單向免疫擴散試驗

1、單向免疫擴散試驗第1頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二沉淀反應(yīng)（precipetaiton）是可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng)。1905 凝膠內(nèi)沉淀試驗 1946 試管免疫擴散技術(shù) 1965 單向免疫擴散技術(shù) 1967 散射比濁法第2頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二在瓊脂膠中混入一定量抗體，使待測的抗原溶液從局部向瓊脂內(nèi)自由擴散，在抗原抗體比例合適區(qū)域內(nèi)形成可見的沉淀環(huán)。(抗原抗體反應(yīng)時，只有其中一種成分發(fā)生擴散）根據(jù)試驗形式可分為試管法和平板法兩種。第3頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二第4頁，共12頁，2022年

2、，5月20日，2點16分，星期二測量沉淀環(huán)的直徑或計算環(huán)的面積。沉淀環(huán)直徑或面積的大小與抗原量相關(guān)，但不是直線相關(guān)，而是對數(shù)關(guān)系。同時，這種沉淀環(huán)與分子量和擴散時間有關(guān)。第5頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二試劑與器材1.羊抗人IgG診斷血清2.人IgG標(biāo)準(zhǔn)液（30g/L）3.待測人血清4.瓊脂粉5.生理鹽水6.載玻片(玻璃板）、三角燒瓶、吸管、加樣器、打孔器、水浴箱、濕盒、直尺等第6頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二操作方法1.制備瓊脂凝膠 （1）生理鹽水配制瓊脂凝膠（15g/L），煮沸溶化至澄清，置56水浴中備用。 （2）取適量溶化瓊脂，以瓊脂抗

3、體4 1比例吸取相應(yīng)抗體，與瓊脂充分混合，置56水浴中備用。第7頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二2.制板 （1）取潔凈干燥玻片，置于水平臺上 （2）用吸管吸取4ml瓊脂（含抗體），于載玻片1/3處澆注，使瓊脂凝膠均勻鋪滿玻片，不要留有氣泡。 3.打孔 待瓊脂凝固后，用直徑3mm的打孔器打孔，孔距1012mm第8頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二4.加樣 用微量加樣器吸取待檢血清10l,加入相應(yīng)的試驗孔中，做好標(biāo)記。 將人IgG標(biāo)準(zhǔn)液（30g/L）用生理鹽水分別做如下稀釋：原倍， 1:2， 1:5， 1:10， 1:20， 1:30，用微量加樣器吸取稀釋標(biāo)準(zhǔn)液10l,加入相應(yīng)的試驗孔中，做好標(biāo)記。 第9頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二5.擴散 將加樣的瓊脂凝膠板平放于濕盒內(nèi)，置3724h后觀察結(jié)果。 第10頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二結(jié)果判斷 精確測量各試驗孔沉淀環(huán)的直徑，以沉淀環(huán)直徑為橫坐標(biāo)，相應(yīng)孔中IgG含量的對數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(logC/d=K)第11頁，共12頁，2022年，5月20日，2點16分，星期二注意事項1.玻片須干燥、潔凈，邊緣無破損。置水平處。2.澆制瓊脂板時動作要勻速3.打孔時避免水平移動4.加樣時避免氣泡或加至孔外，加樣要準(zhǔn)確5.