淺析植物離體快繁中常見的問

1、個(gè)人收集整理 勿做商業(yè)用途 TOC o 1-5 h z 緒論。1 HYPERLINK l bookmark10 o Current Document 離體快繁過程中的問題、原因及防治措施 0-1 HYPERLINK l bookmark12 o Current Document 1。1 污染問題21。 1.1 污染的來源22 o 1.2 污染的防治措施：2 HYPERLINK l bookmark14 o Current Document 褐變問題 2-31。2o 1 褐變的原因.-.4克服外植體褐變的措施 ：4 HYPERLINK l bookmark16 o Current Documen

2、t 玻璃化問題：41。3。1 玻璃化發(fā)生的原因 41 o 3.2控制組培苗玻璃化的措施 o-51 o 4 遺傳穩(wěn)定性 .5-o 1影響遺傳穩(wěn)定性的因素 61 o 4.2 提高遺傳穩(wěn)定性，減少變異的措施5 TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark20 o Current Document 黃化問題21 o 5o 1 黃化原因6 HYPERLINK l bookmark22 o Current Document 離體快繁的前景與探討 o-6 HYPERLINK l bookmark24 o Current Document 適應(yīng)現(xiàn)狀的需求 6 HYPERLINK l b

3、ookmark26 o Current Document 2.3存在問題。:6 HYPERLINK l bookmark28 o Current Document 參考文獻(xiàn).6- HYPERLINK l bookmark30 o Current Document 致謝6淺析植物離體快繁中常見的問題摘要植物組織培養(yǎng)是 20 世紀(jì)初 發(fā)展 起來的一項(xiàng)新技術(shù) ,是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生物技術(shù)的一個(gè)重要組成部分， 已經(jīng)日益廣泛地應(yīng)用于園藝植物的脫毒和快繁等方面。本文針對(duì)植物組織培養(yǎng)中常出現(xiàn)的問題進(jìn)行 了分析 ,探討了污染、褐變、玻璃化、遺傳穩(wěn)定性、黃化等發(fā)生的可能原因，并提出了相應(yīng)的防治措 施。關(guān)鍵詞離體快繁 ;

4、污染；褐變；玻璃化；遺傳穩(wěn)定性 ; 黃化Analysis of the Common Problems in Plant Vitro PropagationPick toPlant tissue culture is developed in the early 20th century, a new technology of modern agricultural biotechnology ， is one of the important constituent, has increasingly widely applied in the enviroment of horticul

5、tural plants and rapid propagation ， etc。 Aiming at the plant tissue culture often appears the question were analyzed ， pollution ， Browning, vitrification ， genetic stability ， such as possible reasons Browning ， and puts forward the corresponding prevention cuoKey wordsPropagation in vitro ；contam

6、ination; browning ； vitrification; genetic stability ； etiolation個(gè)人收集整理 勿做商業(yè)用途 緒論：植物組織培養(yǎng)是研究植物生長(zhǎng)和分化規(guī)律的重要手段，是在人工控制條件下培養(yǎng)外植體再生器 官或植株的技術(shù)，可以在不受植株體其它部分干擾下研究被培養(yǎng)部分生長(zhǎng)和分化的規(guī)律，并可以利 用各種培養(yǎng)條件影響它們的發(fā)育進(jìn)程。植物組織培養(yǎng)技術(shù)，作為現(xiàn)代生物技術(shù)的一個(gè)重要手段，已在很多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。植物離體快繁可節(jié)約人力和物力，并可人為控制培養(yǎng)基中的各種成分 和環(huán)境條件，全年均可連續(xù)試驗(yàn)和生產(chǎn)，因而近年來在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用十分廣泛。但是，在開展植物

7、組培快繁技術(shù)研究和生產(chǎn)的過程中，我們發(fā)現(xiàn)有一些較常見的問題，有時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響組培工作效率 和進(jìn)展，降低組培快繁的經(jīng)濟(jì)效益。譬如遺傳穩(wěn)定問題、玻璃化問題、污染及褐化問題等。因此， 探討植物離體快繁過程中常見的問題、分析其原因、提出有效的防治措施，是至關(guān)重要的。1離體快繁過程中的問題、原因及防治措施1.1 污染問題1。1.1污染的來源首先應(yīng)考慮無菌操作的規(guī)范性 ，培養(yǎng)基接種工具消毒是否徹底。在此基礎(chǔ)上植物組培中的污染主要是真菌、細(xì)菌引起的污染。真菌在培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)快，很容易觀察到，而細(xì)菌潛伏期長(zhǎng)，植物組織 一般不表現(xiàn)癥狀，所以很難在前期和肉眼觀察到。國(guó)外有關(guān)學(xué)者認(rèn)為細(xì)菌污染的來源主要有三個(gè)： 一是材

8、料內(nèi)部滅菌處理不好，這樣造成的污染占污染總數(shù)的1/31/2。二是在正常的滅菌的條件下，內(nèi)生菌能夠存活，這樣的污染占污染源的1/4。三是來自寄生植物的污染占1/41/2.同時(shí)認(rèn)為有些植物的昆蟲和螨蟲的體表帶有霉菌的孢子和細(xì)菌，在九、十月份是重要的污染源，因多種植物昆蟲處在大量繁殖階段，此時(shí)大量昆蟲造成的污染源最易造成組培污染的嚴(yán)重發(fā)生.近六年來，我們通過對(duì)獼猴桃、櫻桃、托柄菝葜及大花非洲菊初級(jí)培養(yǎng)污染的研究中發(fā)現(xiàn)，高溫、多雨的環(huán)境更有利于污 染的發(fā)生，而且隨著植物材料年齡的增長(zhǎng)，植物材料的健康狀況不斷惡化，組培污染也會(huì)更加嚴(yán)重。另外，外植體的狀況，環(huán)境條件和操作過程也是引起污染的主要原因。污染的

9、防治措施首先嚴(yán)格保證無菌操作的規(guī)范性，對(duì)培養(yǎng)基接種工具及接種室的嚴(yán)格消毒處理然后(1 )抗生素對(duì)細(xì)菌污染的防治。植物組培污染的控制取決于滅菌技術(shù)、滅菌設(shè)備、外植體 年齡和環(huán)境條件等許多方面。盡管在植物組培過程中盡量使無菌條件更完善，但是污染還是經(jīng)常發(fā) 生，甚至有時(shí)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的組培苗部分污染或全部死亡，這是無法挽回的巨大損失，因此人們對(duì)細(xì) 菌污染研究的較多。細(xì)菌污染的消除有些研究人員希望用抗生素防治，抗生素可以直接加入到培養(yǎng) 基中，也可以用抗生素噴灑或浸泡外植體.但植物種類不同，所用抗生素的種類、 濃度和處理時(shí)間也不同，還有的抗生素對(duì)污染消除根本不起作用，因此必須對(duì)不同植物采用不同的抗生素的種類

10、、濃 度和處理時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探討。一般情況下，為消除革藍(lán)氏陽性菌對(duì)有些木本植物污染莖段組培苗， 可在培養(yǎng)基中加入氨中噻肟頭孢菌素、四環(huán)素、利福平和多粘菌素 B分別以25mg/L、25mg /L、6mg/L和6mg/L濃度的混合物，可使細(xì)菌完全被消除。另外，用頭孢菌素n和鏈霉素消除某些觀賞植物外植體中的內(nèi)生菌也有非常明顯的效果?？傊槍?duì)不同植物品種要想找到一種合適的抗生素處理組合是 比較困難的，工作也較繁瑣。國(guó)內(nèi)外有關(guān)學(xué)者都認(rèn)為沒有一種抗生素對(duì)所有的細(xì)菌都有效，即使有 效，抗生素消除植物組培污染的方法也是暫時(shí)的解決方案，如果長(zhǎng)期使用抗生素消除污染，必然對(duì) 組培苗的生長(zhǎng)、分化和生根造成一定的影響。文

11、檔為個(gè)人收集整理，來源于網(wǎng)絡(luò)本文為互聯(lián)網(wǎng)收集，請(qǐng)勿用作商業(yè)用途(2 )真菌污染的防治?？股叵?xì)菌的研究比較多，但目前酵母菌污染的研究相對(duì)較少，G BPoulsen等在蘋果砧分裂組織微生物消除的研究中，測(cè)試了幾種物質(zhì)對(duì)酵母菌的毒性，雖然它們對(duì)植物材料都沒有傷害，但是沒有一種能夠消除酵母菌。胍類化合物是對(duì)兩種酵母菌有毒的唯一復(fù)合物， 但它對(duì)分裂組織有毒害作用。霉菌污染的一個(gè)重要特點(diǎn)是迅速，難控制目前，關(guān)于霉菌污染的研究還很少，有人建議用防腐劑消除霉菌污染，但是還未見報(bào)到。常用防治污染方法。目前外植體表面滅菌的方法除常規(guī)的氯化汞、雙氧水、酒精和次氯酸鈉外，用于廁所消毒的家凈也是一種良好的表面殺菌

12、劑。G Rreustle等學(xué)者在對(duì)葡萄組織培養(yǎng)污染的研究中發(fā)現(xiàn)家凈表面消毒效果很好，家凈雖然效果極好，價(jià)格便宜，但內(nèi)生菌潛伏期長(zhǎng)，內(nèi)寄生 性強(qiáng)，危險(xiǎn)性大，對(duì)內(nèi)生菌而言，任何一種表面消毒劑對(duì)外植體的內(nèi)生菌幾乎都是無能為力的，除了 在培養(yǎng)基中加入殺菌劑消除植物組培污染外，還有許多其他的方法減少污染 ，如用抗微生物藥劑定期噴灑活植物新梢、在新梢或發(fā)芽期套袋法隔絕微生物的侵入等方法來獲得外植體接種消毒成功率。 另外，培養(yǎng)環(huán)境和接種環(huán)境的各處不同，滅菌的方法以及新型殺菌設(shè)備的應(yīng)用在植物組培污染中也起著一定的重要作用。1.2 褐變冋題1.2。 1 褐變的原因褐變是材料在接種后，材料表面出現(xiàn)褐色物質(zhì)甚至培養(yǎng)

13、基也呈褐色的現(xiàn)象.在完整的植物體細(xì)胞中，酚類化合物與多酚氧化酶是分隔存在的，切割外植體使其受到創(chuàng)傷刺激，受傷細(xì)胞內(nèi)的酚類化合物和多酚氧化物便流出，酚類化合物被多酚氧化物氧化成褐色的醌類物質(zhì)和水。醌類物質(zhì)又會(huì)和酪 氨酸酶發(fā)生作用使外植體蛋白質(zhì)聚合，導(dǎo)致外植體生長(zhǎng)停頓，直至死亡。許多植物尤其是木本植物組織中含有較多的酚類化合物，褐變現(xiàn)象比較嚴(yán)重。影響外植體褐變的因子主要有：外植體酚類物質(zhì)的含量、PPO活性上的差異、外植體的大小、培養(yǎng)基的成份、激素類型等。1。2.2 克服外植體褐變的措施在植物組織培養(yǎng)中，一般都是從培養(yǎng)基的組成，如培養(yǎng)基的無機(jī)鹽成份、蔗糖濃度、添加的激素 的種類和濃度、加入吸附劑活性

14、炭或PVP (聚乙烯吡咯烷酮)等來防治外植體褐化。選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w不同時(shí)期和年齡的外植體在培養(yǎng)中褐變的程度不同，選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w是克服褐變重要手段。 避免在夏季高溫季節(jié)取材，選擇幼苗、褐變程度輕的品種和部位作為外植體.外植體預(yù)處理對(duì)較易發(fā)生褐變現(xiàn)象的外植體可采取一些措施進(jìn)行預(yù)處理，即先用流水沖洗外植體，然后放置 在5 C左右的冰箱中低溫處理 1214h。消毒后先接種到只含蔗糖的瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)37d，使組織中的酚類物質(zhì)部分滲入培養(yǎng)基中，取出外植體用0。1 %的漂白粉溶液浸泡10min，然后再接種到合適的培養(yǎng)基上.篩選合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件降低培養(yǎng)基中的鹽濃度，減少BA和KT的使用，采取液體培養(yǎng)

15、，初期在黑暗或弱光條件下培養(yǎng) ，保持較低溫度(1520C)也是降低褐變的有效方法。添加抗氧化劑和系縛劑在培養(yǎng)基中添加抗氧化劑，或用抗氧化劑進(jìn)行材料的預(yù)處理或預(yù)培養(yǎng)，可預(yù)防醌類物質(zhì)的形成，對(duì)易發(fā)生褐變的植物材料培養(yǎng)有很好的輔助作用。常用的抗氧化劑有抗壞血酸、聚乙烯吡咯烷酮、 牛血清蛋白、硫代硫蛋白等.另外，添加1-5g/L的活性炭對(duì)酚類物質(zhì)的吸附效果也很明顯。文檔為個(gè)人收集整理，來源于網(wǎng)絡(luò)本文為互聯(lián)網(wǎng)收集，請(qǐng)勿用作商業(yè)用途(5 )連續(xù)轉(zhuǎn)移對(duì)易發(fā)生褐變的植物，在外植體接種后12d立即轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上，可減輕酚類物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)物的毒害作用，連續(xù)轉(zhuǎn)移多次基本解決外植體的褐變問題。1。3玻璃化問題1.3.

16、1玻璃化發(fā)生的原因瓊脂和蔗糖濃度與玻璃化成負(fù)相關(guān)，瓊脂或蔗糖濃度越高，玻璃苗的比率越低。Daniel G. W.Brown 認(rèn)為玻璃化可能是培養(yǎng)基滲透勢(shì)不當(dāng)所致. 碳源不僅為芽的形成提供能量， 而且也起滲透調(diào)節(jié)作用 .隨瓊脂濃度及純度的增加，培養(yǎng)基硬度增加,從而影響其襯質(zhì)勢(shì)和水分狀況。（ 2）試管苗玻璃化可能是培養(yǎng)基內(nèi)水分狀態(tài)不適應(yīng)的一種生理變態(tài)。Debergh 等研究表明，液體培養(yǎng)基的水勢(shì)影響玻璃苗的形成， Ziv 等認(rèn)為只要降低培養(yǎng)容器中的相對(duì)濕度，就可以降低玻璃 苗的比例。 劉思穎等 （1988） 測(cè)得絲石竹玻璃苗葉片的水勢(shì)約為正常苗的 1.9 倍，含水量為正常苗的 2。 09-2.21

17、 倍。自由水和高濕度可能與肉質(zhì)嫩梢的形成有關(guān)。 Davis 等研究表明，液體培養(yǎng)是導(dǎo)致玻璃 化的主要原因。（3 ）許多學(xué)者證明玻璃化與培養(yǎng)基中BA 濃度和培養(yǎng)溫度成正相關(guān) ,BA 濃度越高或培養(yǎng)溫度越高，玻璃苗比率越大 .Debergh 曾用 14C KT 研究表明，隨瓊脂濃度的增加， KT 利用率降低。同時(shí) 也證明，隨 BA 濃度的增加，玻璃化率增加。 Bornman 等用 14C-BA 研究表明， 14C-BA 的積累與不 定芽分化和玻璃化是同步的。 玻璃化苗的一個(gè)重要特征是葉脈明顯加長(zhǎng)， 而 GA3 也有類似效應(yīng)， 也 許 GA3 促進(jìn)了細(xì)胞過度生工， 從而導(dǎo)致玻璃化。 生長(zhǎng)素可以改變細(xì)

18、胞壁的機(jī)械特性， 使其具有更大 的可塑性。（4）許多研究表明，玻璃化被認(rèn)為是一種非受傷協(xié)迫條件下形態(tài)上的反應(yīng)。玻璃苗苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性低于正常植株。 在協(xié)迫條件下乙烯的快速合成，又通過抑制氨基環(huán)丙烷羧酸 （ACC）酶的形成， 對(duì)乙烯起反饋調(diào)節(jié)作用。 通過改善氣體交換防止玻璃化形成,可能與克服乙烯反饋抑制有關(guān).一種與膜有關(guān)的過氧化物酶直接或間接摻入ACC 合成乙烯?，F(xiàn)已證明， IAA- 氧化酶體系至少在乙烯合成的最后一步起作用 AA含量降低將進(jìn)一步通過 IAA調(diào)節(jié)S腺苷甲硫氨酸（SAM）轉(zhuǎn)化成 ACC 這一過程 ,從而降低了乙烯形成。 Kevers 等曾證明 ,對(duì)于玻璃苗， 堿性過氧

19、化酶同功酶活性增加， 而酸性同功酶活性降低。但總可溶性過氧化物酶活性增加,僅限于堿性提取物。有人認(rèn)為，玻璃化的形成主要是膜的效應(yīng)而與核酸無關(guān) .乙烯促進(jìn)了葉綠素分解及細(xì)胞的畸形發(fā)展。乙烯處理破壞了膜的結(jié)構(gòu)，隨著細(xì)胞壁解離，細(xì)胞內(nèi)積累有在量纖維素及泡狀物質(zhì)?？梢姡蚁?duì)玻璃化的影響，與改 變組織的生理生化及纖維結(jié)構(gòu)有關(guān)。 Hakkart F. A. 等認(rèn)為玻璃苗是培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)氣體與外界交換不暢造 成的。密閉的封瓶口材料是導(dǎo)致玻璃化的原因之一（陳國(guó)菊等1992，李云等 1996）。（5） 導(dǎo)致玻璃化的因素可能是培養(yǎng)基中高的含N量，特別是高的氨態(tài) N ,。（6）還有人發(fā)現(xiàn)不同部位的節(jié)段外植體與玻璃化有關(guān)

20、，以留蘭香基部節(jié)段所形成的試管苗玻璃苗嚴(yán)重 ,中部莖段次之，莖尖最好（柴明良）;重瓣絲石竹中部莖段出現(xiàn)玻璃苗較多，基部莖段較少,莖尖沒有（郭達(dá)初 ）。郭東紅等（ 1989）認(rèn)為瑞香莖尖外植體大小與玻璃化相關(guān)，莖尖外植體越小， 出現(xiàn)玻璃苗比率越大。玻璃化苗是在芽分化啟動(dòng)后的生長(zhǎng)過程，碳、氮代謝和水分發(fā)生生理性異常 所引起。 其實(shí)質(zhì)是植物細(xì)胞分裂與體積增大的速度超過了干物質(zhì)生產(chǎn)和積累的速度,植物只好用水分來充漲體積 ,從而表現(xiàn)玻璃化 。個(gè)人收集整理 , 勿做商業(yè)用途文檔為個(gè)人收集整理，來源于網(wǎng)絡(luò)1。 3。 2 控制組培苗玻璃化的措施盡管關(guān)于玻璃化的成因及其生理機(jī)制到目前為止仍未得出一致的結(jié)論,但對(duì)

21、某些植物的玻璃化已得到有效的控制 .這些研究表明， 控制玻璃化要從培養(yǎng)的環(huán)境條件和生理生化方面入手，具體措施如下：（1）利用固體培養(yǎng) ,增加瓊脂濃度 ,降低培養(yǎng)基的襯質(zhì)勢(shì)，造成細(xì)胞吸水阻遏。提高瓊脂純度， 也可降低玻璃化。（ 2）適當(dāng)提高培養(yǎng)基中蔗糖含量或加入滲透劑,降低培養(yǎng)基中的滲透勢(shì)，減少培養(yǎng)基中植物材料可獲得的水分，造成水分脅迫。（3） 降低培養(yǎng)容器內(nèi)部環(huán)境的相對(duì)濕度。（4） 適當(dāng)降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素和赤霉素的濃度.（5）控制溫度適當(dāng)?shù)蜏靥幚恚苊膺^高的培養(yǎng)溫度在晝夜變溫交替的情況下比恒溫效果好。增加自然光照。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，玻璃苗放于自然光下幾天后莖、葉變紅,玻璃化逐漸消失，因自然光中的紫

22、外線能促進(jìn)試管苗成熟 ,加快木質(zhì)化。（6）增加培養(yǎng)基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Mn元素含量，降低 N和Cl元素比例，特別 降低銨態(tài)氮濃度，提高硝態(tài)氮含量。（7 ）改善培養(yǎng)容器的通風(fēng)換氣條件，如用棉塞或通氣好的封口膜封口。（8）青霉素G鉀（2mg/L-6mg/L ）能有效防治菊花試管苗的玻璃化，青霉素 （40萬單位/升）可 降低芥菜試管苗的玻璃化（9）培養(yǎng)基中加入間苯三酚或根皮苷。1.4 遺傳穩(wěn)定性遺傳穩(wěn)定性即保持原有良種特性問題.雖然植物組織培養(yǎng)中可獲得大量形態(tài)、生理特性不變的植株,但通過愈傷組織或懸浮培養(yǎng)誘導(dǎo)的苗木，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一些體細(xì)胞變異個(gè)體，雖然其中有些是有益變異但更多的是

23、不良變異，諸如觀賞植物不開花、花小或花色不正；果樹植物不結(jié)果、抗性下降或果小、產(chǎn)量低、品質(zhì)差等問題，在生產(chǎn)上造成很大損失，并容易引起經(jīng)濟(jì)糾紛，如香蕉試管苗中的不 良變異表現(xiàn)植株矮小、不結(jié)果，給果農(nóng)造成損失。許多研究表明，在植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞、組織和再生植株以及后代中會(huì)出現(xiàn)各種 變異這種變異具有普遍性，既不限于某些物種，也不局限于某些器官。變異所涉及到的性狀也相當(dāng) 廣泛。體細(xì)胞無性系變異的頻率相當(dāng)高，且不能逆轉(zhuǎn)，有的高達(dá)40 %60 %，如非洲堇的個(gè)別品種、玉簪等，有的高達(dá)100%，如馬鈴薯、菠蘿等.1。4.1 影響遺傳穩(wěn)定性的因素（1 ）基因型：基因型不同，發(fā)生變異的頻率也不同。在

24、玉簪中，雜色葉培養(yǎng)的變異頻率為43% ,而且綠色葉僅為1。2%。甘蔗品系H371933和H50-7209中得到的再生植株分別有 12。1%和34。8% 變異香龍血樹愈傷組織培養(yǎng)再生植株全部發(fā)生變異嵌合體植株通過組培，其嵌合性更大。單倍體和多倍體變異大于二倍體。（2）繼代次數(shù)：根據(jù)報(bào)道，試管苗的繼代培養(yǎng)次數(shù)和時(shí)間影響植物穩(wěn)定性，是造成變異的關(guān)鍵因素。一般隨繼代次數(shù)和時(shí)間的增加，變異頻率不斷提高。朱靖杰（1995）報(bào)道，北蕉誘導(dǎo)不定芽產(chǎn)生，其變異率繼代5次為2。14%; 10次為4.2%;繼代20次后則100%發(fā)生變異。因而香蕉繼代培養(yǎng) 不能超過一年。經(jīng)長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)的煙草愈傷組織再生植株，其花和葉

25、的不正常性是很普遍的，而短期培養(yǎng)物卻未發(fā)現(xiàn)變異研究表明，變異往往出現(xiàn)在由年齡漸老的培養(yǎng)物所再生的植株中，而由幼齡 培養(yǎng)物再生的植株一般較少發(fā)生，也就是說，各種變異發(fā)生的頻率隨組織培養(yǎng)時(shí)間的增加而提高。長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)繁殖的植物變異率較高，有人認(rèn)為這是由于在外植體的體細(xì)胞中已經(jīng)積累著遺傳變異（3）發(fā)生方式：離體器官發(fā)生有5種類型，以莖尖、莖段等發(fā)生不定芽的方式繁殖不易發(fā)生變異或變異率極低.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)通過節(jié)培法繁殖名貴葡萄品種，經(jīng)58年繼代培養(yǎng),其變異頻率與常規(guī)方法相同，在數(shù)成株中僅發(fā)現(xiàn)一株變異此外用菊花莖尖、腋芽培養(yǎng)，變異較低，而從花瓣誘導(dǎo)的變異較高。由花椰菜根誘導(dǎo)的不定芽和再生植株中有不少變異，而從

26、頂端分生組織（花菜）產(chǎn)生的4000個(gè)再生植株基本沒有變異。通過愈傷組織和懸浮培養(yǎng)分化不定芽的方式獲得再生植株變異率較高。通過分化胚狀途徑再生植株變異較少，通過莖尖或分生組織培養(yǎng)增殖側(cè)芽可以保持基因型基本不變。 在高濃度的激素作用下，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)加快，不正常分裂頻率增高，再生植株變異也增多。1.4。2提高遺傳穩(wěn)定性，減少變異的措施在進(jìn)行植物快速繁殖時(shí)，應(yīng)盡量采用不易發(fā)生體細(xì)胞變異的增殖途徑，以減少或避免植物個(gè)體 或細(xì)胞發(fā)生變異，如采用生長(zhǎng)點(diǎn)、腋芽生枝、胚狀體繁殖方式，可有效地減少變異縮短繼代時(shí)間，限 制繼代次數(shù)，每隔一定繼代次數(shù)后，從新開始接外植體進(jìn)行新的繼代培養(yǎng)；取幼年的外植體材料;采用適當(dāng)

27、的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)種類和較低的濃度；減少或不使用培養(yǎng)基中容易引起誘變的化學(xué)物質(zhì)；定期檢測(cè)、及時(shí)剔除生理、形態(tài)異常苗，并進(jìn)行多年跟蹤檢測(cè)，調(diào)查再生植株開花結(jié)實(shí)特性，以確定其 生物學(xué)性狀和經(jīng)濟(jì)性狀是否穩(wěn)定.1。5黃化問題1.5。1黃化原因組培苗黃化是指在組織培養(yǎng)過程中由于培養(yǎng)基成分、環(huán)境、激素、碳水化合物等各種因素引起 的幼苗整株失綠，全部或部分葉片黃化、斑駁的現(xiàn)象。黃化現(xiàn)象在植物組織培養(yǎng)中比較常見，特別在部分木本花卉中較為常見，引起黃化的主要原因是培養(yǎng)基中Fe的含量不足；各礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不均衡；培養(yǎng)環(huán)境通氣不良，瓶?jī)?nèi)乙烯含量升高；激素配比不當(dāng)；糖用量不足或長(zhǎng)時(shí)間不轉(zhuǎn)移糖已耗盡;PH值變化過大；培養(yǎng)溫度不適

28、；光照不足等。黃化解決的方法在配制母液和培養(yǎng)基的制作過程中，要檢查儀器設(shè)備是否準(zhǔn)確，還要認(rèn)真細(xì)致地核對(duì)每項(xiàng)稱量的 每一個(gè)環(huán)節(jié)；及時(shí)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物；使用透氣的封口膜以改善瓶?jī)?nèi)通氣狀況；適當(dāng)調(diào)節(jié)pH值、激素配比和無機(jī)鹽濃度；配制培養(yǎng)基時(shí)切記不要忘記加糖；控制培養(yǎng)室內(nèi)的溫度；適當(dāng)增加光照；另外，在 培養(yǎng)基中添加抗生素類物質(zhì)如青霉素、鏈霉素、頭孢霉素等，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)幼苗黃化現(xiàn)象，應(yīng)適當(dāng) 減少用量或停止使用。2離體快繁的前景與探討2.1其優(yōu)點(diǎn)：離體快繁可快速繁殖某些稀有植物或有較大經(jīng)濟(jì)價(jià)值的植物；解決無性繁殖的問題2.2適應(yīng)現(xiàn)狀的需求（1）依靠自然條件在較短時(shí)間內(nèi)繁殖稀有植物和經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的植物，受到地理環(huán)境和季節(jié)的限制，很難達(dá)到快速、高效的目的；特別對(duì)于在短時(shí)期內(nèi)需要達(dá)到一定數(shù)量，才能創(chuàng)造應(yīng)有價(jià)值的植物，時(shí)間就是效益，只有通過組織培養(yǎng)的方法才能滿足這一要求。用組織培養(yǎng)法繁殖植物，這是組織培養(yǎng)應(yīng)用于生產(chǎn)的主要的和成效最大的實(shí)例。首先是在蘭花上的成功應(yīng)用。自Morel在1960年得到蘭花組織培養(yǎng)苗后，很快應(yīng)用于生產(chǎn)，形成了組織培養(yǎng)法繁殖蘭花工業(yè)。（2） 由于組織培養(yǎng)法繁殖植物的明顯特點(diǎn)是快速，每年可以數(shù)以百萬倍速度繁殖，因此對(duì)一些繁殖系數(shù)低，不能用種子繁殖的特優(yōu)植物品種的繁殖，尤為意義重大。提高植