《環(huán)境工程微生物學(xué)》微生物培養(yǎng)基

1、二培養(yǎng)基學(xué)以致用養(yǎng)細(xì)菌 水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子等細(xì)菌及其它微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的合理配制物1.認(rèn)識(shí)化能自養(yǎng)菌氧化硫桿菌的培養(yǎng)基粉末狀硫 10g KH2PO4 4g MgSO4 0.5g CaCl2 0.5g (NH4)2SO4 0.4g FeSO4 0.01g 水 1000mL（自來(lái)水即可） 提問(wèn)：其中各組分作用是什么？空氣中的CO2能源磷源、緩沖物碳源是什么？氮源鹽也可補(bǔ)加一部分碳酸鈉。異養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基中至少有一種有機(jī)物，實(shí)驗(yàn)室中通常是葡萄糖 如一種大腸桿菌培養(yǎng)基葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g MgSO4 0.2g NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g 水 1000mL2.配

2、制 通常？加水3分類提問(wèn)：根據(jù)哪些特性可以給培養(yǎng)基分類？物理狀態(tài)、用途、組分組成(一)根據(jù)物理狀態(tài) 固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基1）液體培養(yǎng)基（“湯”）廢水也可看作是一種廣義的液體培養(yǎng)基2）固體培養(yǎng)基（“團(tuán)”）人工做法(與果凍方法一樣)向液體培養(yǎng)基中加入2左右的瓊脂，加熱至100溶解，40下冷卻并凝固。石花菜(紅藻）瓊脂瓊脂主要成份半乳聚糖，分子量大，呈網(wǎng)狀粘著力強(qiáng)，溶解分散（溫度為96以上）條狀瓊脂粉末瓊脂瓊脂特性A.不能被絕大多數(shù)微生物利用、分解液化；提問(wèn)：有什么好處？不作為額外碳源，干擾試驗(yàn)，保持固體特性B.高壓滅菌結(jié)構(gòu)不被破壞，且顏色透明不妨礙觀察；C.多數(shù)微生物在瓊脂培養(yǎng)基表

3、面生長(zhǎng)并形成獨(dú)立菌落；提問(wèn)：有何好處？易于純化分離3）半固體培養(yǎng)基（“膏”）半流動(dòng)性介于固體與液體之間提問(wèn)：如何制作？在液體培養(yǎng)基中加入0.5%或更低濃度的瓊脂作用：？半固體培養(yǎng)基中可以融入少量的溶解氧，因此這種培養(yǎng)基常被用于培養(yǎng)在較低氧濃度環(huán)境下才能最佳生長(zhǎng)的細(xì)菌。天然的固體培養(yǎng)基土豆塊、培養(yǎng)真菌的麩皮、大米、大麥等。（二）根據(jù)培養(yǎng)基組分天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。1）合成合成純化學(xué)試劑2）天然天然？純生物制品(細(xì)胞提取物)如，常用的細(xì)菌肉湯培養(yǎng)基牛肉膏 3g 蛋白胨 5g水 1000mL pH 7.27.4牛肉膏瘦牛肉經(jīng)過(guò)加熱濃縮抽提的膏狀物（主要作碳源）優(yōu)點(diǎn)穩(wěn)定、選擇性缺點(diǎn)很多

4、細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)需求較為復(fù)雜，配方獲取較難（二）根據(jù)培養(yǎng)基組分類似物如酵母膏、麥芽汁、土壤浸出液、牛奶、玉米粉優(yōu)點(diǎn)營(yíng)養(yǎng)豐富、配制容易缺點(diǎn)？質(zhì)量不穩(wěn)定、選擇性差；3）半合成半不純優(yōu)缺點(diǎn)介于前兩者之間，因而使用最廣。蛋白胨動(dòng)植物蛋白（大豆或動(dòng)物骨粉等）經(jīng)初步酶解形成的短肽（主要作氮源）酵母膏(三)根據(jù)培養(yǎng)基用途普通型、選擇型、鑒別型1）普通普適有兩種制備思路：？肉湯培養(yǎng)基牛肉膏 3g 蛋白胨 5g水 1000mL pH 7.27.42）選擇性培養(yǎng)基選擇性？待選的細(xì)菌能優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng) 投毒法（“正考試”）常用物質(zhì)為染料、膽汁酸鹽、金屬鹽類、酸、堿和抗生素。例如欲分離古細(xì)菌，培養(yǎng)基中通常加入青霉素（由于古細(xì)菌的細(xì)胞

5、壁不同于普通細(xì)菌，因而不會(huì)被對(duì)破壞普通細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的青霉素殺死），古細(xì)菌就唯一分離并存活下來(lái)。膽汁酸鹽抑制革蘭氏陽(yáng)性菌提問(wèn)：它能選擇性生長(zhǎng)那種細(xì)菌？革蘭氏陰性細(xì)菌毒選擇性的抑制劑待選細(xì)菌有抗性投其所好法（“邪挖墻角”）好營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境因子（1）專一性營(yíng)養(yǎng)源培養(yǎng)法待選細(xì)菌專門(mén)需要的某種碳源或氮源例如篩選纖維素分解菌選用纖維素作為培養(yǎng)基中的唯一碳源；各類降解石化廢水特殊有機(jī)物的細(xì)菌篩選通常是以這類有機(jī)物為培養(yǎng)基中的唯一碳源，將目的細(xì)菌富集篩選下來(lái)。（2）理化因素控制法理化因素特殊的溫度、氧氣、pH、鹽度等環(huán)境條件主要用于篩選極端環(huán)境微生物。如嗜鹽、嗜熱、嗜冷、嗜酸、嗜堿等的細(xì)菌，同時(shí)也被用于選擇性培

6、養(yǎng)好氧或厭氧細(xì)菌。嗜冷菌嗜熱菌3）鑒別培養(yǎng)基鑒別明查分別（細(xì)菌種類）提供培養(yǎng)環(huán)境外還同時(shí)具有類似于“驗(yàn)鈔機(jī)”的作用 方法？鑒加入指示劑（“紫光燈”）別不同菌落制造不同的代謝物（“有無(wú)熒光粉”），顯色不一3）鑒別培養(yǎng)基舉例水處理中常用的遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基就是典型大腸菌群內(nèi)不同種屬細(xì)菌的鑒別培養(yǎng)基。都能生長(zhǎng)，但對(duì)乳糖的分解能力不同大腸埃希氏菌強(qiáng)，菌落紫紅色帶金屬光澤枸櫞酸鹽桿菌次之，菌落呈紫紅或深紅色產(chǎn)氣桿菌第三，菌落呈淡紅色副大腸桿菌不能分解乳糖，菌落無(wú)色透明4）富集培養(yǎng)基（加富）加富營(yíng)養(yǎng)特別豐富針對(duì)細(xì)菌數(shù)量少，或?qū)I(yíng)養(yǎng)要求苛刻培養(yǎng)不易的細(xì)菌 方法？植物提取液、動(dòng)物組織提取液、土壤浸出液、血和血清等。

7、三、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和運(yùn)輸細(xì)胞膜的選擇吸收 分四種情況水、無(wú)機(jī)鹽、氣體、甘油等小分子1被動(dòng)擴(kuò)散?推動(dòng)力?推動(dòng)力濃度梯度無(wú)載體蛋白不 內(nèi)部能量消耗YorN?乞討 2促進(jìn)擴(kuò)散促進(jìn)載體蛋白協(xié)助 載體蛋白 細(xì)胞外 | 細(xì)胞膜 | 細(xì)胞內(nèi)糖、氨基酸、金屬離子等?推動(dòng)力濃度梯度有載體蛋白不 內(nèi)部能量消耗YorN?推動(dòng)力?拉贊助3主動(dòng)運(yùn)輸運(yùn)輸載體蛋白主動(dòng)逆濃度梯度方向糖、氨基酸、有機(jī)酸 Na+、K+、硫酸根、磷酸根等?推動(dòng)力ATP放能有載體蛋白消耗 內(nèi)部能量消耗YorN?推動(dòng)力?搶劫細(xì)胞膜細(xì)胞外細(xì)胞內(nèi)酶1磷酸烯醇式丙酮酸酶2熱穩(wěn)定蛋白丙酮酸葡萄糖高能磷酸促進(jìn)擴(kuò)散 高能磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移磷酸化自由能升高，能量級(jí)別、位置的升高。轉(zhuǎn)位磷酸葡萄糖4.基團(tuán)轉(zhuǎn)位基團(tuán)被轉(zhuǎn)運(yùn)的營(yíng)養(yǎng)物轉(zhuǎn)位？洗錢提問(wèn)：磷酸化的益處？（一）活化參與代謝;（二）防止?fàn)I養(yǎng)物從細(xì)胞內(nèi)流失（細(xì)胞質(zhì)膜對(duì)大多數(shù)磷酸化的化合物有高度不滲透性）；（三）保持營(yíng)養(yǎng)物在細(xì)胞內(nèi)的低