土壤DNA大提試劑盒-柱式

1、 技術(shù)咨詢電話：400-607-9999注意：本制品僅供研究使用，請(qǐng)勿用于臨床治療等其他用途土壤DNA大提試劑盒-柱式Large-Scale Column Soil DNAout貨號(hào)：M090063產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是在本公司柱式土壤DNAOUT基礎(chǔ)上開發(fā)而得的大提升級(jí)產(chǎn)品，用于從各種土壤樣品和河海沉積物中大量提取高質(zhì)量的DNA 的試劑。跟柱式土壤DNAOUT 相比它具有下列特點(diǎn)：1. 處理量大，一次最多可以處理 20 克的土壤樣品。2. 去污染效果更好，得到的 DNA 可以直接作為PCR 模板或酶切，不需要再進(jìn)行去腐殖酸處理。3. 操作過程更加簡單快速，整個(gè)操作只需要 10 多分鐘，擴(kuò)容性好。

2、4. 產(chǎn)量高，每克土壤一般可以提取到5-50 ug DNA，片段長度在20-50 Kb，OD260/280 一般都在1.8 以上。5. 適合于各種土壤（包括河海沉積物）。規(guī)格及成分 成 份 4 次包裝溶液A 50 mL溶液B 50 mL溶液C 100 mL離心吸附柱 4 套通用洗柱液 100 mL通用洗脫液 10 mL使用手冊(cè) 1 份運(yùn)輸及保存常溫運(yùn)輸，4保存，保存期為一年。使用方法 1. 65預(yù)熱溶液A，待其沉淀溶化后充分混勻，取10 mL 加入到1.5 mL塑料離心管中并放置于65待用。2. 稱取 3-20 g 的土壤，加入到含預(yù)熱溶液A 的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩5-10 分鐘。3.

3、將離心管置于 65水浴中保溫至少5 分鐘。4. 5000-7000 rpm 室溫離心3-5 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一新離心管中(上清液一般呈淡黃色或深棕色，實(shí)際顏色取決于腐殖酸的含量，上清液的體積一般為6-8 mL)。5. 在上清液中加入等體積的溶液 B，上下顛倒30 秒充分混勻，溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。6. 將離心管冰浴至少 5 分鐘。7. 5000-7000 rpm 室溫離心3-5 分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的50 mL 離心管中，上清液顏色將比第4 步得到的上清的顏色稍淡，體積在14 mL 左右。注意：下面第8-第9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接進(jìn)入第10 步，但DNA的產(chǎn)量會(huì)低50%左右，O

4、D260/280 在1.7-1.8。8. 加入 4 mL 的氯仿(自備)，震蕩器上充分振蕩30 秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來。9. 5000-7000 rpm 室溫離心3-5 分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清到新離心管中，體積在11 mL 左右。說明：離心后兩相交界面將有白色膜狀物，其中有機(jī)相部分顏色較深，一般呈淡棕色。上清的顏色取決于土壤中腐殖酸的含量。10. 加入 1.5 倍體積的溶液C，上下顛倒30 秒混勻。11. 分兩次上柱（即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中，5000-7000 rpm室溫離心1 分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，5000-7000 rpm 室溫離心半

5、分鐘，棄穿透液）。12. 加 10 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，5000-7000 rpm 室溫離心1 分鐘，棄穿透液。13. 重復(fù)上個(gè)步驟一次。14. 5000-7000 rpm 室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)污染DNA。15. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的 50 mL 塑料離心管中，加入1 mL 通用洗脫液。16. 室溫放置離心吸附柱 1-2 分鐘。17. 5000-7000 rpm 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為DNA 樣品。疑難解答 Q: 如何判斷提取的沒有腐植酸污染？A：方法一是目測(cè)法，即看得到的溶液是否無色。如果呈淡棕黑色或淡黃色，說明可能是少量殘留的未除

6、盡的腐植酸。方法二是檢測(cè)最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA 不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR 擴(kuò)增。Q: 腐殖酸的最大吸收波長是多少？A：腐植酸（humic acid）是一大類呈棕黑色或黑色的物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)千差萬別，土壤中腐殖酸的組成和特點(diǎn)隨土壤不同而不同，所以其最大吸收波長也各不相同，有的土壤的腐殖酸在260 nm 有最大吸收（見Appl.Environ.Microbiol., 63：4993，1997），有的則在340 nm。所以用特定的波長測(cè)定OD 值時(shí)波長的選定要根據(jù)土壤而決定。Sigma, Fluke 等公司出售的腐植酸產(chǎn)品成分一般比較簡單，其最大吸收波長不能推廣到成分更為

7、復(fù)雜的土壤腐殖酸樣品。Q: 是否腐植酸都會(huì)抑制后續(xù)的DNA 反應(yīng)？A：否，因?yàn)楦菜崾且淮箢愇镔|(zhì)的統(tǒng)稱，他們的結(jié)構(gòu)和特性各不相同，所以是否對(duì)后續(xù)反應(yīng)有影響最好通過實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。如果用提取的DNA 溶液原液進(jìn)行反應(yīng)而反應(yīng)沒發(fā)生，而對(duì)照樣品（已知的不含污染的DNA）能夠發(fā)生，說明可能抑制作用。Q：如果得到的DNA 樣品還是含有抑制后續(xù)反應(yīng)的腐植酸，如何去除？A：如果提取的DNA 原液不能擴(kuò)增，可以將樣品稀釋10 倍和100 倍再進(jìn)行PCR，抑制作用一般可以解除。如果仍然抑制，可以使用本公司的PCRInhibitor Erasol。如果仍然不能解除，則可以通過柱式腐殖酸清除劑或先電泳，再用超大片段膠回收試劑Magic Gel DNABACK純化土壤DNA，去除殘留抑制劑。其中后兩方法最有效，得到的原液一般可以直接擴(kuò)增。Q：在用土壤DNA 進(jìn)行細(xì)菌專一性PCR 時(shí)，為何沒加DNA 模版的陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)？A：這是由于使用