糖化蛋白檢測

1、糖化蛋白檢測Company Logo糖化蛋白的定義糖化蛋白：血液中的葡萄糖可以將糖基連接到氨基酸的殘基上形成的物質，稱糖化蛋白葡萄糖 糖基+氨基酸 殘基葡萄糖 糖基 殘基 氨基酸 注：1.反應中的蛋白質有很多種，如血紅蛋白、清蛋白、晶狀體蛋白及膠原蛋白等2.反應是一個緩慢、不可逆的非酶促反應3.該反應糖化蛋白的濃度主要用于評估血糖的控制效果，并不用于糖尿病的診斷Company Logo糖化蛋白分類1.2.3.糖化血紅蛋白果糖胺晚期糖基化終末產物糖化血紅蛋白一.糖化血紅蛋白的簡介1.定義：糖化血紅蛋白為血紅蛋白兩條鏈N端的頡氨酸與葡萄糖化合而成。2.主要來源： 成人血紅蛋白通常有HbA(97%)

2、、HbA2(2.5%)、HbF(0.5%) HbA的糖基化分類：糖化HbA%HbA兩條鏈兩條鏈+ 1,6 兩磷酸果糖+ 6 磷酸果糖+ 丙酮酸+葡萄糖HbA1a1HbA1a2HbA1bHbA1cHbA0不能與普通血紅蛋白區(qū)分在HbA1中主要的成分是HbA1c，約占80%HbA163.糖化血紅蛋白的影響因素： 主要與血紅蛋白和紅細胞壽命時段內血糖平均 度有關 紅細胞的壽命為120天，其半壽期為35天，測定的糖化血紅蛋白，反應68周平均血糖降低：溶血性及失血性貧血，慢性腎衰，慢性持續(xù)性 低血糖癥等。增高：可以了解糖尿病人在23個月的血糖控制情況不佳。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性腎衰病人，地

3、中海貧血和白血病病人亦增高 糖化血紅蛋白的檢測二.糖化血紅蛋白的檢測 1.標本要求 采集靜脈血，用EDTA、草酸鹽和氟化物抗凝 肝素抗凝標本需要在2天內完成測定，且不適 用于某些方法的檢測，故不推薦使用 。 全血標本可于4攝氏度儲存一周， 70攝氏度 可以保存18周以上，一般不推薦 20攝氏度 保存 標本要求不能溶血和脂血 糖化血紅蛋白2.檢測方法：糖化血紅蛋白檢測方法很多，常用的有微柱法離子交換層析、親和層析、高壓液相、免疫凝集、離子捕獲法、電泳法等。 準確率最好的是高效液相層析法(HPLC)（1）陽離子交換色譜法 原理：糖化導致血紅蛋白分子表面陽離子丟失 在弱的陽離子交換劑中，例如Bior

4、ex70，同時伴有增加的離子濃度和（或）pH下降，糖化血紅蛋白在非糖化血紅蛋白前先洗脫。糖化血紅蛋白（2）、電泳法 原理：相比于非糖化血紅蛋白，因糖化而變化的總電荷和糖化血紅蛋白的等電點變化是瓊脂糖凝膠或者pH梯度5.06.5的凝膠等電聚焦電泳分離的基礎。（3）、親和層析法 原理：硼酸結合順式-羥基。商品化的m-氨基苯硼酸瓊脂糖共價結合的親和柱已可用于微柱分析檢測。將血樣本中的血紅蛋白加到層析柱后，所有的糖化血紅蛋白與硼酸結合而非糖化血紅蛋白通過層析柱可被測量。在加入高濃度也包含順式-羥基的多羥基復合物，例如山梨醇后，糖化血紅蛋白與硼酸的結合被替換而從柱子上洗脫下來。糖化血紅蛋白控制標準3.控

5、制標準 糖化血紅蛋白能夠反映過去23個月血糖控制的平均水平，它不受偶爾一次血糖升高或降低的影響，因此對糖化血紅蛋白進行測定，可以比較全面地了解過去一段時間的血糖控制水平 世界權威機構對于糖化血紅蛋白有著明確的控制指標： ADA（美國糖尿病學會）建議糖化血紅蛋白控制在小于7 IDF（國際糖尿病聯盟）建議糖化血紅蛋白控制標準為小于6.5。 目前我國將糖尿病患者糖化血紅蛋白的控制標準定為6.5以下。 糖化血紅蛋白與血糖的控制情況4%6%：血糖控制正常。 6%7%：血糖控制比較理想。 7%8%：血糖控制一般。 8%9%：控制不理想，需加強血糖控制，多注意飲食結構及運動，并在醫(yī)生指導下調整治療方案。 9

6、%：血糖控制很差，是慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的危險因素，可能引發(fā)糖尿病性腎病、動脈硬化、白內障等并發(fā)癥，并有可能出現酮癥酸中毒等急性合并癥。4.糖化血紅蛋白測定的臨床意義：1、是糖尿病患者血糖總體控制情況的指標 2有助于糖尿病慢性并發(fā)癥的認識 3指導對血糖的調整 4對判斷糖尿病的不同階段有一定的意義 5區(qū)別應激性血糖增高和妊娠糖尿病(GDM)中的檢測意義 果糖胺一、果糖胺1.定義：果糖胺是血清葡萄糖與血清蛋白分子末端的氨基發(fā)生非酶促糖化反應，形成高分子的酮胺結構。2.主要來源： 葡萄糖與其他蛋白（清蛋白、膜蛋白和晶狀體）結合形成酮胺，而清蛋白是血清蛋白質中含量最多的組分，所以測定果糖胺主要是測定糖化

7、清蛋白。3.清蛋白的半壽期約20天，測定果糖胺只能反映23周血糖的情況果糖胺二、果糖胺的測定1.標本要求不溶血的血清標本，也可用肝素抗凝血漿。標本在28可保存一周，不推薦冰凍保存測定標本。2.測定方法果糖胺的測定方法有光度法、HPLC、以及單克隆抗體等常用的是：果糖胺果糖胺 eneaminol 堿性緩沖液+硝基四氮唑藍甲贊生成的甲贊在530nm處的吸光度變化值與果糖胺的濃度成正比此方法的優(yōu)點：快速、經濟，已用于自動化分析，不受紅細胞 壽命和血紅蛋白異體的影響 缺點：受血漿總蛋白濃度的影響，白蛋白濃度1g/d,測量結果不可靠，同時受中度 溶血，膽紅素和維生素c干擾果糖胺3.參考范圍 健康成人：2

8、05285umol/L 糖化清蛋白：191265umol/L4.測量的臨床意義果糖胺(FRUCT)的測定反映糖化血清蛋白水平可了解患者過去12周內平均血糖的水平。增高則表明為糖尿病。晚期糖基化終末產物一、AGE簡介1.定義葡萄糖與長壽蛋白（如膠原）連接形成的產物2.形成過程 葡萄糖與長壽蛋白（如膠原）連接，早期形成可逆的Schiff堿，后者經結構重排形成較穩(wěn)定的酮胺化合物（Amadori產物），再經過脫水、氧化和縮合等反應，最后形成穩(wěn)定的、不可逆的AGEs。晚期糖基化終末產物3.測定方法（1）放射免疫分析法 它檢測AGEs的靈敏度高，但對抗AGEs抗體純度的要求很嚴格； （2）放射受體分析法 本方法的特異性、精確性和重復性均很好，但檢測時須用較大量放射性同位素，易造成環(huán)境污染，故在普通實驗室難以應用（3）熒光光譜法 AGEs在Ex370/Em440nm有特征性吸收光譜，熒光光譜分析是測定AGEs較常用的方法194.AGE對機體的影響 糖基化反應在正常機體即緩慢進行，AGEs水平隨年齡增長而緩慢增加。但在老化過程