最佳提取工藝條件為液料比11.9 mL/g,提取時間121 s和微波功率299 W,在此條件下,吸光值達0.704。工藝穩(wěn)定可靠,可在生產中應用。2. 超聲波協(xié)同微波提取作為一種優(yōu)良的提取方法,具有操作簡便快捷、 提取時間短、 提出率高等特點, 目前已廣泛應用在生物活性物質的提取方面 。3.原料與試劑黑小麥麩皮,其它試劑均為分析純4.方法(1)超聲波協(xié)同微波提取稱取3 g黑小麥麩皮于100 mL特制三角瓶中,再加入一定體積一定濃度的乙醇溶液后,抽濾、定容、測定。(2)最大吸收波長的確定用1.0 cm比色皿
2、,在狹縫寬度為2 nm,采樣間隔為0.50 nm,掃描速度為快速的儀器條件下,用TU-1810紫外分光光度計對色素從400 nm700 nm進行(jnxng)自動光譜掃描。共三十三頁 由圖1可知,該色素在532 nm處有最大吸收。因此,在此波長(bchng)下測定其吸光度值。(3) 單因素試驗分別以乙醇濃度、液料比、提取時間和微波功率為影響因素考察其對吸光值的影響。共三十三頁 根據Box-Behnken試驗設計原理,在單因素試驗的基礎上,選取(xunq)影響顯著的液料比、提取時間和微波功率3個影響因素,采用3因素3水平的響應曲面分析方法,試驗因素與水平設計見表1。共17個試驗點:其中12個為析
3、因點,5個為中心點。共三十三頁單因素(yn s)試驗2.1.1 乙醇濃度的影響試驗設定液料比10 mL/g、微波時間120 s和微波功率300 W,考慮不同乙醇濃度對得率影響,結果見圖2。從圖2可知,當乙醇濃度小于50%時,隨著(su zhe)乙醇濃度的增加,吸光值隨之增加;在50%時達到峰值,這是因為色素是有一定極性的化合物,根據相似相溶原理,當提取劑的極性與此色素的極性更加接近時,從而使吸光值最大。因此在此選擇乙醇濃度50%進行后續(xù)試驗。共三十三頁2.1.2 液料比影響(yngxing) 試驗設定乙醇濃度50%、提取時間120 s和微波功率(gngl)300 W,考慮不同液料比對得率影響,
4、結果見圖3。 由圖3可知,隨著液料比提高,黑小麥色素吸光值先增加后降低,在液料比為12 mL/g時吸光值達到最高。這主要是因為前期溶劑量越大,有效成分浸出越完全,吸光值也就越大;但當溶劑過大時,會造成溶劑和能源的浪費。因此確定液料比為12 mL/g,作為后續(xù)試驗繼續(xù)考察。共三十三頁2.1.3 提取(tq)時間的影響 試驗設定乙醇濃度50%、液料比10 mL/g和微波功率300 W,考慮不同提取時間對得率影響,結果見圖4。由圖4可知,隨著提取時間的增加(zngji),黑小麥色素吸光值不斷增加(zngji),在120 s時達到峰值。再繼續(xù)增加時間,色素吸光值明顯下降,這可能是因為隨著超聲時 間的增
5、加,溫度急劇升高,導致色素分解所致。因此選擇提取時間120 s,作為后續(xù)試驗繼續(xù)考察。共三十三頁2.1.4 微波功率(gngl)的影響試驗設定乙醇濃度50%、液料比10 mL/g和提取時間120 s,考慮不同微波功率對得率影響,結果見圖5。由圖5可知,隨著微波功率的增加,物質的加熱程度隨著增加,黑小麥色素的吸光值也增加;在超聲功率達到300 W之后,吸光值有減少趨勢,這可能是由于高超聲功率導致的熱效應使得色素分解所致(su zh)。因此確定超聲功率300 W。共三十三頁寧夏枸杞子極性提取物在食用油高溫氧化(ynghu)中的作用研究 本試驗通過單因素試驗和響應曲面分析,得到超聲波協(xié)同(xitng
6、)微波提取黑小麥色素的最佳工藝條件為液料比11.9 mL/g,提取時間121 s和微波功率299 W,實際測得的吸光值為0.704,與理論預測值比較誤差僅為 0.72%,該方法穩(wěn)定可靠。共三十三頁黑粒小麥麩皮中花色(hus)苷的提取及性質研究 為了對我校自主(zzh)培育的黑粒小麥麩皮中花色苷進行開發(fā)利用, 本試驗以黑粒小麥麩皮為原料,進行了花色苷的提取條件和理化性質的研究。結果表明, 用 pH 1 0、 40% 的乙醇作提取劑, 在料液比為 1 20(g/mL)、 70 條件下浸提80 min, 提取效果最好, 花色苷得率為14 5%;該花色苷可見光范圍內的最大吸收波長為 525 nm, p
7、H 對其影響明顯, 溫度影響不大, 60 以內比較穩(wěn)定。Mg 2 + 、 K+和 Al 3 + 對該花色苷有很好的增色、 穩(wěn)定作用, Ca 2 + 和 Fe 2 + 對其穩(wěn)定作用影響不大, Cu 2 + 、 Zn 2 + 和 Fe 3 + 使其明顯褪色。該花色苷耐氧化性、 耐還原性差, 耐光性好。蔗糖、 檸檬酸對其有明顯的褪色作用, 苯甲酸鈉在低質量濃度( 0 1 mg/mL)時對其基本無影響, 在高質量濃度( 0 2 mg/mL)時有一定的褪色作用, 鹽對其有一定的增色、 穩(wěn)定作用。共三十三頁1 3 測試方法 花色苷提取率采用比色法:通過測定最大波長處的吸光度來計算總花色苷質量分數, 此方法
8、被用來對黑米(hi m)色素進行定量分析 5 。 其計算公式為: 總花色苷質量分數(mg/g) =A V N/(982 m) 式中:A 為吸光度;V 為定容體積/mL;98 2 為花第 26 卷第 10 期 李 偉等 黑粒小麥麩皮中花色苷的提取及性質研究色苷色的平均消光系數;N 為比色時的稀釋倍數(本試驗中 N 都為 2);m 為被測樣品的質量。 由上式可看出, 當樣品質量、 定容體積、 比色時的稀釋倍數相同時, 總花色苷質量分數與吸光度 A成正比, 為了描述方便在本文中直接用吸光度(A)代表花色苷質量分數。共三十三頁1 4 黑粒小麥麩皮(f p)中花色苷提取1 4 1 花色苷的提取光譜特征分
9、析 稱取黑粒小麥麩皮 0 500 g, 加入 10 00 mLpH 1 0的 40%乙醇溶液, 立即放入 HH 6 數顯恒溫水浴鍋中 70 浸提 120 min。倒出色素液冷卻至室溫, 離心 10 min(轉速4 800 r/min), 上清液為花色苷提取液, 用 UV 2550 紫外可見(kjin)分光光度計在 200 600 nm 波長內掃描其吸收光譜, 確定最大吸收波長(max )。1 4 2 正交試驗 在前期單因素試驗確定的最佳提取工藝條件基礎上, 選取 L 9 (3 4 )正交試驗表, 對乙醇體積分數、 提取溫度、 時間和料液比在 4 個不同水平進行優(yōu)化。共三十三頁1 5 黑粒小麥麩
10、皮中花色(hus)苷理化性質的測定1 5 1 pH 對花色苷穩(wěn)定性的影響取花色苷提取液 20 00 mL 7 份, 用 Na 2 HPO 4 檸檬酸緩沖液配制不同 pH 提取液, 測定溶液在 max處的吸光度(A), 放置室內暗處, 一周后在 max 處測溶液吸光度并觀察其顏色變化。1 5 2 溫度(wnd)對花色苷穩(wěn)定性的影響取花色苷提取液 200 mL 裝于 5 個碘量瓶中, 在不同溫度水浴中各加熱 3 h, 每隔 30 min 取一次樣,迅速冷卻后測定 max 處的吸光度, 并觀察其顏色變化。1 5 3 光照對花色苷穩(wěn)定性的影響取花色苷提取液 200 mL 分別裝于 3 個碘量瓶中, 分
11、別置于陽光直射處(夏季室外晴天)、 室內自然光處、 室內避光處保存, 定期測定其 max 處的吸光度,并觀察其顏色變化。共三十三頁 1 5 4 金屬離子對花色苷穩(wěn)定性的影響 分別配制含 Mg 2 + 、 Al 3 + 、 Zn 2 + 、 Cu 2 + 、 K+、 Fe 2 + 、Fe 3 + 、 Ca 2 + 離子濃度達 5 0 104 mol/L 的溶液, 吸取花色苷提取液 5 00 mL, 加入金屬離子溶液定容至15 00 mL。在室內暗處放置 7 d 后, 測定其 max 處的吸光度并觀察其顏色(yns)變化。1 5 5 氧化還原劑對花色苷穩(wěn)定性的影響 取 9 份 10 00 mL 花
12、色苷提取液, 加入不同濃度的 VC(維生素 C)、 H 2 O 2 和 Na 2 SO 3 , 定容為 25 00mL, 測定其在 7 d 后 max 處的吸光度。1 5 6 食品添加劑對花色苷穩(wěn)定性的影響 取 5 份 10 00 mL 花色苷提取液, 分別加不同濃度的食品添加劑(蔗糖、 鹽、 苯甲酸鈉、 檸檬酸)溶液15 00 mL, 測定其在 7 d 后 max 處的吸光度。共三十三頁2 結果(ji gu)與分析 2 1 光譜特征 由圖1 可見(kjin), 以 pH 1 0 的乙醇浸提, 所得色素提取液在紫外光區(qū)280 285 nm 有較強的吸收峰, 為花色苷酰基結構的特征峰;在可見光范
13、圍內的最大吸收在 525 nm 處, 為典型的花青素光譜特性6 。自然界花青素多以與糖苷鍵結合的形式存在, 所以推斷黑粒麩皮色素為花色苷類, 這與前人研究結果相符。圖 1 黑粒小麥麩皮色素花色苷紫外全掃描圖(200 800 nm)共三十三頁 2 2 提取條件的選擇 由表 2 的極差分析(fnx)可知, 各因素的影響力為B 提取溫度 A 乙醇體積分數 D 料液比 C 提取時間, 據表 2 中的吸光度、 K 值和平均值(K/4)可知,最佳提取方案是 A 2 B 4 C 2 D 2 , 即乙醇體積分數為40%, 溫度為 70 , 時間 80 min, 料液比為 1 20。按此優(yōu)化條件重做一次試驗,
14、得其平均吸光度值為 0983, 與正交試驗最大值 0 997(A 2 B 4 C 3 D 2 )無顯著差異(P 0 05), 但卻更經濟、 實用。此條件下花色苷得率為 14 50%。共三十三頁2 3 黑粒小麥(xiomi)麩皮花色苷理化性質2 3 1 pH 對花色苷穩(wěn)定性的影響7 d 后在 pH 5 0 時, 該花色苷提取液為紅色透明狀, 穩(wěn)定性較好;pH 5 0 時, 花色苷提取液顏色由淺紅變黃綠色, 并出現混濁甚至沉淀現象, 說明花色苷在中性和堿性范圍(fnwi)內色素穩(wěn)定性很差, 花色苷結構易發(fā)生變化。顏色變化是因為隨 pH 變化, 花色苷在水溶液中存在形式為花徉鹽式(紅色) 查耳酮式(
15、無色) 醌式(藍色)。pH 越大, 花色苷的降解速度越快。由此說明, 花色苷在酸性條件下穩(wěn)定性較好, 可作為酸性食品添加劑。2 3 2 溫度對花色苷穩(wěn)定性的影響 從圖2 可以看出, 加熱溫度小于60 時, 溫度及受熱時間都對花色苷提取液的吸光度影響較小, 即較低溫下花色苷對熱表現出較好穩(wěn)定性;而當加熱溫度高于 80 , 隨著時間的延長, 花色苷吸光度明顯下降, 說明花色苷在高溫下穩(wěn)定性差, 這可能是花色苷母體結構受熱生成無色查爾酮式結構的緣故。共三十三頁 2 3 3 光照對花色苷穩(wěn)定性的影響由圖 3 知, 花色苷溶液光照 3 d 內吸光值變化很小, 說明短時間內花色苷對光照不敏感;隨著時間的延
16、長, 花色苷溶液在光照貯存和避光貯存下, 吸光度均有一定幅度降低, 但在陽光直射條件下降低最明顯, 說明光對花色苷有一定的破壞作用, 使用時要避光保存。圖 3 光照對花色苷穩(wěn)定性的影響2 3 4 金屬離子(lz)對花色苷穩(wěn)定性的影響圖 4 結果表明, 金屬離子對該花色苷的穩(wěn)定性作用由大到小為:Mg 2 + K+ Al 3 + Ca 2 + Fe 2 + Cu 2 + Zn 2 + Fe 3 + , 其中 Mg 2 + 、 K+和 Al 3 + 對花色苷有很好的增色、 穩(wěn)定作用;Ca 2 + 和 Fe 2 + 對花色苷的穩(wěn)定性影響不大;Cu 2 + 、 Zn 2 + 和 Fe 3 + 使花色苷明
17、顯褪色, 并伴有沉淀, 這可能是因為花色苷與金屬離子形成了絡合物, 因此, 在生產應用中應盡量避免與Cu 2 + 、 Zn 2 + 和 Fe 3 + 等金屬離子的接觸共三十三頁2 3 5 氧化還原劑對花色(hus)苷穩(wěn)定性的影響由圖 5 可見, 隨著氧化劑 VC、 H 2 O 2 和還原劑Na 2 SO 3 濃度的增大, 花色苷的吸光度急劇下降, 顏色逐漸消退, 其中 Na 2 SO 3 影響最大, 0 5 mg/mL 就能使花色苷褪色, 原因是 SO 2 作用于花色苷類色素的苯并吡喃環(huán)的 4 位碳上, 生成了一種無色物質,表明該色素耐氧化、 耐還原性差, 在使用時應盡量避免與氧化性或還原性物
18、質接觸。2 3 6 食品添加劑對花色苷穩(wěn)定性的影響從表 4 可見, 加入一定濃度的 NaCl, 該花色苷溶液的吸光度從 0.849(對照)上升到 0 985, 增加了1284%, 說明 NaCl 對該花色苷有一定增色(zn s)、 穩(wěn)定作用;加入蔗糖和檸檬酸后, 該花色苷溶液的吸光分別降低了82 85% 和64 05% , 說明蔗糖和檸檬酸對表 4 食品添加劑對花色苷穩(wěn)定性的影響該花色苷有明顯的褪色作用, 且褪色作用隨濃度增大而加強;當苯甲酸鈉質量濃度低于 0 1 mg/mL 時,花色苷溶液吸光度基本無變化, 高于 0 2 mg/mL 時,吸光度降低了 6 42%, 但隨著加入濃度的增大基本保
19、持不變, 說明苯甲酸鈉質量濃度在高于0 2 mg/mL時對該花色苷有一定的褪色作用。共三十三頁3 結論(jiln) 黑粒小麥(xiomi)麩皮中花色苷提取的最佳工藝為:pH 1 0、 40% 的乙醇作提取劑, 在料液比為 1 20(g/mL)、 70 條件下恒溫浸提 80 min, 提取效果較好, 得率可達 14 50%。黑粒小麥麩皮中花色苷可見光范圍內的最大吸收波長為 525 nm, pH 對其影響明顯, 在酸性溶液中穩(wěn)定, 而在堿性溶液中不穩(wěn)定;該花色苷耐氧化性、耐還原性差, 而耐光性好, 對熱有一定的耐受性;Mg 2 + 、 K+、 Al 3 + 對其有很好的增色穩(wěn)定作用, Ca 2 +
20、 和Fe 2 + 對其影響不大, Cu 2 + 、 Zn 2 + 、 Fe 3 + 對其有明顯的褪色作用。NaCl 對該花色苷有一定的增色、 穩(wěn)定作用, 蔗糖、 檸檬酸對其有明顯的褪色作用, 苯甲酸鈉在低質量濃度(0 1 mg/mL)時對其基本無影響, 在高質量濃度(02 mg/mL)時對其有一定的褪色作用。共三十三頁藍、紫粒小麥籽粒(z l)花色苷組成分1.1 試驗材料 黑小麥 76、藍粒小麥、紫繁 3、遠 5987-88 共 4個小麥品種(系)均由山西省農業(yè)科學院作物遺傳研究所孫善澄先生提供.1.2 小麥花色苷樣品提取與凈化 花色苷從全麥粉中超聲波提取 24,28 ,稱取全麥粉2.00 g
21、,加入 10 mL 90%甲醇水溶液(含 0.5%甲酸),超聲提取 10 min,2 000 r/min 離心 5 min,重復提取 3次,合并上清液。40條件下減壓濃縮去除甲醇,然后在 40水浴條件下氮吹,盡量除盡甲醇,再加入含5 mL 0.1%甲酸的酸化水, 旋渦震蕩, 使色素完全溶于水中,待凈化處理。SPE C 18 柱依次用 0.1%甲酸酸化甲醇 5 mL、 0.1%甲酸酸化水 5 mL 活化(huhu),上樣,C 18 吸附花色苷,然后用 0.1%甲酸的酸化水 10 mL 清洗柱,最后用含 0.1%甲酸的酸化甲醇 5 mL 洗脫花色苷,在 40水浴的氮吹儀上氮氣吹干。用 2 mL 含
22、 0.1%甲酸的酸化水溶解沉淀,經 0.22 m 濾膜過濾后上樣。共三十三頁1.3 花色苷分離(fnl)與鑒定梯度洗脫,流動相 A:6%甲酸水溶液, 流動相 B: 乙腈, 06.0 min 由 100%的A變?yōu)?%的B, 6.010.0 min由96%的A變?yōu)?2%的 B,10.030.0 min 由 88%的 A 變?yōu)?25%的 B,30.035.0 min 由 75%的 A 變?yōu)?90%的 B, 35.038.0min 由 10%的 A 變?yōu)?4%的 B, 38.040.0 min 由 96%的 A 變?yōu)?100%的 A。 流速(li s) 0.3 mLmin -1 , 進樣體積 10.0
23、L。 光電二極管陣列檢測器掃描范圍為 200800 nm藍、紫粒小麥中的花色苷種類 分別對黑小麥 76、藍粒小麥、紫繁 3、遠 5987-88小麥籽粒的花色苷提取物進行全掃描、母離子掃描和子離子掃描(表),在藍、紫粒小麥中鑒定出 14 種不同的花色苷,其中 6#和 14#、7#和 12#、8#和 15#具有相似的質譜特性,但在色譜保留時間和光譜學特性上不同的花色苷單體。其中 6#和 14#為芍藥素己糖苷,7#和 12#為芍藥素蘆丁苷,8#和 13#為錦葵色素蘆丁苷。共三十三頁3 討論(toln)花色苷的一般質譜特性 本研究應用液相色譜串聯質譜法,通過液相色譜分離,質譜全掃描、母離子掃描,子離子
24、掃描,對藍、紫粒小麥籽粒中的花色苷進行了分離與鑒定。子離子掃描具有選擇性,質譜中的子離子只來自特定的母離子,通過分析母離子的特征(tzhng)碎片以獲得化合物的結構信息。子離子掃描技術已被廣泛應用于花色苷的鑒定及表征。在藍、紫粒小麥籽粒中花色苷的子離子質譜碎片與花色苷標準品生成的子離子質譜碎片相同,進一步印證所分離鑒定的藍、紫粒小麥籽粒中花色苷的組成。母離子掃描,質譜中所有的母離子只能來自于產生相同子離子特定的母離子,母離子掃描技術用以確證子離子掃描所獲得的結構信息。 全掃描 (full scan)用來尋找花色苷的特征母離子。這些技術的應用對復雜基質中不同的花色苷化合物鑒定及表征提供有力的技術
25、手段。共三十三頁4 結論(jiln) 藍、紫粒小麥籽?;ㄉ战M成成分的研究對于揭示藍、紫粒小麥保健功能的物質基礎和作用機制具有重要意義,同時對于充分發(fā)掘花色苷含量豐富的小麥品種,提高小麥的營養(yǎng)品質和保健功能,為小麥育種和相關基因克隆提供理論依據也具有重要的現實意義。 應用超高效液相色譜配以串聯質譜和二極管陣列檢測技術, 在藍、 紫粒小麥籽粒中共(zhn n)鑒定出 14 種花色苷類化合物,分別為飛燕草色素-己糖苷、飛燕草色素蘆丁苷、矢車菊-己糖苷、矢車菊素-蘆丁苷、牽?;ㄉ?蘆丁苷、芍藥素-己糖苷、芍藥素-蘆丁苷、錦葵色素-蘆丁苷、矢車菊素-丙二酰葡萄糖苷、芍藥素-丙二酰-葡萄糖苷、矢車菊-
26、(未鑒定出)、芍藥素-蘆丁苷、錦葵色素-蘆丁苷、芍藥素-己糖苷。4 個不同品系的小麥花色苷含量相比:藍粒小麥紫繁 3遠 5987-88黑小麥 76。矢車菊-己糖苷、矢車菊素-蘆丁苷為 4 個小麥品系中共同含有的單體花色苷。藍粒小麥、遠 5987-88 與紫繁 3 中均含有錦葵色素-蘆丁苷,遠 5987-88 中含量最高,藍粒小麥次之,紫繁 3 中最少。小麥黑 76 和遠 5987-88 中芍藥素趙善倉等:藍、紫粒小麥籽?;ㄉ战M成分析 4079-丙二酰-葡萄糖苷第 1 主要單體花色苷,而紫繁 3 的第 1 主要單體花色苷則為矢車菊素-丙二酰葡萄糖苷,藍粒小麥的第 1 主要單體花色苷為飛燕草色素
27、-己糖苷。共三十三頁天 然 黑 小 麥 色 素 研 究 進 展1 黑小麥色素結構與性質1.1 化學結構 經紫外光譜、 紅外光譜、 質譜、 核磁共振等分析儀器鑒定, BKWP 屬花色苷類色素。藍粒小麥中飛燕草色素 3 葡萄糖苷 (delphinidin 3 glucoside)是主要花色苷; 紫粒小麥中矢車菊 3 葡萄糖苷 (cyanidin glucoside) 是主要花色苷, 黑粒小麥中芍藥素丙二酰葡萄糖苷是主要花色苷。不同粒色、 不同品種黑小麥, 其 BKWP 花色苷單體種類也有所不同1.2 理化(lhu)性質1.2.1 物理性質溶解性: 該色素易溶于水、 甲醇、 乙醇、 乙酸、 甲醛等極
28、性溶劑, 并呈現不同程度紅色; 不溶于乙醚、 石油醚、 氯仿、 CCl 4 、 丙酮、 正丁醇、 異戊醇、 異丙醇、 吡啶等非極性、 弱極性溶劑。光譜特性: 藍、 紫、 黑粒小麥色素溶液在可見光區(qū)最大峰值都在 530 nm 左右, 在紫外區(qū)域有兩個強烈吸收峰, 分別在 320 nm 和 270 nm 附近。實驗條件或黑麥品種不同, 最大吸收波長有所變化。對烏麥 526、漯珍 1 號、 黑麥 76 品種研究表明, 在 pH3 時, 以乙醇為提取劑, 往往紅移 10 nm, max 較高; 以水為溶劑, 往往藍移 15 nm, max 較低。共三十三頁 1.2.2 pH 值對色素影響 BKWP對酸
29、堿性變化較敏感, 符合花色苷類色素通性。在 pH3 時性能穩(wěn)定, BKWP 保持鮮亮紅色; pH4時色素不穩(wěn)定, 色素溶液逐漸有絮狀物出現并沉積,而后逐漸整體混濁; pH7時, 吸收峰消失, 顏色變暗。色素在酸性條件下呈紅色; 堿性條件下為綠色。隨 pH增大, 顏色依次為紅色淺紅色綠色.2.3 耐熱性和耐光性 該色素在 80 以下保持穩(wěn)定, 耐低溫、 不耐高溫。pH=2、 75 處理 1 h, 色素保存率 96.33%; 85 處理1 h, 色素保存率 93.35% 。pH=3 時, 20 80 處理 3 h, 色素吸光值和顏色變化不明顯, 溫度升至 100 時, 色素吸光值和顏色發(fā)生明顯變化
30、。在 pH=1 時熱穩(wěn)定性強, 在 pH=35 時稍有降解, 在 65 95 范圍內降解逐漸加強。加入 SO 2 對色素有穩(wěn)定效果,SO 2 最佳濃度為 13 mg/g 。 對光照較敏感, 隨光照時間和光照方式不同, 會發(fā)生不同程度降解。在 pH=1 時, 色素乙醇溶液在陽光直射、 日光燈下和暗處, 5.5d 色素保存率分別為84.0%、 94.1% 和 95.7% 11 。pH=3 色素乙醇溶液, 處室溫、 自然光下放置 45 d, 吸光度下降不超過(chogu) 5% 21 。但也有研究表明, 在pH3時, BKWP水溶液對光較敏感,在光照條件下易分解, 會產生褪色現象, 5 d 后色素保
31、存率約 20% 左右。在避光條件下其穩(wěn)定性較好。共三十三頁 1.2.4 氧化劑與還原劑影響 氧化劑、 還原劑對 BKWP 具有一定降解作用。在pH=3 時, 加入 1040 mg/mL H 2 O 2 后, 色素吸光值下降, 且濃度越大, 色素吸光值越低, 色素色澤越淺。這是因 H 2 O 2 進攻花色苷 C 2 位, 使花色苷開環(huán), 生成查爾酮, 從而進一步降解為無色酯和香豆酸衍生物。加入 1040 mg/mL NaHSO 3 后, 色素吸光值明顯下降,并使該色素迅速變淡, 且隨濃度增加, 色素保留率越低; 可能是亞硫酸氫根作用于花色苷 C 4 位生成無色復合物緣之故。因此, 使用 BKWP
32、 時應避免與強氧化劑、 還原劑接觸。1.2.5 金屬離子影響 K + 、 Na + 、 Ca 2+ 、 Mg 2+ 、 Zn 2+ 、 Fe 2+ 對色素無不良影響, 能穩(wěn)定保持色素鮮艷色澤, 主要是花色苷與金屬元素發(fā)生絡合, 形成絡合物緣故。Cu 2+ 對色素有一定影響, 可使溶液變綠色; Ba 2+ 、 Al 3+ 、 Fe3+影響較大,加入20 g/mL放置24 h后, 色素溶液出現渾濁。因此, 在 BKWP 加工、 使用及儲藏過程中應避免與鐵、銅等容器接觸。1.2.6 食品添加劑影響1040 mg/mL 食鹽、 蔗糖、 檸檬酸對 BKWP 有一定增色、 穩(wěn)定作用, 增色作用隨濃度增大而
33、增強。色素對 Vc 較敏感(mngn), 在 Vc 含量小于 1% 低濃度下影響較小, 加入 Vc(1040 mg/mL) 1 h 后, 色素溶液吸光度下降、 顏色變淡; 濃度越大、 褪色越明顯, 這可能是高濃度 Vc 被氧化后, 生成 H 2 O 2 , H 2 O 2 進攻花色苷 C 2 位, 引起花色苷降解.共三十三頁黑小麥(xiomi)色素抗氧化活性 黑粒小麥提取物具有很強清除 DPPH自由基活性, 抗氧化能力麥麩皮比全麥高 2 倍。黑小麥籽粒色素、 總黃酮、 氨基酸、 SOD 活性與抗活性氧、 抗超氧陰離子自由基和總抗氧活化能力存在量效關系, 且呈顯著正相關。細胞內抗氧化實驗表明:
34、黑小麥提取物顯著抑制 H 2 O 2 誘導(yudo)細胞內氧化 ( 0.01)和細菌脂多糖誘導 NO 產生 ( 0.05) ; 其中 69% 抗氧化糧食與油脂12ls1303-0948 2013 年第 26 卷第 3 期能力來自以矢車菊素 3 葡萄糖苷為主花色苷。從藍粒小麥中分離出四種花色苷, 具有很強清除DPPH、 ABTS 自由基活性和抑制人體血清低密度脂蛋白膽固醇氧化能力。BKWP 具有良好清除 OH自由基和抑制 NH 4 NO 2 合成、 清除 NaNO 2 能力, BKWP 含量為 35 g/mL 時對DPPH清除率為 85.47%, 在 0.32 g/mL 時對 OH清除率分別為
35、 33.60%, 實驗體系中含 BKWP 含量為 4.78g/mL 時, 對 NH 4 NO 2 合 成 阻 斷 率 最 高 達77.99%, 對 NaNO 2 清除率達 85.09% 。共三十三頁微波(wib)輔助提取藍、 紫粒小麥麩皮中色素的研究材料及預處理 藍粒小麥品種為珍珠綠和法國藍; 紫粒小麥品種為初 91 和初 97, 均由西北農林科技大學小麥所生物技術研究室提供。微波輻射提取藍、 紫粒小麥麩皮色素的方法 乙醇作為提取劑,并借鑒前人 11, 13, 14 的經驗, 用 1 mol/ L 的鹽酸將乙醇調至 pH = 2. 0 備用。按試驗設計, 稱取一定量的麩皮, 置于具塞三角瓶中,
36、 加入相應量的酸性乙醇溶液, 選用(xunyng)強度較好的塑料薄膜密封瓶口。采取間斷輻射加熱( 即: 加熱 冷卻 加熱) , 加熱最高溫度控制在? 75 ( 78 酒精沸騰) 。最后水冷至室溫。微波輔助提取藍、 紫粒小麥麩皮色素的單因素試驗和正交試驗 選擇與浸提效果直接相關的微波功率、 輻射時間、 提取劑濃度以及原料與提取劑配比( 料液比) 等因素做單因素對提取率的影響實驗。用 UT?750 型紫外可見分光光度計對酸性乙醇水溶液浸提的藍、 紫粒小麥色素溶液進行掃描, 得出藍粒色素溶液 ? max =530 nm, 紫粒色素溶液 ? max = 520nm。因此, 采用530 nm 和 520
37、 nm 波長單色光測定浸提液的吸光值。共三十三頁 色素提取率的計算在最佳提取條件下做浸提實驗, 測定各次實驗的提取率。具體操作方法是: 在最優(yōu)提取條件下, 分別多次提取一定量的藍、 紫粒小麥麩皮, 直至提取液為無色, 分別收集(shuj)各提取溶液并測定其體積 V i 和吸光度A i , 然后合并各次提取液, 測出總體積 V 總 和總吸光度 A 總 。提取率的計算公式為: 提取率= A i *V i / (A 總*V 總 ) 100%。微波輻射功率對色素提取效果的影響 稱取 2. 00 g 麩皮, 加入 20 mL( 紫粒麩皮用24 mL) 體積分數為 70% 的酸性乙醇溶液, 藍粒按1!10、 紫粒按 1 !12( 料液比) 作為浸取體系, 在消耗能量相同的前提下, 分別在 90 W、 270 W、450 W、 720 W 和 900 W 的微波功率下間斷輻射120 s、 40 s、 24 s、 15 s、 12 s, 將最高溫度控制在 ?75 ( 因為乙醇的沸點是 78 , 沸騰時會造成儀器爆裂, 同時也會使色素降解) 。測定結果表明, 用 90 W 和 900 W 的微波功率加熱時吸光值較小, 用270 W、 720 W 的微波功率加熱時吸光度值比較接近, 450 W 微波功率下吸光值相對較高。這可能是因為小功率輻射時, 溫度提升較慢,不利于色素溶解; 大功率輻射
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