植物葉綠體色素含量的測定

1、植物葉綠體色素含量的測定植物生理生化實(shí)驗(yàn)室1高等植物葉綠體色素葉綠素類胡蘿卜葉黃素-C40H56O胡蘿卜素-C40H56葉綠素b-C55H70O6N4Mg葉綠素a-C55H72O5N4Mg2 葉綠素吸收光譜：3 最大吸收區(qū)域在藍(lán)紫光部分（400-500nm），基本上不吸收黃光，從而呈現(xiàn)黃色。 類胡蘿卜素吸收光譜：4紅光區(qū)藍(lán)光區(qū)5 葉綠體色素提取液中各色素的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離的情況下同時測定葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的濃度，可分別測定在663nm、645nm（分別是葉綠素a和葉綠素b在紅光區(qū)的吸收峰）和475nm的光吸收，然后根據(jù)Lambert-Beer定律，計(jì)

2、算出提取液中葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的濃度。A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.75Ca+45.60Cb （2）6將上式整理，可以得到下式： Ca=13.95A665- 6.88A649 Cb=24.96A649 7.32 A665 CT= Ca + Cb =18.08A649-6.63 A665 CX.C=(1000A470-2.05Ca-114Cb)/2457 葉綠體色素，不溶于水，易溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。同時，葉綠體色素在植物細(xì)胞內(nèi)是以色素蛋白復(fù)合體的結(jié)構(gòu)存在的。故通常用80%的丙酮或95%乙醇提取葉綠素。葉綠體色素的提取8 為什么要用含有水的有機(jī)溶劑提

3、取葉片 中的葉綠素？ 這是因?yàn)槿~綠素分子結(jié)構(gòu)的“頭部”是親水的，與蛋白質(zhì)結(jié)合很牢，需要經(jīng)過水 溶解作用才可被提取出來。9 實(shí)驗(yàn)步驟 1取2種新鮮玉米（完全/缺素）葉片，擦凈組織表面污物，剪碎（去掉中脈），混勻。 2各稱取0.2g，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2ml95乙醇，研成勻漿，再加少量95%乙醇，多次研磨至組織發(fā)白，靜置片刻。加入少量碳酸鈣；弱光下研磨，速度要快10實(shí)驗(yàn)步驟 3取濾紙1張，置漏斗中，用95%乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25ml容量瓶中，用少量95%乙醇沖洗研缽和研棒數(shù)次，將液體全部倒入漏斗中。 4用滴管吸取95%乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入

4、容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止。最后用95%乙醇定容至25ml，搖勻。 殘?jiān)械纳匾浞窒疵摚?1 實(shí)驗(yàn)步驟 5把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95乙醇為空白，在波長665nm、649nm和470nm下測定吸光度。過濾的比色液不能混濁12 95%乙醇提取液中色素計(jì)算公式： Ca=13.95A665- 6.88A649 Cb=24.96A649 7.32 A665 CT= Ca + Cb =18.08A649-6.63 A665 CX.C=(1000A470-2.05Ca-114Cb)/245 以上是求出葉綠素總濃度，mg.L-1 13按以下公式計(jì)算各色素含量(mg.g鮮重-1 ) ： 葉綠體色素含量 = 色素的濃度提取液體積(L)稀釋倍數(shù) 樣品鮮重(g)14注意事項(xiàng)：1、研磨要在弱光下進(jìn)行，且速度要快；2、研磨時要加入少量的碳酸鈣，保護(hù)葉綠素；3、殘?jiān)械纳匾浞窒疵摚?、波長要調(diào)準(zhǔn)；5、比色液不能混濁。 15思考題 1、葉綠素a、b在藍(lán)光區(qū)也有吸收峰，能否用這