醫(yī)學(xué)免疫學(xué)課件：實(shí)驗(yàn)二 流式細(xì)胞術(shù)

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)二 流式細(xì)胞術(shù) 流式細(xì)胞儀的檢測(cè)信號(hào)-散射光流式細(xì)胞儀的檢測(cè)信號(hào)-熒光信號(hào)常用熒光染料光譜重疊補(bǔ)償技術(shù)特點(diǎn)”“流式細(xì)胞儀的應(yīng)用細(xì)胞表面抗原分子的測(cè)定細(xì)胞凋亡檢測(cè)細(xì)胞因子測(cè)定（胞內(nèi)，胞外）在腫瘤學(xué)方面的應(yīng)用在血液學(xué)方面的應(yīng)用細(xì)胞分選步驟：（團(tuán)結(jié)友愛版）昆明小鼠拉頸處死，取出脾臟，放入PBS中，盡量去除筋膜，過篩網(wǎng):將脾臟放在篩網(wǎng)上，用玻璃針筒的針芯碾壓，注意要少碾多壓，這樣可以減少對(duì)細(xì)胞的損傷，用少量PBS沖洗，放入離心管中，終體積為5ml，3000轉(zhuǎn)/分,10分鐘。離心后棄上清。再次洗細(xì)胞1次。離心后棄上清，用細(xì)胞裂解液破紅細(xì)胞，一般每只小鼠的脾臟用3ml置于4冰箱中，20分鐘，

2、其間輕輕混勻2次。用PBS加到7ml,離心洗細(xì)胞2次。最后一次棄上清后，加入3mlBSA-PBS混勻，分裝在1mlEP管中，成為3份。將1mlEP管中的細(xì)胞分裝,體積為0.4ml，0.3ml，0.3ml，分別是空白管，陰性對(duì)照管和實(shí)驗(yàn)管。陰性對(duì)照管加入PE同型對(duì)照抗體2l，實(shí)驗(yàn)管加入PE-anti- CD19 2l，混勻4避光孵育45min。加入1mlBSA-PBS離心洗2次。最后一次用PBS洗3000轉(zhuǎn)，2分鐘。棄上清，加入固定液500l，篩網(wǎng)過濾，4避光存放。C6檢測(cè)。步驟昆明小鼠拉頸處死，取出脾臟，放入PBS中，盡量去除筋膜，平均分成3份。過篩網(wǎng):將脾臟1/3放在篩網(wǎng)上，用玻璃針筒的針芯

3、碾壓，注意要少碾多壓，這樣可以減少對(duì)細(xì)胞的損傷，用少量PBS沖洗，放入離心管中，終體積為1ml，3000轉(zhuǎn)/分,10分鐘。離心后棄上清。再次洗細(xì)胞1次。篩網(wǎng)用后立即清水清洗。晾干。離心后棄上清，用細(xì)胞裂解液破紅細(xì)胞，一般1/3小鼠的脾臟用1ml置于4冰箱中，20分鐘，其間輕輕混勻2次。加1ml BSA-PBS,離心洗細(xì)胞3次。混勻，離心，棄上清。加入100l BSA-PBS混勻，平均分成3管，每管約50l 細(xì)胞懸液?？瞻坠懿患尤魏卧噭幮詫?duì)照管加入PE同型對(duì)照抗體2l，實(shí)驗(yàn)管加入PE-anti- CD19 2l，混勻4避光孵育45min。加入1mlBSA-PBS離心洗2次。最后一次用PBS洗

4、3000轉(zhuǎn)，2分鐘。棄上清，加入PBS 500l，篩網(wǎng)過濾，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。”“所用試劑PE anti-mouse CD 19 BioLegend 115507PE Mouse IgG2a，Isotype Control BD555574紅細(xì)胞裂解液 Andy Bio P060017 ”“注意：熒光劑有毒，請(qǐng)?jiān)谑褂脽晒鈩r(shí)帶乳膠手套！熒光劑應(yīng)避光，否則易淬滅！自行分析流式結(jié)果，實(shí)驗(yàn)報(bào)告交付時(shí)間12月16日。關(guān)于流式細(xì)胞儀和實(shí)驗(yàn)報(bào)告電壓不需調(diào)節(jié)可調(diào)節(jié)軟件英文中英文都可1 打開儀器開關(guān)2 打開電腦開關(guān)3 打開流式分析軟件4 點(diǎn)擊細(xì)胞儀-開機(jī)流程（大約8分鐘）EP管加DDW5 點(diǎn)擊新建文件夾-選好圖形，散點(diǎn)，直方圖，直方圖調(diào)染色劑6 運(yùn)行，圈門。調(diào)電壓用帶字母G的小手圖標(biāo)調(diào)7 改門，用G圖標(biāo)