從牛奶中提取酪蛋白

1、實(shí)驗(yàn)二從牛奶中提取酪蛋白一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊髮W(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的方法。了解從牛奶中制取酪蛋白的原理。二、實(shí)驗(yàn)原理牛乳中的主要蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量約為3.5g/100m1。酪蛋白是含磷蛋白質(zhì)的混合物，相對(duì)密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有機(jī)溶劑，等電點(diǎn)為4.7.利用等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低的原理，將牛乳的pH值調(diào)至4.7時(shí)，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂質(zhì)雜質(zhì)后便可得到純的酪蛋白。三、原料與器材鮮牛奶、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、抽濾裝置。四、試劑1.95%乙醇2.無水乙醚3.0.2mo1/1的醋酸-醋酸鈉緩沖液A液（0.2mo1/1的醋酸-醋酸鈉溶液）：稱取NaAc.3H2O54.44

2、g，定容至2000ml。B液（0.2mo1/1的醋酸-醋酸鈉溶液）:稱取優(yōu)級(jí)純醋酸（含量大于99.8%）12.0g,定容至1000ml。取A液1770ml與B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖液3000ml。4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（體積比）。五、操作步驟將5ml牛奶置試管或小燒杯中，在水浴中加熱至4C,在攪拌下漫漫加入預(yù)熱至4C（應(yīng)注意兩種液體都應(yīng)先預(yù)熱至4C再用），pH4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖液5ml，用精密pH試紙或酸度計(jì)調(diào)pH至4.7（用1%NaOH或10%醋酸溶液進(jìn)行調(diào)整）。觀察牛奶開始有絮狀沉淀出現(xiàn)后，保溫一定時(shí)間使沉淀完全。將上述懸浮液冷卻至室溫。離

3、心分離8min（8000r/min）或15min（2000r/min），棄去上清液，得到酪蛋白粗制品。用蒸餾水洗滌沉淀3次（洗滌時(shí)將沉淀顆粒用干凈吸管吹開或用毛細(xì)管的封閉一端攪開，充分洗滌），離心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），棄去上清液。3在沉淀中加入3ml95%的乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾。用乙醇-乙醚混合液洗滌沉淀2次，最后用乙醚洗滌沉淀2次，抽干。4.將沉淀攤開在表面皿上，風(fēng)干，得酪蛋白精制品。5稱取所獲酪蛋白的質(zhì)量（g）。六、計(jì)算含量和得率：酪蛋白含量（g/ml）=酪蛋白（g）/50mX；得率測(cè)得含量理論含量X。七、實(shí)驗(yàn)注意事

4、項(xiàng)：離心管中裝入樣品后必須嚴(yán)格配平，否則對(duì)離心機(jī)損壞嚴(yán)重；離心管裝入樣品后必須蓋嚴(yán)，并擦干表面的水分和污物后方可放入離心機(jī)。離心機(jī)用完后應(yīng)拔下電源，然后檢查離心腔中有無水跡和污物，擦除干凈后才能蓋上蓋子放好保存，以免生銹和損壞。八、思考題：為什么調(diào)整溶液的可以將酪蛋白沉淀出來？試設(shè)計(jì)一個(gè)利用蛋白質(zhì)其他性質(zhì)提取蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備(每小組用量)1.試劑：鮮牛奶10ml；0.2mol/l的醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml；95%的乙醇6ml；乙醇-乙醚混合液(乙醇：乙醚=1：1體積比)6ml；乙醚4ml；蒸餾水若干。2.器材：(1)恒溫水浴鍋；(2)臺(tái)式離心機(jī)；抽濾裝置(循環(huán)水抽濾泵)；精密pH試紙(2條)或酸度計(jì)；表面皿；紗布或?yàn)V紙；剪