微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(8)講稿

1、關(guān)于微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) (8)第一張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類等無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞第二張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(1)根據(jù)你所掌握的知識(shí)，分析導(dǎo)致生產(chǎn)失敗的根源是什么? (2)由此可見(jiàn)，研究和應(yīng)用微生物的前提是什么？根源在于發(fā)酵物中混入了雜菌 防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物 第三張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、培養(yǎng)基微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽碳源無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自

2、養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源第四張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、培養(yǎng)基微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽碳源無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源第五張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1.基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽2.特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏

3、、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無(wú) 凝固劑瓊脂分離 鑒定工業(yè) 生產(chǎn)化學(xué)成分：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基第六張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基第七張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月加

4、入青霉素的培養(yǎng)基:不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基: 不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基: 幾種選擇培養(yǎng)基舉例：分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌 分離自養(yǎng)型微生物唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基分解纖維素的細(xì)菌第八張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g分析營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？第九張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5. 配制原則目的明確：營(yíng)養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)適宜的pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加

5、入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產(chǎn)科研第十張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月耐高溫需保持干燥的 物品，160170 12小時(shí)接種環(huán)、接種針等 金屬用具7075、30min 80、15min100、56min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121、1530min防止外來(lái)雜菌的污染1.消毒與滅菌：二、無(wú)菌技術(shù)第十一張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅

6、菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思考第十二張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.無(wú)菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程二.無(wú)菌技術(shù)：防止外來(lái)雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺(tái)第十三張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落3.功能：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體1.定義：第十四張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1000m

7、l牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解取紙蛋白胨、NaCl瓊脂補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿第十五張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月倒平板約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基第十六張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：平板劃

8、線法：菌種劃3個(gè)平板1個(gè)不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對(duì)照）四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)第十七張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十八張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月平板劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，為什么？一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。第二十張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月問(wèn)題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步

9、灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第二十一張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月問(wèn)題討論2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到

10、由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。第二十二張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量 移液器第二十三張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二十四張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過(guò)0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍第二十五張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月平板劃線法：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：1.接種：稀釋涂布平

11、板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h后，觀察并記錄四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)第二十六張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月五、課題成果評(píng)價(jià) 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）

12、是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄第二十七張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1.臨時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上42.長(zhǎng)期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油1ml菌液20六、課題延伸（菌種的保藏）第二十八張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月本課題知識(shí)小結(jié)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)培養(yǎng)基無(wú)菌技術(shù)制備牛肉蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌結(jié)果分析與評(píng)價(jià)培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)避免雜菌污染的方法實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法平板劃線法稀釋涂布法（步驟）第二十九張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月【典例解析】例1:關(guān)于微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是( ) A.是碳源的物質(zhì)不可能

13、同時(shí)是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽 D.無(wú)機(jī)氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于A、B選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對(duì)于C選項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而NaCl則只能提供無(wú)機(jī)鹽。對(duì)于D選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。D第三十張，PPT共三十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月例2：下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是( ) A.防止雜菌污染 B.消滅雜菌 C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.滅菌必須在接種前解析：滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A說(shuō)的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)