實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的使用及細(xì)菌的觀察課件

1、實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 接觸到病原菌，一定要堅(jiān)持無(wú)菌操作進(jìn)實(shí)驗(yàn)室穿上白大衣，離開(kāi)時(shí)反折嚴(yán)禁飲食，也不要以手撫摸頭、面等部位若發(fā)生吸入菌液，割破手指等事故，必須報(bào)告老師接觸過(guò)菌液的吸管、玻片等器材，投入含有23%來(lái)蘇兒的容器內(nèi)實(shí)驗(yàn)完畢，整理桌面微生物實(shí)驗(yàn)要求做實(shí)驗(yàn)后要認(rèn)真完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，所得結(jié)果必須真實(shí)記錄浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱(chēng)： 實(shí)驗(yàn)類(lèi)型： 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱(chēng)： 學(xué)生姓名： 專(zhuān)業(yè)： 學(xué)號(hào)： 同組學(xué)生姓名： 指導(dǎo)老師： 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)： 實(shí)驗(yàn)日期： 年 月 日實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅ū靥睿?shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理（必填）主要儀器設(shè)備操作方法與實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄和處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（必填）討論、心得實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的使用及細(xì)菌的觀察實(shí)驗(yàn)內(nèi)

2、容操作：油鏡的使用細(xì)菌材料玻片標(biāo)本制備革蘭染色法（Gram Stain ）示教 細(xì)菌的基本形態(tài)鏈球菌螺形菌 - 弧菌（霍亂弧菌）細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)鞭毛（變形桿菌）莢膜（肺炎鏈球菌）芽胞（破傷風(fēng)梭菌）顯微鏡的使用和保護(hù) - 原理油鏡與其他物鏡的不同是載玻片與物鏡之間不是隔一層空氣，而是隔一層油質(zhì)稱(chēng)為油浸系。這種油常選用香柏油如果玻片與物鏡之間的介質(zhì)為空氣，稱(chēng)為干燥系，當(dāng)光線通過(guò)載玻片后，受折射發(fā)生散射現(xiàn)象，進(jìn)入物鏡的光線顯然減少，這就降低了視野的照明度香柏油的折射率n1.515，與玻璃n1.52相近。當(dāng)光線通過(guò)載玻片后，可直接通過(guò)香柏油進(jìn)入物鏡而不發(fā)生折射油浸沒(méi)物鏡 介質(zhì)：空氣；香柏油油鏡的使用先按

3、低倍鏡到高倍鏡的操作步驟找到物像，并將觀察部分移至視野的中央。 轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)盤(pán)，使高倍鏡移向一側(cè)，在蓋玻片上滴一滴香柏油，然后將油鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔，使油鏡下端與香柏油接觸(注意操作動(dòng)作要慢，以免壓碎玻片或損壞鏡頭)。 從目鏡內(nèi)觀察，微微上下轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器，至視野內(nèi)出現(xiàn)清晰的物像時(shí)為止。 油鏡使用完畢后，必須用拭鏡紙沾少許二甲苯將油鏡上的香柏油擦凈，并用干的拭鏡紙檫去二甲苯。顯微鏡用畢后，升高鏡簡(jiǎn)，取下玻片標(biāo)本，轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)盤(pán)，使每個(gè)物鏡都不對(duì)準(zhǔn)通光孔，再下降鏡筒，使物鏡接近載物臺(tái)，將聚光鏡降下，最后放回櫥內(nèi)。 細(xì)菌材料玻片標(biāo)本制備涂片-干燥-固定涂片：先取一接種環(huán)生理鹽水放于載玻片的一端，左手持菌液試管，右

4、手持接種環(huán)，用接種環(huán)從試管培養(yǎng)液中挑取少許大腸桿菌或葡萄球菌培養(yǎng)物與鹽水混勻，涂成直徑約1厘米的涂片，涂片應(yīng)薄而均勻。干燥：涂片最好放置室溫中，待其自然干燥。固定：手執(zhí)玻片的一端標(biāo)本面向上，在火焰外層較快地來(lái)回通過(guò)三次，約23秒，以玻片反面觸及皮膚，以不覺(jué)過(guò)分地燙為度。待放置冷卻后，進(jìn)行染色。掌握無(wú)菌操作拔或塞試管帽時(shí)，應(yīng)將試管口通過(guò)火焰略加燒灼；接種環(huán)使用前后應(yīng)在火焰上燒灼滅菌固定的目的殺死微生物，固定其細(xì)胞結(jié)構(gòu)保證菌體能牢固地粘附在載玻片上，以免水洗時(shí)被水沖掉改變菌體對(duì)染料的通透性，一般死細(xì)胞原生質(zhì)容易著色。革蘭染色法原理G菌胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易透入。同時(shí)乙醇使細(xì)

5、胞壁脫水形成一道屏障，阻止結(jié)晶紫碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出，故細(xì)菌仍保留初染時(shí)的紫色。G菌胞壁結(jié)構(gòu)較為疏松，肽聚糖層很薄，外膜含大量脂質(zhì)，易被乙醇溶解，致使細(xì)胞壁通透性變大，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被乙醇溶解析出而脫色，故細(xì)菌呈復(fù)染時(shí)的紅色革蘭染色結(jié)果 - 陽(yáng)紫陰紅凡能固定結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物,而不易被酒精脫色,仍保留紫色,稱(chēng)為革蘭陽(yáng)性菌. 凡易能被酒精脫色,再經(jīng)復(fù)染成紅色的細(xì)菌,稱(chēng)為革蘭陰性菌 陽(yáng)球陰桿，腦、淋、白、胞、抗例外仔細(xì)觀察（染色性，形態(tài)，排列），繪圖革蘭染色的意義鑒別細(xì)菌：鑒別G+, G-,初篩標(biāo)本選擇用藥致病物質(zhì)大多 G+外毒素，G- 內(nèi)毒素示教 - 細(xì)菌的基本形態(tài)細(xì)菌從形態(tài)上分，主要有球菌、桿菌、螺形菌三種。鏈球菌的示教片霍亂弧菌的示教片示教 - 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)：芽胞、莢膜、鞭毛，另一種菌毛在電鏡下才可以見(jiàn)到。芽胞增強(qiáng)細(xì)菌對(duì)不良環(huán)境的抗性；莢膜抗吞噬、抗損傷、抗干燥；鞭毛運(yùn)動(dòng)器官