益氣活血復(fù)方逆轉(zhuǎn)自發(fā)性高血壓大鼠左室肥厚的實(shí)驗(yàn)研究

1、益氣活血復(fù)方逆轉(zhuǎn)自發(fā)性高血壓大鼠左室肥厚的實(shí)驗(yàn)研究【關(guān)鍵詞】益氣活血復(fù)方；,左室肥厚；,醛固酮；,血管緊張素；,高血壓摘要：目的觀察益氣活血復(fù)方對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)左室肥厚的影響，并討論其作用機(jī)制。方法14周齡雄性SHR40只，隨機(jī)分為5組，即SHR空白對(duì)照組、硝苯地平治療組及益氣活血復(fù)方高、中、低劑量組。治療8周后，測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)，心臟重量指數(shù)(HI)，左心室肥厚指數(shù)(LVI)，采用HE染色、VG染色觀察心肌細(xì)胞及間質(zhì)膠原的變化，放免法測(cè)定循環(huán)血及心臟部分醛固酮(ALD)、血管緊張素(Ang)的濃度。結(jié)果經(jīng)益氣活血復(fù)方治療8周后，SHR血壓下降，左室肥厚明顯消退，間質(zhì)

2、膠原的含量減少。益氣活血復(fù)方不僅可以抑制循環(huán)腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的活性，同時(shí)也能明顯抑制心臟部分RAAS的活性。結(jié)論益氣活血復(fù)方具有逆轉(zhuǎn)高血壓左室肥厚的作用，各劑量組呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，其療效優(yōu)于硝苯地平。其作用機(jī)制可能與降低血壓和抑制RAAS活性有關(guān)。關(guān)鍵詞：益氣活血復(fù)方；左室肥厚；醛固酮；血管緊張素；高血壓ExperientalStudyfEffetfYiqihuxueReipenReverseLeftVentriularfSpntaneuslyHypertensiveRatsAbstrat：bjetiveTheresearhastinvestigatetheeffetsf

3、Yiqihuxuereipenleftventriularinspntaneuslyhypertensiverats(SHRs)anditsehanis.ethds14eekldSHRsereassignedrandlyint5grups:thentrlgrups,thegrupstreatedithnifedipine,thetherthreegrupstreatedithdifferentdsesfYiqiHuxuereipe.After8eektreatents,systlibldpressure(SBP),heartEightindex(HI),leftventriularassind

4、ex(LVI).ereeasuredsetinsfhearttissueasstainedithVanGiesnethd.Thehangesfstrutureandshapeintheyardialellsandvluefratininllageneredeterinedbyautatiallyquantitativerphetry;Thenentratinfaldsterne(ALD)andangitensin(Ang)fplasaandyardiuithradiiunassayeredeteted.ResultsYiqihuxuereiperestrainedleftventriulara

5、ndthendereasedllagenntentsafter8eektreatents.YiqihuxuereipentnlyrestraintheRAASativityfplasa,butalsfyardiu.nlusinYiqiHuxuereipeanreverseleftventriular,theeffetfYiqiHuxuereipeisbetterthanthatfnifedipine.BthdereasingbldpressureandrestrainingRAASativityaybetheehanisfYiqiHuxuereipereversingleftventriula

6、r.Keyrds：YiqiHuxuereipe;Essentialhypertensinithleftventriularredeling;Aldsterne;Angitensin；Hypentensin高血壓病患者約有1/3出現(xiàn)左室肥厚(LVH)，LVH是心血管系統(tǒng)疾病的一項(xiàng)獨(dú)立危險(xiǎn)因素1。心臟機(jī)械負(fù)荷過(guò)重和許多非血流動(dòng)力學(xué)因素如腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的刺激均可誘發(fā)LVH。益氣活血復(fù)方是在長(zhǎng)期臨床理論中發(fā)現(xiàn)的有一定的防治高血壓LVH作用的藥物，通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究我們發(fā)現(xiàn)，益氣活血復(fù)方可以降低胞內(nèi)游離鈣的濃度，具有鈣通道阻斷劑樣的作用2。為此，本實(shí)驗(yàn)以SHR為研究對(duì)象，觀察益氣活血復(fù)方

7、對(duì)高血壓左室肥厚的影響，并討論其可能的作用機(jī)理。1材料與方法1.1材料14周齡SHR40只，雄性，清潔級(jí)，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(答應(yīng)證號(hào)：SXK滬20220003)。實(shí)驗(yàn)藥物：硝苯地平購(gòu)自廣東華南制藥廠；益氣活血復(fù)方(當(dāng)歸、川芎、赤芍、丹參、葛根、人參、黃芪、降香等)購(gòu)自廣州二天堂醫(yī)藥公司。主要試劑：ALD、Ang放免藥盒購(gòu)自北京北方生物技術(shù)研究所。1.2方法1.2.1分組與治療實(shí)驗(yàn)大鼠采用隨機(jī)數(shù)目表法隨機(jī)分為5組：SHR空白對(duì)照組、硝苯地平組及益氣活血復(fù)方高、中、低劑量組，每組8只。硝苯地平組每日硝苯地平5.4gKg-1加蒸餾水至5l灌胃，益氣活血復(fù)方高、中、低劑量組每日分別給予益氣活血復(fù)

8、方39，13，4.3gkg-1加蒸餾水至5l灌胃，SHR空白對(duì)照組給予等量蒸餾水灌胃。治療8周后處死大鼠進(jìn)展檢測(cè)，處死前稱取體重和測(cè)量大鼠收縮壓。大鼠給予一樣的標(biāo)準(zhǔn)飼料和自來(lái)水喂養(yǎng)，飼養(yǎng)在恒溫(222)，恒濕(555)，人工光照明暗各12h的安靜飼養(yǎng)室內(nèi)。1.2.2血壓測(cè)定大鼠40預(yù)熱5in，采用RBP1B型大鼠尾壓心率測(cè)定儀中日友好臨床醫(yī)學(xué)研究所。測(cè)量大鼠安靜、清醒狀態(tài)下尾動(dòng)脈SBP(KPa)，連續(xù)測(cè)量3次，取其均值。分別于治療前，治療后4周，8周各測(cè)量1次。1.2.3心臟重量指數(shù)、左心室肥厚指數(shù)的測(cè)定以3戊巴比妥鈉行大鼠腹腔麻醉(30gkg-1)，迅速開(kāi)胸，取出心臟用4生理鹽水沖洗血污，濾

9、紙吸干水份稱取心臟重量。沿房室交界處去除心房和大血管及右心室游離壁，將左室游離壁和室間隔準(zhǔn)確稱重，作為左心室重量。心臟重量、左心室重量與動(dòng)物體重的比值分別作為心臟重量指數(shù)(HI，gkg-1)，左心室肥厚指數(shù)(LVI，gkg-1)。1.2.4心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察取左室游離壁中部橫斷面心肌組織塊留做HE染色和VG染色，置于4多聚甲醛溶液，采用Qin顯微圖像分析軟件(德國(guó)lEIa公司)進(jìn)展圖像分析。1.2.5循環(huán)血ALD，Ang濃度的測(cè)定3戊巴比妥鈉腹腔麻醉，從大鼠眼球取血4l，其中2l迅速注入放在冰水浴冷卻的酶抑制(EDTA20l，8羥基喹林20l，2巰基丙醇10l混勻)抗凝管中，搖勻，立即放回冰水

10、浴中，40，1000in離心5in，別離取血漿置于80冰箱保存。另2l注入含10l肝素的抗凝管中，方法同上。1.2.6心臟部分ALD、Ang濃度的測(cè)定取心尖組織約150g，稱重后參加0.5l/L乙酸1.5l(按照V=110)，然后在100煮沸15in，4，4000in離心20in，取上清液，置于80冰箱保存，待測(cè)心肌部分ALD、Ang。采用放免法測(cè)定ALD、Ang，批內(nèi)變異系數(shù)5，批間變異系數(shù)10。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.1.2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS10.0軟件進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以s表示，組間比擬用ANVA法進(jìn)展分析。2結(jié)果2.1各組SBP、HI、LVI的變化各治療組均能明顯降低收縮壓，與治

11、療前比擬有顯著差異(P0.05)，各治療組之間比擬差異不明顯。各組HI、LVI比擬顯示：益氣活血復(fù)方高、中劑量組及硝苯地平組低于空白對(duì)照組(P0.05)，中藥各劑量組之間存在一定的量效關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表1。表1益氣活血復(fù)方、硝苯地平對(duì)SBP、H、LV的影響略與SHR空白組比擬，P0.05，P0.01；與用藥前血壓比擬，P0.05，P0.01；與中藥低劑量組比擬，P0.05表2益氣活血復(fù)方、硝苯地平對(duì)ALD和Ang的影響略與SHR空白組比擬，P0.05，P0.01；與用藥前血壓比擬，P0.05，P0.01；與中藥低劑量組比擬，P0.012.2大鼠心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果HE染色結(jié)果顯示：空白對(duì)照組心肌

12、纖維斷裂排列紊亂，部分心肌腫脹間隙不清，有些出現(xiàn)較為明顯的大面積心肌水樣變性，心肌細(xì)胞體積增大，內(nèi)容物成顆粒狀，斷裂交融，甚至有壞死，血管壁增厚。而中藥高、中劑量組大鼠上述病變程度較輕，其中硝苯地平組也可以減輕上述心肌細(xì)胞的病理?yè)p傷，但作用不及中藥組作用明顯。VG染色結(jié)果顯示：心肌膠原呈粉紅色，肌纖維呈黃色。分布于心肌內(nèi)冠狀動(dòng)脈周?chē)蚣?xì)胞間質(zhì)呈放射狀分布?？瞻讓?duì)照組分布最多。硝苯地平組膠原有所減少，而中藥高、中劑量組膠原纖維較硝苯地平組減少更顯著。2.3循環(huán)血及心臟部分ALD、Ang濃度的變化中藥高、中劑量組循環(huán)血及部分的Ang、Ald濃度明顯低于空白對(duì)照組(P0.05)，硝苯地平組部分An

13、g和Ald濃度低于空白對(duì)照組(P0.05)。中藥高劑量組Ang和循環(huán)Ald濃度低于硝苯地平組(P0.05)，中藥高劑量組Ang濃度明顯低于中藥低劑量組(P0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。3討論中醫(yī)雖無(wú)高血壓左室肥厚之名，但歸納高血壓左室肥厚患者的臨床特征，多有年齡偏大、病程較長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作、遷延難愈的特點(diǎn)，多表現(xiàn)為心悸健忘、氣短神疲、腿軟無(wú)力、胸悶、舌質(zhì)紫暗等氣虛血淤證表現(xiàn)。因此，結(jié)合中醫(yī)“久病必虛，久病必淤的理論，我們認(rèn)為：高血壓左室肥厚主要病機(jī)是本虛標(biāo)實(shí)，氣虛血淤。故將益氣活血作為逆轉(zhuǎn)左室肥厚的主要治法，并擬定益氣活血復(fù)方。益氣活血復(fù)方主要由黃芪、川芎、當(dāng)歸、赤芍、人參、丹參、葛根、降香等組成，方中

14、重用黃芪，加強(qiáng)益氣之功；川芎、降香，活血理氣。全方補(bǔ)而不滯，活血而不傷血，共呈益氣活血之成效?，F(xiàn)代研究亦發(fā)現(xiàn)：丹參可以降低心肌部分醛固酮的含量，并能使Ang1型受體(AT1R)表達(dá)減少，可以防治SHR左室肥厚的形成35。離體研究發(fā)現(xiàn)，活血中藥丹參、川芎及其有效成分丹參素、川芎嗪可抑制Ang引起的心肌肥大并呈一定的量效關(guān)系6。在我們過(guò)去的工作中發(fā)現(xiàn)：該方能降低血淤證大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)游離鈣的濃度和血漿內(nèi)皮素含量，具有鈣通道阻斷劑樣的作用。同時(shí)，我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，益氣活血復(fù)方能減少血淤證大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，高、中、低劑量組間呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，也具有鈣通道阻斷劑樣作用。a2超負(fù)荷是心

15、肌肥厚發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。心臟容量超負(fù)荷時(shí)，機(jī)械牽張可導(dǎo)致Ang、ET1等致肥厚因子的釋放，也可直接作用于心肌細(xì)胞膜上牽張激活的離子通道7，從而使a2內(nèi)流增加，a2作為細(xì)胞內(nèi)第二信使，可通過(guò)與鈣調(diào)素結(jié)合，激活絲裂原激活的蛋白激酶(APK)，導(dǎo)致核內(nèi)原癌基因表達(dá)8，心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成增加，導(dǎo)致心肌肥厚。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，益氣活血復(fù)方可以降低血壓，并使得HI、LVI等反映LVH的敏感指標(biāo)的值明顯降低，說(shuō)明益氣活血復(fù)方能使LVH發(fā)生逆轉(zhuǎn)。我們以前的研究亦證明益氣活血復(fù)方對(duì)鈣離子通道有阻斷作用，提示這可能是益氣活血復(fù)方預(yù)防心肌肥厚的作用機(jī)理之一。在非血流動(dòng)力學(xué)因素中，RAASLVH的形成關(guān)系較為親密9。Ang不

16、僅對(duì)心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)有直接作用，還可通過(guò)增強(qiáng)交感神經(jīng)活性等途徑，促使心肌細(xì)胞肥大10。Ald可以促進(jìn)Na+H2潴留，增加血容量，進(jìn)而導(dǎo)致心肌肥厚。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：經(jīng)不同劑量益氣活血復(fù)方治療后，血漿和部分組織中Ang和Ald濃度亦有所降低，并呈明顯的量效關(guān)系。而硝苯地平僅對(duì)心臟部分的ALD、Ang濃度有明顯降低。這說(shuō)明抑制RAAS活性可能是益氣活血復(fù)方防治心肌肥厚的另一重要機(jī)理，且益氣活血復(fù)方逆轉(zhuǎn)LVH療效明顯優(yōu)于硝苯地平。參考文獻(xiàn)：1FranzH，REingardKLeftventriularhypertrphy:apressureindependentardivasularriskfatrJJ

17、ardivasPharal，1993：22.2陳利國(guó)，孫兆貴，王蕾，等血瘀證與血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究J.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，25(1)：55.3程俊彥，熊瑋，鄭智，等丹參逆轉(zhuǎn)自發(fā)性高血壓大鼠左室肥厚及其對(duì)血管緊張素受體1表達(dá)的影響J.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2022，11(2)：99.4鄭智，韓少杰，任大宏丹參對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠左室肥厚及心臟部分醛固酮的作用J.中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2002，11(1):22.5張代富，阮長(zhǎng)武，劉中民，等丹參對(duì)大鼠急性心肌缺血再灌注時(shí)心肌細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響J上海醫(yī)學(xué)，2022，26(9)：669.6郭自強(qiáng)，王碩仁，朱陵群，等益氣活血中藥對(duì)血管緊張素致培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞肥大的影響J.中西醫(yī)