男科學實驗室診斷進展

1、關于男科學實驗室診斷進展第一張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月精液分析是評價男性生育能力的最基本檢驗手段。理論上，精液分析是一個很簡單的操作過程，只要將一滴精液置于玻片上，進而確定其相關參數(shù)即可。然而，實際上，精液分析所得的每一個參數(shù)都需要大量的專業(yè)知識、細致認真的操作及必要的質量控制措施。第二張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月Keel等報告了美國紐約、哥倫比亞、洛山磯、明尼蘇達幾百家男科實驗室對精子密度、形態(tài)學、活率及抗精子抗體的室間質量控制結果，精子密度的結果顯示，一份精液標本的精子密度差異范圍達3 492106 /ml，手工檢測的變異系數(shù)（CV）為30% 138%，計算機

2、輔助的精液分析（CASA）的CV為24% 99%。不同實驗室精子密度的較大差異提示，精子計數(shù)方法的不同、計數(shù)池種類的不同以及操作的標準化對精子計數(shù)結果有著直接的影響。第三張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、精液常規(guī)檢查 1、精液檢測工具不斷更新 （1）血細胞計數(shù)板 沿用50余年 （2）Makler精子計數(shù)板 1978年以色列Makler發(fā)明 （3）Macro精子計數(shù)板 （4）Microcell計數(shù)池 1990年 Ginabury和Armand發(fā)明 一次性使用 （5）2004年，美國Millennium Sciences公司Cell-VU精子記數(shù)池和Cell-VU預染色形態(tài)載波片。 第

3、四張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月計算機輔助的精液分析 80年代發(fā)展的新技術， 除可分析精子密度、活動百分率等指標外，在分析精子運動能力方面顯示了其獨特的優(yōu)越性。第五張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第六張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第八張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第九張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第十張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第十一張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第十二張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月全自動精子分析儀（以色列）Medical Electro

4、nic Systems第十三張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月用已知濃度的乳膠珠溶液對目前國際上常用的種精子計數(shù)池進行了評價。 種精子計數(shù)池的質量評估第十四張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月1 材料與方法1.1 實驗材料 Cell-VU計數(shù)池（Millennium Sciences Inc， New York， USA）Makler計數(shù)池（Sefi-Medical Instrument， Haifa， Israel）血球計數(shù)池（上海求精生化試劑儀器有限公司）標準乳膠珠溶液（Hamilton Thorne Biosciences， USA）2份，濃度分別為：（355）106 /m

5、l，（182.5）106 /ml。第十五張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月1. 方法1.2.1 Cell-VU計數(shù)法1.2.2 Makler計數(shù)法 1.2.3 血球計數(shù)池法 1. 統(tǒng)計學分析 不同計數(shù)池的計數(shù)結果以xs表示，樣本均數(shù)的比較采用t檢驗 第十六張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月2 結果ChambernConcentration forstandard solution 1Concentration forstandard solution 2Cell-VU3037.634.8918.221.77Hemacytometer3042.744.98*20.481.56*M

6、akler1553.526.67*24.974.75*表1 不同精子計數(shù)池的乳膠珠濃度與Cell-VU計數(shù)池相比，*：P0.001；與血球計數(shù)池相比，：P1106/ml，可診斷為白細胞精子癥 白細胞可通過吞噬作用、產(chǎn)生活性氧（ROS）、分泌一些細胞因子等途徑使精子損傷。精液中粒細胞為產(chǎn)生ROS的主要細胞。 第二十五張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月精液中白細胞的檢測方法；1、對ROS的檢測：依賴魯米諾的化學發(fā)光分析法2、直接鏡檢法 3、瑞-姬染色或巴氏染色法染色 4、過氧化物酶染色法（正甲苯胺蘭、聯(lián)苯胺及鄰甲苯胺過氧化物酶染色）5、熒光原位雜交法 6、免疫細胞化學法 CD45，CD4，

7、CD87、彈性蛋白酶、IL-8及溶菌酶測定 第二十六張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月四、免疫性不育的檢測 檢測方法很多，3種類別的抗精子抗體均可測，檢測的抗精子抗體為總的或各種類別的抗精子膜抗原的抗體，而精子膜與人體其他器官組織的細胞膜有許多共同抗原，因而這種抗原抗體反應的特異性不高。如果用針對精子或睪丸特異性抗原，或針對與透明帶識別和結合有關的抗原作為包被抗原來檢測AsAb，其臨床意義就會很大。 Naz等用現(xiàn)代分子生物學技術確定，受精抗原FA-1和YLP（12）具有此特性，并且它們的抗體存在于不育男性的精漿和血清中建立這種特異性診斷方法是今后取代總AsAb檢測的唯一途徑。 第二十七

8、張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月五、生殖道感染的檢測 大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、綠膿桿菌、淋球菌、肺炎克雷伯氏菌、結核桿菌、衣原體、支原體、單純皰疹病毒、人乳頭瘤病毒、腺相關病毒、陰道毛滴蟲等皆可感染生殖道，而且可致不育。 各種細菌感染，往往通過菌體本身及其釋放出的毒素、酶類等影響精子質量 病毒的感染更為隱蔽臨床實驗室多用ELISA法檢測各種病毒的抗體，通過抗體的分型可粗略判斷病毒的感染時期 第二十八張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月衣原體和支原體感染被認為是最常見的性傳播疾?。⊿TD）病原與男性不育密切相關的衣原體為沙眼衣原體（CT），其可引起急性附睪炎和慢性前列腺炎等。

9、目前，檢測沙眼衣原體感染的方法主要有金標法、ELISA法及培養(yǎng)法，尤以ELISA法最為常用與男性不育密切相關的支原體為解脲支原體臨床實驗室多采用培養(yǎng)法檢測。 第二十九張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月六、精漿生化的檢測 精漿中的一些生化標志可反映男性附屬性腺、附睪及睪丸生精功能等，有利于綜合評價不育的發(fā)病原因和機制。 例如，檸檬酸、鋅、鎂、谷氨酰轉肽酶和酸性磷酸酶可反映前列腺功能，其中的酸性磷酸酶檢測已成為男科實驗室的常規(guī)檢查，常用磷酸苯二鈉法； 果糖與前列腺素可反映精囊腺功能，常用間苯二酚法檢測果糖； 游離左旋肉毒堿、甘油磷酸膽堿和-葡糖苷酶可反映附睪功能。 第三十張，PPT共五十二

10、頁，創(chuàng)作于2022年6月精漿總-葡糖苷酶檢測中應注意3點離心速度不同，精漿總-葡糖苷酶活性有所差異 精漿總-葡糖苷酶活性與禁欲時間的長短密切相關 精漿總-葡糖苷酶活性的檢測應進行質量控制 第三十一張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月不同速度離心后的精漿中葡糖苷酶水平第三十二張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月禁欲時間對精漿葡糖苷酶的影響Abstinence time (day)nAlpha-glucosidase (U/ml)Seminal plasma (1 000 g for 10 min) Seminal plasma (3 000 g for 15 min)2 31236.

11、4712.2434.0411.224 51649.6216.86*47.7317.37*6 71451.1419.76*46.7617.70* 8968.7014.10*#63.8613.63*#第三十三張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月精漿果糖檢測中應注意4點：果糖標準液配制后應放置2周后使用，而使用2周 后出現(xiàn)吸光度降低時應立即更換新的果糖標準液 離心速度不同精漿果糖濃度稍有差異精液液化后應立即離心將精子和精漿分離，否則會影響精漿果糖檢測結果 精漿果糖測定中應引入質量控制體系第三十四張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月果糖標準液吸光度的監(jiān)測第三十五張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于

12、2022年6月精液 放置時間對果糖濃度的影響 GroupnFructose (mmol/L)0 h4815.736.562 h4815.076.56a4 h4814.736.51b,c第三十六張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月精漿稀釋后放置時間對酸性磷酸酶活性的影響 隨機選取10例精漿，110 000稀釋后立即檢測ACP活性或稀釋后放置30 min再次檢測ACP活性，兩者比較有極顯著性差異（t 3.770，P 0.001）。第三十七張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 抑制素B被認為是男性精子發(fā)生的血清標志物。 成年男性血清中維持可檢測的抑制素B水平需要生精細胞的存在，唯支持細胞

13、綜合征（SCO）男性血清抑制素B水平極低。 Brugo-Olmedo等認為血清抑制素B在預言非阻塞性無精子癥病人的睪丸精子存在時比血清FSH更準確。 除此之外，抑制素B還可用于兒童隱睪、性早熟的診斷，監(jiān)測放、化療對男性生精功能的損傷等。 目前，抑制素B的檢測通常使用雙抗體夾心ELISA法。 第三十八張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月七、精漿細胞因子的檢測 精漿細胞因子由男性泌尿生殖道內的各種細胞分泌，包括轉化生長因子（TGF）、表皮生長因子（EGF）、腫瘤壞死因子（TNF）、各種白細胞介素（IL）及某些可溶性受體等。目前認為，與男性不育有關的細胞因子主要有IL-6和IL-8，不育病人精

14、漿中IL-6和IL-8水平明顯高于生育力正常的男性。 測定IL-6和IL-8的方法有：生物學方法、分子生物學方法和免疫學方法，以免疫學方法多用，尤以ELISA和RIA常用。 第三十九張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 八、精子發(fā)生相關基因的檢測 與精子發(fā)生相關的基因很多，無精子病人的基因缺失均發(fā)生于Y染色體的長臂,主要位于Yq11.23中，而且并非是單一基因，可能含有整個基因大家族。 1996年，Vogt等人在更大范圍對無精子、少精子病人進行了研究，認為在3個區(qū)域均存在AZF，分別為AZFa，AZFb，AZFc，對這些病人睪丸活檢發(fā)現(xiàn)，睪丸的病理改變與AZF的缺失部位有顯著相關性。 A

15、ZFa：Sy84,Sy86 AZFb：Sy124，Sy127，Sy132,Sy134 AZFc：Sy152，Sy157，Sy239，Sy242，Sy254，Sy255 第四十張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月AZF檢測： SRY存在于基因組中，Yq上的AZFa,b,c 區(qū)域的位點全部丟失 病人 正常男性 正常女性 空白對照第四十一張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月九、遺傳學檢測 男性不育的遺傳學檢測主要是檢測精子染色體的異常。 常規(guī)使用染色體顯帶技術，如G帶、Q帶等技術，然而其敏感度不及FISH技術 FISH技術可用于研究復雜染色體突變如性染色體異常、未知的小標志物、環(huán)狀染色體

16、、嵌合體及易位等 Y染色體長臂特異區(qū)的微缺失與不育相關 第四十二張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月病例：46，XX/46,XY異源嵌合體導致真兩性畸形腹腔鏡檢查發(fā)現(xiàn)：子宮正常大小，發(fā)育良好左右性腺均約432cm，中間均為黃色組織，兩端為白色組織。未見排卵痕跡。雙側輸卵管發(fā)育好，均有游離傘端術中探察陰道深度約7cm.腹股溝管內未見睪丸及其它男性性器官第四十三張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月卵睪和輸卵管 ，白色組織為睪丸組織，黃色為卵巢組織第四十四張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月核型分析：46，XX第四十五張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月核型分析：46，XY第四十六張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月外周血淋巴細胞:FISH（X / Y著絲粒探針）：有XX和XY 的細胞第四十七張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月皮膚成纖維細胞:FISH（X / Y著絲粒探針）：有XX和XY 的細胞第四十八張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月睪丸成纖維細胞FISH:（X / Y著絲粒探針）：有XX和XY 的細胞第四十九張，PPT共五十二頁，創(chuàng)作于2022年6月卵巢成纖維細胞:FISHX / Y著絲粒探針）：有XX