2022年體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則-生物芯片類試劑生產(chǎn)及

1、附件 6: 體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量掌握技術(shù)指導(dǎo)原就 掌握技術(shù)指導(dǎo)原就 征求看法稿 前 言 生物芯片類試劑生產(chǎn)及質(zhì)量本指導(dǎo)原就所定義的生物芯片診斷試劑是指將多個(gè)生物探針 包括 DNA 片段 ,寡核苷酸、抗原、抗體 ,組織,細(xì)胞等按預(yù)先設(shè)計(jì)的排列方式固定在特制的基質(zhì) 包括玻璃片 ,尼龍膜 ,硝酸纖維素膜等上 ,用特定的方法提取生物靶分子并進(jìn)行標(biāo)記 ,然后與固定在基質(zhì)上的生物探針特異性的結(jié)合,再用相應(yīng)的檢測(cè)設(shè)備 如激光掃描儀、 CCD檢測(cè)儀等和分析方法 包括軟件進(jìn)行檢測(cè)、記錄、分析 ,實(shí)現(xiàn)對(duì)生物靶分子的定性或定量檢測(cè)的試劑；依據(jù)芯片制作的主要原料和方法,生物芯片可分為核酸芯片、蛋白芯片、細(xì)胞芯片、組

2、織芯片、芯片試驗(yàn)室等；本指導(dǎo)原就是針對(duì)核酸和蛋白為檢測(cè)靶分子生物芯片的生產(chǎn)及質(zhì)量掌握技術(shù)指導(dǎo)原就 本指導(dǎo)原就；由于生物芯片技術(shù)仍在不斷進(jìn)展,其它類型靶分子檢測(cè)的芯片診斷試劑可參考,國家食品藥品監(jiān)督治理部門可依據(jù)科學(xué)技術(shù)進(jìn)展的需要 ,適時(shí)組織對(duì)本指導(dǎo)原就進(jìn)行 修訂；一、基本原就一生物芯片診斷試劑生產(chǎn)用的物料包括:原料 ,輔料和包裝材料；各種物料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo) ,并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求；二生物芯片診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員 ,相適應(yīng)的儀器設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境 ,獲得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證;應(yīng)當(dāng)依據(jù)體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)1 / 13 就試行的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量治理體系,形成文件和記錄

3、,加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行;應(yīng)當(dāng)通過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量治理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 試行的考核；三生物芯片診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)依據(jù)科學(xué)、規(guī)范的原就組織研發(fā) ,各反應(yīng)條件的挑選和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理；四生物芯片診斷試劑生產(chǎn)過程中所用的物料及工藝 全性方面的事宜；二、物料質(zhì)量掌握一核酸檢測(cè)芯片,應(yīng)充分考慮可能涉及的安核酸芯片檢測(cè)時(shí) ,從生物樣本中提取的核酸可用熒光標(biāo)記、金標(biāo)記和酶標(biāo)記；檢測(cè)方法包括光譜學(xué)方法和化學(xué)顯色；下面為熒光標(biāo)記芯片技術(shù)指導(dǎo)原就 ,采納金 標(biāo)記和酶聯(lián)顯色等的生物芯片診斷試劑可參照核酸芯片和蛋白芯片相關(guān)部分；1、主要生物原料核酸檢測(cè)芯片的主要生物原料包括模板DNA 、dNTPs、引

4、物、探針、標(biāo)記物等；應(yīng)依據(jù)工藝要求對(duì)這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn) ,以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；主要生物原料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定 1 模板 DNA ,不得隨便變更供應(yīng)商；重組 DNA: 經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證 ,關(guān)鍵位置沒有錯(cuò)誤； 1TE 溶解 ,濃度為 1 g/ l 以上 ,-20儲(chǔ)存；2dNTPsdATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP HPLC 純,PCR級(jí),無 DNase、RNase污染； -20以下儲(chǔ)存；外購者 ,由生產(chǎn)廠家 供應(yīng)質(zhì)量保證證明 ,達(dá)到生產(chǎn)要求；3 引物2 / 13 序列確證 ;進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增后 ,克隆測(cè)序鑒定驗(yàn)證 ,建立引物標(biāo)準(zhǔn)品；生產(chǎn)中的引 物原材料為凍干粉 ,PAGE

5、 純或 HPLC 純,外購者 ,供應(yīng)商應(yīng)供應(yīng)該產(chǎn)品的質(zhì)檢證明 ,如 PAGE 電泳結(jié)果或 HPLC 分析圖譜 ;自己合成的引物 ,需有 PAGE 電泳結(jié)果或 HPLC分析圖譜；用標(biāo)準(zhǔn) DNA 模板擴(kuò)增 ,電泳檢測(cè) ,譜帶單一 ,大小正確 ,與對(duì)比引物比較 ,產(chǎn) 物量一樣；符合視為合格引物；-20以下儲(chǔ)存；4 探針 用于陣列制備重組 DNA, 凍干粉 或 1 TE 溶解液 :每種 90 g以上,酶切鑒定分析圖譜；PCR產(chǎn)物,凍干粉 或 1TE 溶解液 :每種 90 g以上 ,PCR 電泳鑒定圖譜；合成寡核苷酸 :PAGE 純或 HPLC 純,每種 90 g以上 ,供應(yīng)該產(chǎn)品的 PAGE 電泳 分

6、析圖譜或 HPLC 分析圖譜；外購者 ,供應(yīng)商應(yīng)供應(yīng)質(zhì)量保證證明 ,達(dá)到生產(chǎn)要求；探針序列的正確性 :應(yīng)用克隆鑒定的標(biāo)準(zhǔn)DNA 雜交鑒定或進(jìn)行測(cè)序鑒定；外購者,供應(yīng)商應(yīng)供應(yīng)質(zhì)量保證證明 ,達(dá)到生產(chǎn)要求；純度和濃度檢測(cè) :用電泳方法 ,電泳圖譜沒有雜帶 ,目標(biāo)條帶的強(qiáng)度與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn) DNA 條帶進(jìn)行參比運(yùn)算其強(qiáng)度；純度較高的DNA, 可用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行定量；檢定合格后入庫；避光、-20以下儲(chǔ)存；5 標(biāo)記物含有激發(fā)光波長和發(fā)射光波長介于 商應(yīng)供應(yīng)質(zhì)量保證證明；6Taq DNA 聚合酶280 680nm的全部熒光分子 ,HPLC 純,供應(yīng)3 / 13 SDS檢測(cè),純度 95%,具 DNA 聚

7、合酶活性 ,無核酸外切酶活性及核酸內(nèi)切 酶活性 ,具熱穩(wěn)固性 ,941 小時(shí)后仍保持 50%活性,由供應(yīng)商供應(yīng)質(zhì)量保證； -20保 存；7UNG尿嘧啶糖基化酶 具尿嘧啶糖基化酶活性 ,無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性；1U UNG 37處理 3 分鐘后 ,103 拷貝以下含 U 模板被降解后 ,不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物 ,供應(yīng)商供應(yīng)質(zhì)量保證； -20儲(chǔ)存；8RT 酶 具有逆轉(zhuǎn)錄活性 ,供應(yīng)商供應(yīng)質(zhì)量保證； -20儲(chǔ)存；9RT-PCR 酶具逆轉(zhuǎn)錄酶活性和DNA 聚合酶活性 ,無核酸外切酶活性及核酸內(nèi)切酶活性,具熱穩(wěn)固性 ,941 小時(shí)后仍保持 50%活性； -20儲(chǔ)存；10 緩沖液各類酶制品需要的的反應(yīng)緩沖

8、液由廠家隨酶制品供應(yīng) 20儲(chǔ)存；2、主要生物輔料 1 雜交液,供應(yīng)商供應(yīng)質(zhì)量保證； -購買成品者 ,供應(yīng)商供應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) ,并按要求儲(chǔ)存；自制雜交液 ,按半成品檢定標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢定；2 酶類蛋白酶、核酸酶等 ,供應(yīng)商供應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) ,并按要求儲(chǔ)存；4 / 13 3 核酸提取試劑 供應(yīng)商供應(yīng)質(zhì)量保證 ,并按要求儲(chǔ)存；假如是自制提取液 ,按半成品檢定要求；4 魚精 DNA 供應(yīng)商供應(yīng)質(zhì)量保證 ,并按要求儲(chǔ)存；5 封閉用蛋白 包括牛血清白蛋白 ,奶粉等 ,供應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) ,并按要求保 3、主要化學(xué)原輔料參照中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)2022年版分析純級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn)；主要的檢測(cè)指標(biāo)包括:溶液外觀、一般鹽

9、類檢測(cè)、溶液pH 值檢測(cè)、溶解情形檢測(cè)、干燥失重的檢測(cè)、熾灼殘?jiān)?；主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定,不得隨便發(fā)生變更；化學(xué)原材料在購入時(shí) ,原材料的生產(chǎn)商必需供應(yīng)該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn) 報(bào)告 ,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1 無機(jī)類主要包括氯化鈉、氫氧化鈉、純化水等；2 有機(jī)類等；主要包括有丙酮、乙醇、枸櫞酸、吐溫 20、乙二胺四乙酸二鈉、氨基吡啉3 特別化學(xué)原料聚乙二醇 ,多聚賴氨酸 ,丙烯酰胺 ,甲叉雙丙烯酰胺 , N,N,N,N- 四甲基二乙胺TEMED 、溴化乙錠 EB、染色劑等；5 / 13 4、其他物料 1 載玻片 外觀 :光明處用肉眼觀看無缺刻

10、,無劃傷等；規(guī)格按設(shè)計(jì)要 激光掃描儀掃描 波長為芯片檢測(cè)波長 :包被層基本勻稱；2 試管、吸頭、試劑瓶等 一次性使用 ,由生產(chǎn)廠家供應(yīng)質(zhì)量保證 ,達(dá)到設(shè)計(jì)要求；3 其他 :說明書、包裝外盒等 參照國家食品藥品監(jiān)督治理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原就和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)治理規(guī)定執(zhí)行；二蛋白檢測(cè)芯片 1、主要生物原料 與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最親密相關(guān)的生物原料包括各種活性抗原、重組抗原、單克 隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科；這類原料可用于點(diǎn)膜、標(biāo)記相關(guān)酶、納 米金、光學(xué)基團(tuán)及中和反應(yīng)用抗原或抗體等；使用前應(yīng)按工藝要求對(duì)這類生物原料 進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn) ,以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量要求；主要

11、生物原料如為企業(yè)自己生產(chǎn) ,其 工藝必需相對(duì)穩(wěn)固 ;如購買 ,其供應(yīng)商要求相對(duì)固定 ,不能隨便變更供應(yīng)商 ,假如主要原料 包括工藝或其供應(yīng)商有變更,必需進(jìn)行原料驗(yàn)證 ,并進(jìn)行補(bǔ)充申報(bào)；主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括 : 1 外觀肉眼觀看 ,大部分生物原料為澄清透亮的液體 或者為白色粉末 ,不含有其他顏色的雜質(zhì) ; 6 / 13 ,不含異物 ,渾濁或搖不散的沉淀 ;特別生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)；2 純度和分子量主要通過 SDS電泳和電泳結(jié)果掃描儀進(jìn)行檢測(cè),也可用其他相宜的方法 ,如高效液相法等；作為免疫診斷試劑用生物原材料 ,用銀染法染色后 ,純度一般都要大于 90%;用考瑪氏亮藍(lán)染色后

12、;純度一般都要大于 量；3 蛋白濃度95%；SDS凝膠電泳法測(cè)定分子蛋白濃度可通過 Lowry 法、 280nm光吸取法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測(cè) ; 4 效價(jià) 效價(jià)的測(cè)定一般依據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果通過倍比稀釋法進(jìn)行；效價(jià)應(yīng)達(dá)到設(shè)計(jì) 規(guī)定的要求；5 功能性試驗(yàn) 功能性試驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒試劑實(shí)際生產(chǎn)中的情形 ,一般考查該原料 使用后的試劑靈敏度、特異性和穩(wěn)固性；2、主要生物輔料 生物輔料指的是在生產(chǎn)過程中作為蛋白愛護(hù)劑用途的一類生物原料 ,主要包括 小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等；這些生物原料均應(yīng)依據(jù)中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)2022 年版所規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗(yàn),達(dá)到相

13、應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方應(yīng)用于生產(chǎn)；生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定 商；,不得隨便變更供應(yīng)7 / 13 對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等,仍應(yīng)進(jìn)行功能性試驗(yàn) ,即以其為原料配制 10%濃度的稀釋液作為樣品 ,進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)定 ,均不得顯現(xiàn)非特異性反應(yīng)；對(duì)于標(biāo)記用酶 ,應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱 如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等 ,同時(shí)應(yīng)依據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢定方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn),酶的純度 RZ 值OD403nm/OD280nm 應(yīng)大于 3.0；3、化學(xué)原輔料參照中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)2022年版分析純級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn)；主要的檢測(cè)指標(biāo)包括:溶液外觀、一般鹽類檢

14、測(cè)、溶液pH 值檢測(cè)、溶解情形檢測(cè)、干燥失重的檢測(cè)、熾灼殘?jiān)?；主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定,不得隨便發(fā)生變更；化學(xué)原材料在購入時(shí) ,原材料的生產(chǎn)商必需供應(yīng)該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn) 報(bào)告 ,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1 無機(jī)類主要包括氯化鈉、氫氧化鈉、純化水等；2 有機(jī)類等；主要包括有丙酮、乙醇、枸櫞酸、吐溫 20、乙二胺四乙酸二鈉、氨基吡啉3 特別化學(xué)原料 DAB 聯(lián)苯二胺 ,染色劑等；4、其他物料 1 基質(zhì)8 / 13 以硝酸纖維素膜為例 :孔徑符合設(shè)計(jì)要求 0.45 m、0.22 m 等、均一性 厚度及 毛細(xì)遷移速度 20%、尺寸 與標(biāo)識(shí)吻合 2 瓶子

15、和干燥劑 由生產(chǎn)廠家供應(yīng)質(zhì)量保證 ,達(dá)到規(guī)定要求；3 其他 :說明書、包裝外盒等 應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督治理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原就和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)治理規(guī)定執(zhí)行；三、試劑盒各組分的生產(chǎn)生物芯片主要包括 DNA 芯片、蛋白芯片、組織芯片、細(xì)胞芯片以及芯片試驗(yàn)室等；生物芯片診斷試劑產(chǎn)品基本可分成二個(gè)部分,一部分是芯片 ,另一部分檢測(cè)用工作液；假如有配套的檢測(cè)儀器 ,仍需對(duì)儀器及處理軟件的應(yīng)用加以說明；一芯片的生產(chǎn)芯片生產(chǎn)的基本過程包括探針的獵取方法 1、探針獵取,純化,點(diǎn)樣,固定；不同的芯片 ,主要是探針不同 ,生物芯片的探針主要包括以下幾類 ,其它探針可參 考制定相

16、應(yīng)的技術(shù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1DNA 探針的獵取 探針的形式有 PCR 產(chǎn)物、克隆 DNA 、人工合成 DNA 片段等 ;要求有生產(chǎn)程序 和質(zhì)量指標(biāo)及檢測(cè)方法 ,要進(jìn)行純化 ,有固定的純化程序；2 抗原的生產(chǎn)9 / 13 抗原的獲得方法包括細(xì)胞培育、從生物材料中分別提取、基因工程表達(dá)以及合 成肽等；基因工程表達(dá)產(chǎn)物又分為純抗原蛋白、融合蛋白等；3 抗體抗體分單克隆抗體和多克隆抗體；抗體制備包括細(xì)胞培育 ,動(dòng)物腹水 ,基因工程 表達(dá)等方式；4 細(xì)胞和組織等；包括細(xì)胞或組織類型 ,固定方法；組織材料仍包括固定 ,包埋,切片等；5 芯片試驗(yàn)室 ,包括各種管道泵的制作等；2、陣列的排列設(shè)計(jì) 陣列的排列包括依次

17、排列、隨機(jī)排列、對(duì)角線排列等 ,設(shè)計(jì)時(shí)需考慮重復(fù)次數(shù)3、點(diǎn)陣的制作 使用儀器的要確定型號(hào) ,程序 ;手工制作的也要有標(biāo)準(zhǔn)操作 程序；4、固定 :包括固定方式 ,固定的條件等；應(yīng)對(duì)芯片生產(chǎn)的過程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量掌握 ,如點(diǎn)樣和固定過程的監(jiān)控、點(diǎn)樣均一性檢驗(yàn)等；二工作液配制 1、芯片生產(chǎn)所需試劑 ,包括細(xì)胞培育基 ,探針制備試劑 ,陣列制作和固定試劑 等；10 / 13 2、樣品處理試劑 ,芯片檢測(cè)靶分子分為核酸和蛋白質(zhì)；檢測(cè)核酸的樣品處理試 劑包括臨床取樣 ,DNA 提取或 RNA 提取試劑 ,逆轉(zhuǎn)錄試劑 ,PCR 擴(kuò)增試劑 ,核酸標(biāo)記試劑等 ;檢測(cè)蛋白的處理試劑包括取樣試劑,蛋白稀釋液以及特別試

18、劑等；3、反應(yīng)液 :檢測(cè)核酸時(shí)的反應(yīng)液包括預(yù)雜交液 ,雜交液 ,洗脫液等 ;檢測(cè)蛋白時(shí) ,包 括封閉液 ,抗原/抗體反應(yīng)液 ,洗脫液 ,顯色液 ,顯色終止液等；三數(shù)據(jù)判讀 1、判定標(biāo)準(zhǔn)及依據(jù) ,包括 Cut off 值的確定依據(jù)；2、數(shù)據(jù)判讀方式 :人工仍是軟件判讀；3、假如是軟件判讀 ,應(yīng)供應(yīng)軟件判定的科學(xué)依據(jù)包括生物學(xué)原理、數(shù)據(jù)獵取原理和判定試驗(yàn)是否成立的依據(jù)以及試驗(yàn)測(cè)試的原始報(bào)告 或數(shù)據(jù) ,并需要說明 : 1 軟件的來源 :購買或自己編制 ,是否獲得注冊(cè)等；2 軟件的用途 :包括對(duì)數(shù)據(jù)的分析、儲(chǔ)備、解讀、含義等；3 軟件的使用 :基本的使用程序；四、半成品質(zhì)量掌握 一抽樣檢驗(yàn)人員按批號(hào)抽取檢定需要數(shù)量的半成品 二質(zhì)控品,作好標(biāo)記 ,待檢；可用克隆并測(cè)序鑒定的 DNA 或經(jīng)特異性鑒定的抗原 或抗體；質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)盡可能與被測(cè)物基質(zhì)相一樣；11 / 13 三檢定要求 1、芯片檢定 1 靈敏度 :最低檢測(cè)限達(dá)到規(guī)定要求；2 特異性 :應(yīng)達(dá)到規(guī)定要求；如進(jìn)行全陰、全陽和