肝衰竭機(jī)制和治療研究進(jìn)展課件

1、肝衰竭機(jī)制和治療研究進(jìn)展內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 肝衰竭患者病情危重極度乏力，消化道癥狀，腹脹或腹水；黃疸進(jìn)行性加深（TB171umol/L或每天上升17umol/L）；明顯出血傾向，PTa40%；肝性腦病和/或肝臟進(jìn)行性縮小。 肝細(xì)胞大片壞死 各種類型肝衰竭發(fā)病機(jī)制、關(guān)鍵物質(zhì)尚未明確內(nèi)科綜合治療：病死率達(dá)80 如何提高療效是國際性難題內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室肝衰竭的定義肝衰竭是由多種因素引起肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p害，導(dǎo)致其合成、解毒和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴(yán)重障礙，出現(xiàn)以黃疸、凝血功能障礙、肝性腦病和腹水等為主要表現(xiàn)的一種臨床綜合征 中華醫(yī)學(xué)會(huì)感

2、染病分會(huì)、肝病分會(huì)肝功能衰竭與人工肝學(xué)組. 肝功能衰竭診療指南. 中華傳染病雜志.2006，24：422我國肝衰竭診療指南已頒布內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室肝衰竭的分類急性肝衰竭急性起病，2周以內(nèi)出現(xiàn)肝衰竭的臨床表現(xiàn)亞急性肝衰竭起病較急，15日24周出現(xiàn)肝衰竭的臨床表現(xiàn)慢加急性肝衰竭在慢性肝病基礎(chǔ)上出現(xiàn)急性、亞急性肝衰竭臨床表現(xiàn)慢性肝衰竭在慢性肝病基礎(chǔ)上,出現(xiàn)肝功能進(jìn)行性減退或失代償中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病分會(huì)、肝病分會(huì)肝功能衰竭與人工肝學(xué)組. 肝功能衰竭診療指南. 中華傳染病雜志.2006，24：422內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室常 見少見或罕見肝

3、炎病毒代謝異常 - 甲, 乙, 丙, 丁, 戊 - 肝豆?fàn)詈俗冃? 糖代謝缺陷非肝炎病毒缺血, 缺氧 - CMV, EB, 腸道病毒 - 休克, 充血性心衰藥物及毒物自身免疫性肝損害 - 異煙肼, 利福平, 醋氨酚等 - 酒精, 四氯化碳, 毒蕈等肝移植, 部分肝切除, 肝臟腫瘤先天性膽道閉鎖細(xì)菌及寄生蟲其他 - 嚴(yán)重細(xì)菌感染, 血吸蟲等創(chuàng)傷, 熱射病, 妊娠急性脂肪肝肝衰竭的病因中國病毒性肝炎為主歐美藥物 、酒精性為主內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室肝衰竭的病理生理肝細(xì)胞大量壞死肝功能衰竭代謝紊亂毒物積聚影響肝細(xì)胞再生惡性循環(huán)免疫紊亂腦水腫腎功能不全血流動(dòng)力學(xué)紊亂凝血系

4、統(tǒng)障礙等病毒或毒物發(fā)病機(jī)制、關(guān)鍵物質(zhì)未明阻斷惡性循環(huán)的治療措施有待改善內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室肝 衰 竭 發(fā) 病 機(jī) 制 目前認(rèn)為肝損傷導(dǎo)致肝衰竭發(fā)生的原因大致可以分為化學(xué)性損傷和免疫損傷兩大類化學(xué)性損傷與在肝臟解毒的物質(zhì)有毒性代謝產(chǎn)物相關(guān)，通過影響細(xì)胞膜、線粒體、胞內(nèi)離子的穩(wěn)定和各種降解酶類起作用。免疫性損傷和宿主自身免疫狀態(tài)及其易感性、細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)、巨噬細(xì)胞的激活、細(xì)胞因子、一氧化氮、補(bǔ)體等相關(guān)。近年在應(yīng)用代謝組學(xué)方法研究肝衰竭發(fā)病過程中未知關(guān)鍵物質(zhì)及以內(nèi)毒素為軸線的腸道微生態(tài)失衡和肝衰竭相關(guān)性等方面取得了諸多進(jìn)展內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治

5、國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室腸道微生態(tài)在肝衰竭 發(fā)生發(fā)展中的作用肝衰竭發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室微生態(tài)是人體的有機(jī)組成部分 人體正常菌群種類500余種 數(shù)量100萬億個(gè)（人體體細(xì)胞僅10萬億個(gè)） 平均重約1.5kg，相當(dāng)于肝臟的重量 99.9%是以雙歧桿菌和類桿菌為主的專性厭氧菌 0.1%是以腸桿菌科細(xì)菌為主的兼性厭氧菌1g1000g(80%)20g200g20g10g20g內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室森林砍伐等 宏觀生態(tài)破壞 洪水、沙漠化、沙塵暴等宏觀生態(tài)破壞政府已高度重視微觀生態(tài)破壞21世紀(jì)全球面臨的新問題 亟需新理論、新方法抗生素免

6、疫抑制劑肝病等疾病微生態(tài)失衡嚴(yán)重危害人體健康Steven R. Gill et al. Science, 2006 312破壞微生態(tài)就是損害人類健康Gordon, Washington University微生態(tài)失衡細(xì)菌耐藥難治性感染肝衰竭等多器官功能不全內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室Science, June 2005,308: 1635-1638國際學(xué)界對腸道微生態(tài)的再認(rèn)識腸道微生物是人體提供營養(yǎng)，調(diào)控上皮發(fā)育和指導(dǎo)先天性免疫的不可缺少的“器官”Paul Eckburg, Stanford UniversitySteven Gill, Karen Nelson, T

7、IGR/VI內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室微生態(tài)學(xué)研究技術(shù)平臺的發(fā)展Yu y, Sheng GP,et al J Proteom Res, 2007;6:2413-19類桿菌雙歧桿菌Real Time PCRPCR DGGE細(xì)胞水平：建立并優(yōu)化腸道厭氧菌培養(yǎng)與菌種保存體系分子水平：應(yīng)用PCRDGGE， Real-Time PCR 技術(shù)研究腸道微生態(tài)細(xì)菌個(gè)體及群體的變化代謝組學(xué)：分析腸道菌群多樣性與人體代謝的相關(guān)性內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室感染微生態(tài)與肝病相關(guān)系列研究動(dòng)物模型研究（大鼠）急性肝衰竭模型（30只）肝臟缺血再灌注模型（36只）肝移植

8、模型（80只） 臨床研究慢性肝炎（30例）慢性重型肝炎患者（31例）肝硬化患者（51例）肝移植患者（113例）大鼠肝移植慢重肝肝硬化肝移植大鼠肝缺血再灌注采 樣 ： 血、糞便、肝組織、腸道組織、腸系膜淋巴結(jié)等檢測內(nèi)容： 生化、內(nèi)毒素、細(xì)胞因子、細(xì)菌培養(yǎng)、分子生態(tài)、組織病理及代謝組學(xué)內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)慢性肝衰竭患者腸道菌群嚴(yán)重失衡P0.001P0.05雙歧桿菌類桿菌P0.001P0.01P0.01P0.05酵母菌P0.05腸球菌P0.001P0.05腸桿菌科細(xì)菌 雙歧桿菌 類桿菌 腸桿菌科細(xì)菌 腸球菌 酵母菌Li Lj，et al, Chin Med

9、J . 2001:114(12):869-872 內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)肝病腸道微生態(tài)失衡與內(nèi)毒素血癥 密切有關(guān)腸粘膜屏障損傷微生態(tài)失衡腸道定植抗力肝I/R大鼠血內(nèi)毒素水平重肝及慢肝病人血內(nèi)毒素肝衰竭大鼠血內(nèi)毒素內(nèi)毒素血癥Li Lj，et al, Chin Med J . 2001:114(12):869-872；Li LJ et al, WJG 2004; 10(14) :2087-2090 肝細(xì)胞壞死內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室BIF/Lact組I/R 組重肝病人內(nèi)毒素下降比較微生態(tài)調(diào)節(jié)改善肝功能六組肝功能指標(biāo)比較ALTI/

10、R 組BIF/Lact組肝組織損傷腸粘膜損傷內(nèi)毒素肝功能Chen CL,et al. J Infect 2007;54:98-102 Li Lj，et al, Chin Med J . 2001:114(12):869-872 Li Lj et al.World J Gastroenterol. 2004,15:2087-90. 應(yīng)用微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，可通過有效調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)，降低肝病內(nèi)毒素血癥，有效改善肝臟功能內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室腸道微生態(tài)變化與肝衰竭模式圖低蛋白血癥腸壁淤血水腫腸蠕動(dòng)膽汁分泌雙歧桿菌等、腸桿菌科細(xì)菌等腸道定植抗力腫瘤壞死因子白介素1等肝細(xì)胞壞死

11、微生態(tài)療法內(nèi)毒素血癥腸道細(xì)菌移位內(nèi)毒素 、移位微生態(tài)失衡肝衰竭自發(fā)性腹膜炎菌（?。┭Y內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室肝衰竭代謝組學(xué)研究以尋找 肝衰竭發(fā)生發(fā)展關(guān)鍵物質(zhì)肝衰竭發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)后，近年興起的生命學(xué)科主要研究由機(jī)體病理生理刺激或遺傳變異引起的多參數(shù)代謝應(yīng)答，以及代謝物變化規(guī)律代謝組學(xué)代謝組學(xué)、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組與環(huán)境之間存在相互作用、相互依存的關(guān)系內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室闡明肝衰竭發(fā)生發(fā)展關(guān)鍵物質(zhì)meanvar. 1var. 2var. 3主成分分析（PCA

12、）降維處理代謝譜分析對分組準(zhǔn)確性樣品采集、前處理質(zhì)譜檢測代謝物獲得大量代謝物數(shù)據(jù)起關(guān)鍵作用的代謝標(biāo)志物分析肝衰竭代謝組學(xué)研究方法內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建立了GC-MS研究代謝組學(xué)的方法 J proteome res. 2007, In press重型肝炎（肝衰竭）代謝組學(xué)研究 對血清樣品應(yīng)用新的衍生化方案進(jìn)行代謝組學(xué)研究，氣相色譜質(zhì)譜（GC-MS）總離子流譜圖具有良好的重復(fù)性內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室代謝譜主成分分析判斷肝衰竭患者病情健康對照組肝衰竭組健康對照組 肝衰竭組 病例選擇：肝衰竭24例健康對照23例健康對照組和肝衰竭組經(jīng)主成

13、分分析，可完全區(qū)分開內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室代謝譜與MELD分級進(jìn)行判別分析，發(fā)現(xiàn)代謝譜可判斷肝衰竭嚴(yán)重程度，其預(yù)測正確率達(dá)91.7%* MELD 30 20 MELD 30 MELD 20疾病嚴(yán)重程度代謝譜與MELD分級比較重型肝炎肝衰竭血清代謝組學(xué)研究為病毒性肝炎嚴(yán)重程度判斷標(biāo)準(zhǔn)的完善提供了新的思路內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室慢加急肝衰竭代謝組學(xué)研究研究對象：慢加急肝衰竭37例健康對照50例實(shí)驗(yàn)方法：LC-MS研究目的：檢測新的判斷疾病的標(biāo)志物，為臨床診斷和治療提供依據(jù)差異代謝物UPLC-Q-TOF檢測兩組不同來源分組代謝譜的差異內(nèi)科

14、學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（）健康人（）肝衰竭患者各項(xiàng)GC-MS檢測代謝物譜圖：谷胺酰胺、苯丙氨酸等顯著升高，乳糖、葡萄糖及三羧酸循環(huán)相關(guān)代謝物濃度下降，核苷血清水平升高，這些與肝臟損傷直接相關(guān)健康組肝衰竭組苯丙氨酸 谷胺酰胺 乙二酸纈氨酸 甘氨酸 葡萄糖 3-羥基-1,2,3-丙烷三羧酸 1-丙烯-1,2,3-三羧酸 尿素 乳酸 蘇氨酸 甘氨酸 L-脯氨酸 L-蘇氨酸 半乳糖絲氨酸甘油酸脯氨酸 L-絲氨酸 脯氨酸 核糖 核糖醇 2-脫氧-吡喃型半乳糖 果糖 葡萄糖 松二糖 半乳糖 軟脂酸 肌醇 * p0.05, * p200萬道爾頓的形式存在，利用小孔徑血漿分離器的應(yīng)

15、用減少了肝細(xì)胞生長因子的減少小孔徑血漿分離器在應(yīng)用中的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是：跨膜壓非常平穩(wěn)*Li LJ, et al. Ther Apher 2005, 9(5):424-429內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展血漿透析濾過Plasma Dia-filtration (PDF)將血漿置換與血液透析、血液濾過等結(jié)合起來聯(lián)合應(yīng)用 清除向血管內(nèi)移動(dòng)較慢的物質(zhì)可設(shè)定脫水量，控制體內(nèi)水分量血漿使用量減少，僅為PE使用量的一半（1600ml）透析液血漿白蛋白補(bǔ)充液內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室非生物型ALSS方案組合血漿膽紅素吸附血漿置換高膽紅素血癥血漿灌流血漿置換

16、緩慢持續(xù)血液透析濾過肝昏迷緩慢持續(xù)血液透析濾過血漿置換肝腎綜合征電解質(zhì)紊亂血漿置換+血液濾過內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室ALSS治療取得顯著療效*Li Lanjuan,et al. Chinese Medical Journal, 2001, 114(9):941-945肝功能明顯改善 P0.001內(nèi)毒素顯著下降 P0.005蛋氨酸顯著下降 P0.001 BCAA/AAA比值上升P1個(gè)月 )和死亡組172 例患者 (存活時(shí)間1個(gè)月 )方法: 比較兩組患者人工肝治療后72120 h和24 h實(shí)驗(yàn)室資料和臨床并發(fā)癥改善程度：結(jié)果:實(shí)驗(yàn)室資料和臨床并發(fā)癥：24 h : 兩組

17、均明顯改善(p0.05) 改善程度：無論24h還是72120h, 兩組均改善，但死亡組均明顯小于存活組 (p0.05), 特別是72120 h. 根據(jù)24h、72120h改善程度構(gòu)建兩個(gè)logistic 回歸模型預(yù)測1個(gè)月存活率: 72120 h明顯優(yōu)于 24 h (92.4% vs 66.4%).結(jié)論:The curative effect of ALSS on 1-month mortality in AoCLF patients after 72 to 120 hours Int J Artif Organs 2007; 30: 10人工肝療效早期評估Biochemical parame

18、ters Improvement post-ALSS at 24 h post-ALSS at 72120 h Survival group Control group Survival group Control groupINR -0.85 4.36 -1.47 2.82 -0.68 1.78 * 0.03 2.67Albumin (g/L) 1.24 6.11 1.34 21.99 2.28 3.28 0.86 15.92Globulin (g/L) -5.11 9.71 -4.35 16.00 -3.86 16.70 -2.04 16.41ALT(U/L) -218.07 803.01

19、 -126.9 334.88 -194.14 802.66 -70.57 365.34AST(U/L) -113.90 188.68 -80.82 434.31 -71.99 375.67 -30.61 169.80CHE (U/L) 2290.26 3227.12 2556.35 3120.39 1996.97 2991.36 1048.98 4699.76Tbil (mol/L) -95.65 117.68 -84.32 133.84 -81.78 233.33 -38.48 140.89TB (mol/L) -331.04 208.93* -252.86 222.30 -277.34 2

20、34.17* 23.39 264.56Cre (mol/L) -40.57 7.33* -23.99 13.89 -31.86 46.89* -6.99 13.96Urea (mmol/L) -1.28 1.82 -1.90 9.23 -1.18 4.85 -0.64 1.79(MELD) score -2.32 3.60 -2.27 4.08 -2.21 1.20* 1.02 1.67AoCLF 患者預(yù)后取決于人工肝后72120 h肝性腦病、TB、INR、CRE 改善程度內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室人工肝治療后獲得新生的病人內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國

21、家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 2000年以來 2002年，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病分會(huì)肝衰竭與人工肝學(xué)組成立 推出人工肝治療指南，進(jìn)一步規(guī)范了我國非生物型人工肝的臨床治療2002年人工肝學(xué)組第一次會(huì)議2006年，感染病分會(huì)與肝臟病分會(huì)聯(lián)合推出肝衰竭診療指南，對肝衰竭的臨床診療具有重大指導(dǎo)意義人工肝治療的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室全國非生物型人工肝開展情況（1）截至2005年，我國大陸所有省市均已開展非生物型人工肝治療治療例數(shù)：從2000年起至今共治療例數(shù)20662例 治療效果：重肝治愈好轉(zhuǎn)率高至60%以上 全國人工肝開展單位數(shù)情況內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重

22、點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室全國非生物型人工肝開展情況（2）治療方法ALSS：14932例 血漿置換：4373例血液濾過：290例活性炭/樹脂吸附：71例膽紅素吸附：426例MARS ：450例混合人工肝：120例 我國人工肝治療重型肝炎例數(shù)構(gòu)成內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生物型人工肝研究進(jìn)展內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室解毒合成代謝分泌生物型人工肝優(yōu)點(diǎn)清除有毒物質(zhì)補(bǔ)充活性物質(zhì)存在問題缺乏代謝功能血漿來源緊張限制應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)具有合成、代謝和轉(zhuǎn)化功能關(guān)鍵技術(shù)與難點(diǎn)*缺乏理想肝細(xì)胞源缺乏高效生物反應(yīng)器非生物型人工肝*Strain AJ,et al.Science,2002

23、,295：1005-9生物型/混合型人工肝是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)混合型人工肝優(yōu)點(diǎn)：整合兩者優(yōu)勢關(guān)鍵技術(shù)與難點(diǎn)：二者有機(jī)結(jié)合的裝置及參數(shù)等問題內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生物型/混合型人工肝國外研究現(xiàn)狀 國外 生物型/混合型人工肝起步于20世紀(jì)80年代后期 迄今有5種生物型/混合型人工肝進(jìn)入IIII期臨床研究 國內(nèi) 20世紀(jì)90年代后期，浙江、重慶、廣東、江蘇、北京等地相繼開展BAL、HAL研究研究熱點(diǎn)：安全、有效的人工肝用肝細(xì)胞源高效的生物反應(yīng)器BAL、HAL系統(tǒng)優(yōu)化及裝置研制內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)二步灌流法對大規(guī)模分離肝細(xì)胞的質(zhì)量不理

24、想添加Hepes和Dispase等灌流液，進(jìn)行四步灌流分離肝細(xì)胞獲滿意結(jié)果原代肝細(xì)胞分離方法的研究 四步灌流法的建立Dispase液灌流含Hepes的平衡鹽緩沖液預(yù)灌流EDTA液灌流膠原酶液灌流DNase洗滌液洗滌，收集肝細(xì)胞懸液四步灌流法和二步灌流法的流程圖灌流操作圖內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室四步灌流法提高了肝細(xì)胞活率（96%）、得率（5.3X107/g）和貼壁率（90%）申請發(fā)明專利：生物人工肝用豬和人肝細(xì)胞的制備方法(200410084625.7)、用于生產(chǎn)人工肝細(xì)胞的試劑(200410084626.1)、 一種肝細(xì)胞凍存液（200410089587.4） 新

25、方法為人工肝及細(xì)胞生物學(xué)研究提供高質(zhì)量的肝細(xì)胞四步灌流法 二步灌流法新鮮分離的肝細(xì)胞培養(yǎng)24h后的肝細(xì)胞內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 轉(zhuǎn)染篩選正常人肝細(xì)胞生物學(xué)功能鑒定永生化肝細(xì)胞克隆SV40LT-pcDNA3.1(-) 重組載體 建立人源性永生化肝細(xì)胞系HepLL 人源性永生化肝細(xì)胞系構(gòu)建研究傳代培養(yǎng)已穩(wěn)定傳 47 代HepLL具有原代肝細(xì)胞相似的生物學(xué)特征和功能呈肝板樣生長超微結(jié)構(gòu)糖原染色陽性 HepLL在裸鼠脾內(nèi)移植，表達(dá)肝細(xì)胞生物特性脾內(nèi)細(xì)胞移植細(xì)胞呈島樣生長表達(dá)肝細(xì)胞特異抗原 內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室在建成HepLL基礎(chǔ)上，又建

26、立人源性永生化肝細(xì)胞系2株（HepLi2、3）和豬永生化肝細(xì)胞系3株（HepLP1、2、3）HepLL系列肝細(xì)胞系已被多家研究機(jī)構(gòu)（上海交大、上海腫瘤研究所等）應(yīng)用于科學(xué)研究人源性永生化肝細(xì)胞系為人工肝研究提供了潛在肝細(xì)胞源，并為肝細(xì)胞移植和體外藥物篩選提供新的細(xì)胞模型內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室利用經(jīng)膠原改性的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)為構(gòu)建仿生支架進(jìn)行原代人肝細(xì)胞培養(yǎng)PLGA支架可明顯促進(jìn)肝細(xì)胞的貼壁和增殖提高肝細(xì)胞白蛋白的合成、氨的清除與尿素合成肝細(xì)胞體外組織樣培養(yǎng)研究Li J, Li L, et al.ASAIO J. 2006; 52 (3): 321-

27、7. 內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室肝細(xì)胞體外大規(guī)模培養(yǎng)、凍存研究 可逆性永生化肝細(xì)胞評價(jià)肝細(xì)胞活性和功能肝細(xì)胞形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)肝細(xì)胞數(shù)量肝細(xì)胞的活率、貼壁率白蛋白合成量細(xì)胞色素P450酶活力（安定轉(zhuǎn)化試驗(yàn)）等培養(yǎng)參數(shù)優(yōu)化血清用量 接種的液體量培養(yǎng)基pH 細(xì)胞接種的初始數(shù)目等新型轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng) 程序降溫、液氮儲存內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室微囊化肝細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)AC(海藻酸鈉殼聚糖)微囊包裹HepLL細(xì)胞置于轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)儀勻速旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)Hep LL細(xì)胞隨著時(shí)間延長，集聚成球，逐漸增多增大微囊化肝細(xì)胞制作微囊化肝細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)第6天第10天第15天微囊化H

28、epLL細(xì)胞核仁明顯，富含線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及糖原顆粒，可見緊密連接及毛細(xì)膽管樣結(jié)構(gòu)毛細(xì)膽管樣結(jié)構(gòu)細(xì)胞間緊密連接B富含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生物反應(yīng)器研究理想生物反應(yīng)器膜或支架材料等具有良好的生物相容性，便于肝細(xì)胞黏附、聚集良好的物質(zhì)交換效能易于“放大”，能夠容納至少1010個(gè)肝細(xì)胞肝細(xì)胞與患者血漿（血液）進(jìn)行物質(zhì)交換的場所生物復(fù)合材料已經(jīng)成為生物反應(yīng)器研究的熱點(diǎn)之一生物人工肝系統(tǒng)構(gòu)成示意圖內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室微囊化肝細(xì)胞懸浮培養(yǎng)反應(yīng)器體外評價(jià)微囊化肝細(xì)胞懸浮培養(yǎng)反應(yīng)器 微囊化肝細(xì)胞懸浮培養(yǎng)生物反應(yīng)器：（正在進(jìn)行體外評

29、價(jià)） 生物支架式生物反應(yīng)器PLGA支架、PLGA/CS支架正在研究中（浙大高分子材化系合作）生物支架式反應(yīng)器內(nèi)科學(xué)（傳染?。﹪抑攸c(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 生物型人工肝動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（編號：30270369）資助建立豬急性肝衰竭動(dòng)物模型進(jìn)行生物型人工肝療效和安全性評價(jià)研究豬肝組織呈現(xiàn)出血性壞死急性肝衰竭豬動(dòng)物模型肝，X3700肝，HE，X200兩只豬正在接受BAL治療內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 生物型人工肝能有效地改善肝衰竭豬肝功能 生物型人工肝延長肝衰竭豬存活時(shí)間急性肝衰竭模型組：487h裝置對照組：438h人工肝治療組：10623hLi LJ, et al. Journal of Hepatology, 2006,24:317-324Li LJ, et al. International Journal of Artificial Organs, 2003 ,26:507-513專利一種雜合型人工肝裝置（ZL03255510.5）受試動(dòng)物生存曲線 * 與AHF組、Sham BAL組比較，P 0.01 * 與AHF組、Sham BAL組比較，P 0.05 * 與AHF組、Sham BAL組比較，P 0.01* 與Sham BAL組比較，P 0.05 內(nèi)科學(xué)（傳染病）國家重點(diǎn)學(xué)科 傳染病診治國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)