指南2無菌工藝模擬試驗指南

1、 附件2無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）目的為指導和規(guī)范無菌原料藥生產企業(yè)開展無菌工藝模擬驗證，充分評價無菌原料藥生產過程的無菌保障水平，確保無菌原料藥的安全性，依據(jù)藥品生產質量管理規(guī)范（2010年修訂）及附錄，制定本指南。定義本指南所述的無菌工藝模擬試驗，是指采用適當?shù)呐囵B(yǎng)基或其他介質，模擬原料藥生產中無菌操作的全過程，評價該工藝無菌保障水平的一系列活動。范圍本指南涵蓋了無菌工藝模擬試驗的基本要求、不同工藝模式的相應要求、試驗的基本流程和結果評價等內容，適用于無菌原料藥的無菌工藝驗證。本指南所述條款是在現(xiàn)有無菌工藝技術基礎上提出的相關要求，旨在規(guī)范企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗活動。在科學的基礎

2、上，鼓勵新技術、新設備的引入，進一步提高無菌原料藥的無菌保障水平。原則在對無菌生產工藝充分認知和生產經驗累積的基礎上，應結合工藝、設備、人員和環(huán)境等要素定期開展無菌工藝模擬試驗，以確認無菌生產過程的可靠性。同時也為企業(yè)及時識別風險，進而改進無菌控制措施提供數(shù)據(jù)支持。開展無菌工藝模擬試驗應遵循以下原則：4.1 基于無菌工藝設計，對無菌生產全過程實施風險評估，識別生產過程風險點，評估現(xiàn)有控制措施的有效性。模擬試驗方案設計時，應充分考慮風險評估的結果。4.2 應充分考慮硬件裝備水平與無菌風險的關聯(lián)性，結合無菌生產過程所涉及到的工藝、設備、人員以及操作時限等因素針對性開展模擬試驗，盡可能模擬實際無菌生

3、產全過程，應特別關注暴露操作、人工干預等高風險過程。4.3 如生產線有多種無菌生產工藝，應采用風險管理的模式，在綜合評價不同無菌生產工藝的基礎上設計模擬試驗方案，以評價每種無菌工藝過程的可靠性。4.4 如無菌生產工藝存在顯著差異，宜對每種工藝開展模擬試驗。無菌原料藥生產工藝及模擬范圍無菌原料藥的無菌生產工藝通常為：原料藥進一步精制和無菌操作的結合，作為無菌原料藥生產工藝的開始，多采用除菌過濾或其他除菌技術將物料中的微生物去除，之后采取無菌操作技術的工藝單元，最終獲得免受微生物污染的原料藥。無菌工藝模擬試驗應從第一步無菌操作開始，即經除菌過濾或其他方法獲取無菌藥液，直至無菌產品完全密封結束。與無

4、菌制劑工藝相比，無菌原料藥的生產工藝一般更復雜，工藝設備選型呈現(xiàn)出非標化和功能設計差異化等特點。即使是同一無菌工藝過程，因設備選型和系統(tǒng)密閉程度的不同，無菌風險也存在著顯著差異。目前，無菌原料藥常用無菌工藝包括：無菌結晶工藝、無菌冷凍工藝和無菌噴霧干燥工藝。5.1 無菌結晶工藝典型的無菌結晶工藝流程是從非無菌物料開始，經除菌過濾進入無菌結晶罐內，通過調整物料溫度或加入其他溶劑使物料中有效活性成分結晶或沉淀析出，該過程會因控制晶體生長的需要而引入晶種。養(yǎng)晶結束后進入固液分離設備，去除母液獲得濕品，必要時對濕品進行洗滌，濕品在固液分離設備內進行干燥或通過輔助密閉系統(tǒng)轉移至其他干燥設備內進行干燥，之

5、后根據(jù)產品特性和最終質量要求進行必要的整粒（或微粉化），以控制產品粒度大小和分布，混粉也是常用的工藝單元，主要解決產品均一性的問題。最后產品經分裝、密封，將產品嚴封于容器內。5.2 無菌凍干工藝常見的無菌凍干工藝流程包括：液體物料經除菌過濾得到無菌料液，在無菌防護下使用加料槍將無菌料液注入凍干機托盤內，按照規(guī)定程序進行冷凍真空干燥，干燥結束后經除菌級呼吸器釋放凍干機內的真空。在無菌防護下打開凍干機門，將干品由托盤轉移至無菌料倉內，或在無菌防護下通過真空密閉吸料系統(tǒng)將干品轉移至下一工序，干品通常需要整粒和混粉工藝，以得到質量均一的干品，最后經分裝、密封，將產品嚴封于容器內。5.3 無菌噴霧干燥工

6、藝無菌噴干工藝適用于耐熱性好的無菌原料藥，工藝流程通常包括：液體物料經除菌過濾后持續(xù)穩(wěn)定地注入干燥塔內，在無菌高壓空氣的作用下瞬間霧化成液滴，并與流動的無菌熱空氣發(fā)生傳質傳熱，液滴因水分迅速蒸發(fā)而變?yōu)榉勰罡善罚@得的干品經氣固分離器收集至無菌料倉內，或直接分裝至最終市售包裝內。產品在料倉內可實現(xiàn)進一步混粉操作，隨后經分裝機完成干品的分裝、密封等過程，將產品嚴封于容器內。5.4 密閉與開放系統(tǒng)通常無菌工藝由一系列的無菌單元操作組成，單元操作分為“密閉”或“開放”系統(tǒng)，采用“密閉”系統(tǒng)可更好的保障無菌水平。5.4.1 “密閉”系統(tǒng)“密閉”系統(tǒng)是通過物理隔離的方式，阻止環(huán)境中微生物進入系統(tǒng)內部，保

7、護藥品免受外界的污染。因“密閉”系統(tǒng)設計上的優(yōu)越性，在無菌操作過程提供了可靠的無菌保護措施。企業(yè)進行無菌原料藥工藝設計時，應盡量考慮采用“密閉”系統(tǒng)的可行性。“密閉”系統(tǒng)至少具備以下特征：5.4.1.1 能夠實現(xiàn)在線滅菌（SIP）或系統(tǒng)在使用前進行密閉和滅菌。5.4.1.2 能夠在一個生產周期內保持系統(tǒng)的完整性。且在與其他密閉系統(tǒng)連接時，能夠保持系統(tǒng)完整性不受破壞。5.4.1.3 在實施預防性維護過程中，有相應措施保護系統(tǒng)的完整性。5.4.2 “開放”系統(tǒng)“開放”系統(tǒng)是不符合“密閉”系統(tǒng)規(guī)定的一項或多項特征的系統(tǒng)，“開放”系統(tǒng)條件下進行的操作是影響最終藥品無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設備（或管道）的

8、無菌連接、分裝過程容器的更換等，是引入微生物污染的高風險過程。模擬試驗方案設計時應重點考察以上過程中無菌保障措施的有效性。模擬試驗方案的設計及實施過程要求模擬試驗是一個系統(tǒng)性工程，通過模擬無菌生產工藝全過程，證實生產過程中無菌保障措施的有效性。因此，模擬試驗實施應關注以下幾方面：開展模擬試驗的前提條件開展無菌工藝模擬試驗之前，應確認與無菌工藝相關的支持性系統(tǒng)和滅菌系統(tǒng)等驗證已完成，并達到了可接受的標準。工藝設備、公用系統(tǒng)和輔助設施按照預期要求完成了設計、安裝、運行確認及與無菌生產有關的性能確認。已對工藝設備、公用系統(tǒng)、輔助設施等的滅菌方法完成了相應的驗證，物料及廠房、設施所用消毒劑及消毒方式完

9、成了相關的驗證。藥液及與產品接觸的氣體、設備組件、容器具滅菌工藝完成了相應的驗證。無菌生產區(qū)域的氣流及環(huán)境達到了設計要求，并能穩(wěn)定運行。依據(jù)規(guī)定的消毒方法和頻次進行環(huán)境消毒，應避免消毒劑的過度使用。根據(jù)無菌生產工藝要求建立了相關文件。參與無菌工藝模擬試驗的人員接受了藥品GMP、無菌更衣、無菌操作、微生物知識和模擬試驗方案的培訓。進入無菌潔凈區(qū)的全部人員通過了更衣程序的確認，并采取文件或其他措施，確定了每位參與者可進入的區(qū)域和允許的無菌操作項目。基于無菌風險的模擬試驗方案設計模擬試驗方案設計應結合無菌生產工藝，盡量與實際無菌操作過程保持一致，以求試驗結果真實反映生產過程的無菌保障水平。無菌生產工

10、藝的風險評估無菌生產工藝的設計基于對產品特性、工藝技術和無菌保證措施的認知和經驗的累積，設計模擬試驗方案前應對無菌生產工藝開展系統(tǒng)性風險評估，以充分識別無菌生產過程中潛在風險點，方案設計時充分考慮風險評估的結果。模擬試驗方案設計時，應重點考察和評估高風險無菌操作過程，如溶媒結晶工藝中引入晶種的過程。無菌生產工藝的暴露操作是影響最終原料藥無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設備（或管道）的無菌連接、無菌容器的轉運和更換、灌裝等關鍵操作。證實人員的無菌操作能力能夠滿足無菌生產要求，是實施模擬試驗的目的之一。模擬試驗方案設計時，應結合工藝過程中的開放系統(tǒng)，重點考察人員的無菌操作過程，評價人員無菌操作素養(yǎng)和防護措施

11、的可靠性。6.3 模擬介質的選擇與評價6.3.1 模擬介質的選擇應考慮模擬介質與無菌工藝的適宜性，結合被模擬產品的特點以及模擬介質的可過濾性、澄清度、滅菌方式等方面選擇模擬介質，以盡可能模擬無菌生產全過程。不應選擇明顯具有抑菌性的模擬介質，以確保模擬試驗結果的可信度。通常可采用的模擬介質包括：促進微生物生長的培養(yǎng)基和安慰劑。6.3.2 培養(yǎng)基的選擇6.3.2.1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對無菌工藝環(huán)境中源自人體的細菌、芽孢和真菌有良好的促生長效果，是無菌工藝模擬試驗常用的培養(yǎng)基。6.3.2.2 如果產品需充入惰性氣體、儲存在無氧條件，無菌操作在嚴格的厭氧環(huán)境中進行

12、時（即氧氣濃度低于0.1%），應考慮采用厭氧培養(yǎng)基，如硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM），也可選擇其他適宜的培養(yǎng)基。在厭氧的無菌工藝環(huán)境監(jiān)控中反復發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產品無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生物時，應考慮增加厭氧培養(yǎng)基開展模擬試驗。6.3.2.3 用于模擬抑菌性產品的培養(yǎng)基，如有必要需評估抑菌性產品殘存對其促生長能力及模擬試驗結果的影響。6.3.2.4 包含動物來源成分的培養(yǎng)基，應考慮培養(yǎng)基引入外源污染的風險。如BSE（可傳染性海綿腦病）、TSE（瘋牛?。┑蕊L險，亦可選用植物來源的培養(yǎng)基。6.3.3 培養(yǎng)基的配制6.3.3.1 模擬試驗的培養(yǎng)基應在適宜區(qū)域進行準備，需注意培養(yǎng)基粉塵在環(huán)境中的擴散、殘

13、留及去除，防止其殘存于環(huán)境及設備表面而造成微生物滋生。通常按照藥典要求或廠商提供的配制方法配制培養(yǎng)基。配制后的培養(yǎng)基應盡快滅菌或除菌過濾。6.3.3.2 培養(yǎng)基在模擬試驗前應恢復至室溫，即用型無菌液體培養(yǎng)基儲存和使用條件應遵循生產商要求。6.3.4 培養(yǎng)基的除菌與滅菌6.3.4.1 除菌過濾由于培養(yǎng)基的特性與藥液有差異，培養(yǎng)基除菌過濾的濾器型號可與產品使用的過濾器不同。如因培養(yǎng)基顆粒或生物負載較大等原因引起除菌過濾器堵塞時，可增加預過濾。應考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細菌和霉菌生長的風險，以避免微生物生長導致培養(yǎng)基過濾性能的降低。此外除菌過濾的方式無法避免支原體污染，濕熱滅菌或輻照滅菌有助于降低該潛

14、在風險，必要時可配合除菌過濾聯(lián)合使用。針對以上情況應進行風險評估并采取合理應對措施。6.3.4.2 濕熱滅菌在濕熱滅菌過程中應考慮避免受熱不均勻或滅菌不充分現(xiàn)象。應對該滅菌方式進行風險評估和驗證，也可使用無菌干粉或液體成品培養(yǎng)基。滅菌過程應遵循生產商推薦的滅菌時間和溫度的建議，并對滅菌過程予以驗證。確保滅菌后培養(yǎng)基的促生長能力，避免過長時間及過熱滅菌使培養(yǎng)基碳化造成其促生長性能的降低，應進行促生長能力試驗。6.3.4.3 輻照滅菌使用輻照滅菌的培養(yǎng)基粉末，應在適宜環(huán)境下進行配制等操作。輻照滅菌過程應經過驗證，并在產品質量報告中體現(xiàn)驗證所用的菌種和劑量等信息。6.3.5 培養(yǎng)基促生長能力試驗6.

15、3.5.1 應在無菌工藝模擬試驗前及14天培養(yǎng)后按照現(xiàn)行中國藥典方法對培養(yǎng)基進行促生長能力試驗。6.3.5.2 按照中國藥典要求，培養(yǎng)基促生長能力試驗使用的菌種包括：白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）等。除標準菌株之外，還可考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長試驗接種量應小于100CFU。按照中國藥典要求進行培養(yǎng)，證明培養(yǎng)基能夠支持微生物的生長。6.3.6 其他模擬介質的選擇及評價6.3.6.1 其他模擬介質的選擇

16、對于無菌粉末及特殊產品，可根據(jù)產品特性、無菌工藝、生產設備及模擬介質特點，也可選用其他模擬介質，如安慰劑。模擬介質的流動性應盡可能類似于被模擬產品，易于灌裝/分裝等無菌操作。模擬介質還應具有易于滅菌，無抑菌性，易溶解等特性。常用模擬介質有聚乙二醇、乳糖、甘露醇、氯化鈉、凡士林等。模擬介質的滅菌過程應經驗證并提供相關報告，其內容包括滅菌方式對模擬介質特性有無不良影響，滅菌后的無菌性。模擬介質的包裝形式應與被模擬產品的包裝形式保持一致。6.3.6.2 其他模擬介質的評價在使用模擬介質前應對其適用性進行確認，包括抑菌試驗、溶解度試驗等，如選用無菌模擬介質還應進行無菌試驗。抑菌試驗通常使用枯草芽孢桿菌

17、（CMCC63501）和白色念珠菌（CMCC98001）。除此之外，還應考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。無菌模擬介質用無菌水分散后，加入到無菌培養(yǎng)基中，達到模擬工藝選用的濃度范圍，然后每份培養(yǎng)基中接種10100CFU。陽性對照接種到不含無菌模擬介質的試管中，按照現(xiàn)行中國藥典要求培養(yǎng)7天，所有試管應明顯微生物生長。6.4 模擬灌裝的數(shù)量和持續(xù)時間6.4.1 無菌工藝模擬灌裝的數(shù)量應足以保證評價的有效性及完成模擬方案中設計的各種干預活動，通常模擬灌裝的數(shù)量不宜低于正常生產分裝數(shù)量。6.4.2 應對所設計的模擬方式、持續(xù)時間、灌裝的數(shù)量、預期收率作出合理說明。6.4.3 模擬試驗所用模擬介

18、質的量，應能夠覆蓋無菌工藝設備的全部內表面，特別是混粉過程，應確保模擬介質覆蓋混粉器內壁全部表面。6.4.4 考慮到模擬最差條件的需要，模擬關鍵無菌操作過程的維持時間不應低于實際生產用時。6.5 容器裝量容器中培養(yǎng)基灌裝量應考慮適宜微生物生長的需要和容器內表面覆蓋的要求，灌裝量不必與產品相同。適宜的裝量既可保證產品通過倒置和旋轉接觸到容器所有內表面，又有足夠的氧氣支持微生物的生長。6.6 模擬試驗方法的選擇通常無菌原料藥生產工藝由多個工藝單元構成。模擬試驗方案的設計應考慮試驗過程可連續(xù)性問題，并確定采用連續(xù)工藝模擬還是分段模擬。6.6.1 連續(xù)工藝模擬方式6.6.1.1 這種模擬方式是將整個無

19、菌過程視為一個整體，模擬介質不間斷地完成各個單元操作，并在最終分裝容器內進行無菌培養(yǎng)和判定，以評價生產過程的無菌保障水平。6.6.1.2 連續(xù)工藝模擬方式的選擇，取決于模擬介質在模擬過程中的適用性，如噴霧干燥工藝可采用液體模擬介質，通過模擬噴霧干燥過程，可將液體模擬介質轉化為固體模擬介質，進而實現(xiàn)分裝、密封等過程的模擬。6.6.1.3 連續(xù)工藝模擬可以真實反映整體無菌保障水平。但也有其不足之處，如發(fā)現(xiàn)污染，調查污染源的難度較大。6.6.2 分段模擬方式6.6.2.1 分段模擬方式是將無菌生產過程按照工藝單元分割成若干段，逐段進行模擬試驗，分段數(shù)量取決于工藝過程和模擬介質。模擬試驗最終的結果是各

20、段獨立模擬試驗結果的累積，對一些無菌工藝而言，如結晶工藝，可根據(jù)需要變換采用液體或固體模擬介質，保持與實際工藝過程的一致性。6.6.2.2 分段工藝模擬的優(yōu)點是可以特定評價某一單元操作的無菌風險，如發(fā)現(xiàn)微生物污染，相對于連續(xù)工藝模擬更易于發(fā)現(xiàn)污染源，進而采取針對性糾正措施。6.6.2.3 分段模擬方式也有不足之處，如：需要更多種類或數(shù)量的模擬介質；模擬介質需要多次無菌化處理，增加潛在污染風險；需要采集更多的物料、環(huán)境和人員監(jiān)測樣本進行評價。6.7 最差條件的選擇最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產狀況和環(huán)境。為了確認無菌工藝風險控制的有效性，應通過風險評估并結合無菌生產工藝、設備裝備水

21、平、人員數(shù)量和干預等因素來設計模擬試驗的最差條件。包括但不限于以下方面：6.7.1 人員應充分考慮人員及其活動對無菌生產工藝帶來的風險，如模擬生產過程的最多人數(shù)，當操作人員數(shù)量減少可能導致其他方面污染風險增加時，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應包括日常參與到無菌生產的全部人員，如生產操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設備設施維護人員，同時應考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。6.7.2 時限應適當考慮模擬實際生產操作過程中房間、設備、物料消毒或滅菌后放置的最長時間及最長的工藝保留時限等，如：混粉或分裝前的等待時限。6.7.3 分裝速度模擬試驗應涵蓋產品實際灌裝速度范圍，基于無

22、菌風險的角度分析評價灌裝速度對工藝過程及其他方面的影響程度。如模擬最長的暴露時間或模擬最大操作強度/難度。6.7.4 環(huán)境6.7.4.1模擬試驗挑戰(zhàn)的最差環(huán)境，應考慮選擇無菌生產周期的末端，或連續(xù)生產期間，環(huán)境消毒周期性內最長的時間間隔。6.7.4.2 日常生產中，針對微生物污染事件而制定了糾正措施。在模擬試驗時，應對糾正措施的有效性給予確認。6.8 干預設計6.8.1 概念干預是指由操作人員按照相關規(guī)定參與無菌工藝生產有關的所有操作活動。干預可分為固有干預和糾正性干預。固有干預是指常規(guī)和有計劃的無菌操作，如環(huán)境監(jiān)控、設備安裝或容器更換等；糾正性干預是指對無菌生產過程的糾正或調整，如更換部件、

23、設備故障排除等。6.8.2 原則無菌生產過程各種允許的干預活動應該文件化，明確規(guī)定正常生產活動和干預活動，模擬試驗中干預設計應與實際的生產活動保持一致，模擬試驗不應挑戰(zhàn)不合理的干預，以證明其合理性。在模擬試驗方案中應制定干預清單和實施計劃，模擬試驗時逐一實施并記錄。6.8.3 干預類型及頻次6.8.3.1 模擬試驗方案中應明確規(guī)定固有干預和糾正性干預（如維修、故障停機、設備調試）的類型、頻次。6.8.3.2 固有干預及經常發(fā)生的糾正性干預應在每次模擬中都實施，偶發(fā)性的干預可周期性的模擬。如無菌生產過程意外暫?；蛑貑?、無菌狀態(tài)下設備、設施偶發(fā)故障排除等。6.8.3.3 模擬試驗應設計并實施足夠多

24、的糾正性干預。干預頻次的設計應考慮生產過程按比例覆蓋模擬試驗的全過程。6.8.3.4 對于無菌取樣過程，應考慮分布在分裝的前、中、后階段，調整裝量、取樣、重復密封過程均應考慮模擬，并為生產過程中處理該類問題提供參考。6.8.4 人員實施干預的人員（應包括操作、維修人員等）應經過相關的培訓和考核，能夠按規(guī)定的程序實施各種干預。標準化的固有干預可由部分操作人員實施并據(jù)此評價其他人。對于復雜操作，如分裝機裝配或故障排除等，每個從事此類操作的人員都應在試驗過程進行模擬，操作條件不應優(yōu)于日常生產的操作條件。6.8.5 干預后產品（容器）的處理實際工藝中如明確規(guī)定受干預影響的產品（容器）應從生產線上剔除，

25、在模擬試驗時也可剔除，模擬試驗時產生的這類產品（容器）可不培養(yǎng)。無需培養(yǎng)的培養(yǎng)基應予以記錄并評估其合理性。如在干預發(fā)生前已經密封，但在日常生產中按規(guī)定不需要剔除的產品，模擬試驗時也應保留、培養(yǎng)并納入評估。6.8.6 記錄模擬試驗過程中的所有干預必須記錄，用以評估干預對無菌保證的影響。糾正性干預記錄的內容至少應包括糾正性干預的類型、位置、次數(shù)；固有干預記錄至少包括干預內容和發(fā)生頻率等信息。6.9 容器規(guī)格對于生產線存在多種相似的容器規(guī)格（如：同一品種的不同容器規(guī)格）時，應通過風險評估選擇模擬的容器規(guī)格，通常選擇最小和最大尺寸的容器進行模擬。特殊規(guī)格的容器應考慮單獨進行模擬。6.10 培養(yǎng)與觀察6

26、.10.1 模擬介質的處理無菌工藝模擬試驗結束后，應對所使用的模擬介質（培養(yǎng)基、安慰劑）進行全部處理和培養(yǎng)。非培養(yǎng)基模擬介質可通過適當?shù)臒o菌過濾器系統(tǒng)將微生物轉移至濾膜或其他便于培養(yǎng)、觀察的介質上，之后濾膜或其他介質浸入培養(yǎng)基內進行培養(yǎng)；也可在最終包裝容器內加注無菌培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。培養(yǎng)基的濃度應能支持潛在微生物的生長，如：TSB一般濃度控制在3%水平。6.10.2 培養(yǎng)條件6.10.2.1 應對容器翻轉、倒置等，確保培養(yǎng)基接觸容器（包括密封件）的所有內表面。培養(yǎng)時間至少14天?？蛇x擇兩個溫度進行培養(yǎng)：在2025培養(yǎng)至少7天，然后在3035培養(yǎng)至少7天。如選擇其他培養(yǎng)計劃，應有試驗數(shù)據(jù)支持所選培

27、養(yǎng)條件的適用性。在整個培養(yǎng)期間應連續(xù)監(jiān)控培養(yǎng)溫度。6.10.2.2 如實際生產過程中，分裝容器內需要填充惰性氣體，在模擬試驗過程應考慮用無菌空氣替代，避免影響微生物生長。6.10.2.3 如必須采用惰性氣體用于模擬厭氧無菌工藝（氧氣濃度低于0.1%）及培養(yǎng)厭氧微生物，應確認惰性氣體與所選培養(yǎng)基的組合，能夠支持微生物的生長。6.10.3 培養(yǎng)后的檢查6.10.3.1 培養(yǎng)結束后，應對所有模擬灌裝產品逐一進行無菌性檢查，通常應在合適的照度下進行目視觀察。6.10.3.2 在培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)異常情況時應進行進一步調查。如在檢查中發(fā)現(xiàn)密封缺陷的灌裝產品，應進行適當?shù)脑?/p>

28、因調查并采取糾正措施。6.10.3.3 培養(yǎng)容器不透明時，應考慮將轉移至透明容器觀察，以確保有陽性時能被觀察到。6.11 計數(shù)與數(shù)量平衡為保證模擬試驗結果的可靠性，應對各階段灌裝數(shù)量進行準確計數(shù)，如灌裝數(shù)量、干預剔除數(shù)量、培養(yǎng)前數(shù)量和培養(yǎng)后無菌檢查數(shù)量，各階段數(shù)量應平衡。如發(fā)現(xiàn)不平衡，應調查原因并判斷本次模擬試驗結果的有效性。6.12 環(huán)境及監(jiān)控6.12.1 環(huán)境監(jiān)控方案設計應通過風險評估確定日常生產環(huán)境監(jiān)控的各要素，如取樣點、取樣對象、取樣頻率、警戒和糾偏標準、實施方法等。模擬試驗時應采用與日常生產相同的環(huán)境監(jiān)控方案為基礎，模擬生產狀況，包括采樣儀器、耗材的轉移、消毒等，任何異于日常環(huán)境監(jiān)控

29、的情況都應有說明和記錄。與實際生產過程相比，模擬試驗中的環(huán)境監(jiān)控應考慮增加額外的監(jiān)測環(huán)節(jié)，如人員監(jiān)測。6.12.2 環(huán)境監(jiān)控數(shù)據(jù)處理6.12.2.1 環(huán)境（包括人員）監(jiān)控的數(shù)據(jù)結果用于評估模擬生產過程中的環(huán)境條件是否適宜于生產。當模擬試驗出現(xiàn)陽性結果時，環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)可用于進行根本原因的調查。6.12.2.2 模擬試驗時發(fā)生的環(huán)境偏差并不是模擬試驗成功的否決條件，是否通過試驗取決于調查的結果。環(huán)境監(jiān)測結果異常時，即使試驗結果成功，也應進行必要的調查和糾正。即使最終決定在環(huán)境監(jiān)控結果超出糾偏標準時無菌工藝模擬試驗依然通過，也不意味著日常生產可以在同等環(huán)境偏差的條件下進行。6.13 人員因素所有被授

30、權進行無菌操作的人員，包括生產操作人員、監(jiān)督人員和維修人員等，每年至少參與一次成功的無菌工藝模擬試驗。7. 可接受標準與結果評價無菌工藝模擬試驗可接受標準應當遵循現(xiàn)行GMP無菌藥品附錄中的有關規(guī)定。7.1 應采用定性標準判定模擬試驗結果，定性標準意味著模擬試驗只接受零污染的結果，排除了定量標準中識別微生物污染來源的困惑和潛在不確定性風險。7.2 應通過評估確定模擬介質的預期收率，并作為模擬試驗結果可接受標準之一。8. 污染調查與糾正措施= 8 * Arabic8.1 無菌工藝模擬試驗存在污染，即意味著無菌保證可能存在問題，出現(xiàn)的任何污染樣品均應視為偏差并徹底調查，并為改進無菌工藝提供數(shù)據(jù)支持。

31、= 8 * Arabic8.2 可通過查看無菌工藝模擬試驗的錄像或現(xiàn)場記錄，還原模擬試驗過程中人員操作行為、干預及設備運行等狀況，有利于分析問題的來源。對無菌工藝模擬試驗實施過程相關的所有記錄進行詳細調查，并關注各種偏差、驗證、變更等，所有偏離原始驗證狀態(tài)情況均應逐一評估并說明。檢查所有相關人員的培訓和資質確認記錄。8.3 建議對模擬試驗中發(fā)現(xiàn)的微生物進行鑒別，以便開展污染途徑的調查，并列入企業(yè)微生物菌種庫。8.4 調查的關鍵是查找污染來源，結合調查需要，應制定一個完整的取樣和微生物鑒別計劃，調查過程應有記錄并歸檔。調查結果應形成書面報告并得到質量管理部門的批準。8.5 如調查找到指定的原因，

32、應制定糾正預防措施，并再次進行模擬試驗，以證明措施的有效性。如調查無指定原因，應對生產工藝過程的無菌控制開展系統(tǒng)性評估，在現(xiàn)有模擬試驗方案的基礎上增加取樣點和頻次，以獲得更多數(shù)據(jù)支持原因調查，同時應適當增加試驗批次。9. 模擬試驗的周期與再驗證9.1 新建無菌生產線，在正式投產前，每班次應當連續(xù)進行3次合格的模擬試驗。9.2 正常生產中，每班次每半年應至少進行一次模擬試驗。對于因停產的生產線，在恢復正式生產前應考慮進行無菌工藝模擬試驗。9.3 空氣凈化系統(tǒng)、無菌生產用設備設施、無菌工藝及人員重大變更或設備的重大維修后，應進行風險評估確認再模擬試驗批次。9.4 應充分評估生產線的風險，在發(fā)現(xiàn)設施、人員、環(huán)境或工藝的持續(xù)監(jiān)測出現(xiàn)不良趨勢或無菌不合格時，也應考慮再次進行模擬試驗。10. 無菌工藝模擬試驗的局限性無菌工藝模擬試驗雖然基于無菌風險而開展的，但考慮到每次無菌操作過程的唯一性，成功的無菌工藝模擬試驗是允許正式生產的必要條件，但應注意其局限性。10.1 以現(xiàn)行藥品GMP法規(guī)要求為準則，評價無菌生產過程的法規(guī)符合性，低于